曹利
- 作品数：41 被引量：141H指数：9
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Tet调控的脑相对特异性新基因LRRC4表达细胞系的构建被引量：1
- 2005年
- LRRC4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员,在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能. 利用Tet-on基因表达系统,经过两轮转染,先后将调控质粒pTet-on和表达质粒pTRE-2hyg-LRRC4转染U251细胞系,分别用G418和潮霉素Hygromycin进行两次筛选. 在第一轮挑取的80个克隆中,利用pTRE-2hyg-luciferase报告基因进行最佳的低背景高表达的pTet-on细胞克隆筛选,在通过量效关系和动力学检测筛选的最佳克隆基础上,再进行pTRE-2hyg-LRRC4的转染,并通过RT-PCR和RNA印迹检测,成功获得了两个具有良好诱导性Tet调控的LRRC4双稳定表达细胞系,为进一步阐明LRRC4在脑胶质瘤发生发展中的作用,提供有利的研究基础和理想的实验平台.
- 张秋红王莉莉彭聪曹利王洁如李小玲李桂源
- 关键词：LRRC4DOXYCYCLINE
- 裂解性复制诱导产生可视化重组Epstein Barr病毒
- 本文为了在病毒的整个基因组中研究基因的功能,分析基因与基因之间的相互作用,将含有野生型的整个EB病毒(EBV)基因组的BAC-EBV质粒(p2089)转染至EBV阴性的HEK293细胞,经潮霉素筛选建立了HEK293/p...
- 唐运莲唐珂李桂源卢建红武明花黄琛曹利彭淑平周艳宏李小玲周鸣
- 关键词：EB病毒基因功能病毒重组
- 文献传递
- LRRC4通过LRR结构域抑制脑胶质母细胞瘤U251细胞的生长和侵袭被引量：2
- 2007年
- LRRC4基因是候选的脑胶质瘤抑制基因,其细胞外区域含有一个保守的LRR和一个IgC2结构域.本研究结合生物信息学分析,通过一步PCR法构建了不同结构域缺失的突变体(pcΔLRR,pcΔIgC2或pcΔTm).并将全长LRRC4(pcLRRC4)和各突变体转染至U251细胞,构建了稳定表达的U251细胞系.通过MTT,软琼脂集落形成及Transwell体外侵袭模型检测发现,全长LRRC4能够抑制U251细胞的生长和侵袭;LRR结构域缺失的突变体不再抑制U251细胞的生长和侵袭;而IgC2或Tm区缺失的突变体仍然可以抑制U251细胞的生长和侵袭.该结果表明,LRRC4抑制U251细胞的生长和侵袭依赖于它的LRR结构域,而不是IgC2或Tm结构域.
- 武明花唐运莲李小玲曹利李桂源
- 关键词：脑胶质瘤U251细胞
- 一种生物标志物——荧光硅纳米颗粒的制备方法
- 一种荧光硅纳米颗粒的制备方法。本发明运用OP－10/环已烷/氨水微乳液自组装体系，在硅纳米颗粒网状聚合的过程中将荧光素、罗丹明等荧光染料嵌入其中，制备出不同粒径大小(20－200nm)，分布均匀，形态规则，表面光滑圆润，...
- 李桂源朱诗国向娟娟吕红斌李小玲沈守荣周洁聂新民张必成周鸣曹利
- 文献传递
- 新克隆的硝基还原酶基因NOR_1的表达及其产物的纯化被引量：9
- 2003年
- 背景与目的:NOR1是与鼻咽癌密切相关的抑瘤/易感基因候选者之一,本实验旨在构建NOR1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化NOR1基因所编码的蛋白。方法:抽提人鼻咽正常组织中总RNA,利用RT-PCR扩增NOR1基因全长,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后插入同样经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后的pGEX-4T-2质粒,构建表达载体pGEX-4T-2/NOR1重组表达质粒;转化大肠杆菌Jm105,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(isopropyl-thiogalactoside,IPTG)诱导pGEX-4T-2/NOR1/Jm105表达GST融合蛋白后,采用Westernblot验证,并用GST琼脂糖亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。结果:酶切鉴定和测序验证成功地构建了NOR1基因原核表达载体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulphatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE)分析在大肠杆菌Jm105中成功诱导表达了一分子质量约为74kDa的融合蛋白;该融合蛋白存在于细菌裂解液的上清和沉淀中,Westernblot证实表达获得了成功;并利用亲和层析法获得了纯化蛋白。结论:成功获得了高效表达NOR1基因的原核表达产物,通过对该融合蛋白的纯化为它的多抗制备奠定了基础。
- 聂新民肖炳李小玲张必成李伟芳王蓉曹利李桂源
- 关键词：鼻咽肿瘤RT-PCR肿瘤生物学
- 全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖分化的影响
- 2008年
- 目的:研究全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响。方法:用5 mg/L全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导C6胶质瘤细胞,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验绘制细胞生长曲线以考察ATRA对细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪、光镜、透射电镜和免疫组织化学染色鉴定细胞的分化状况。结果:C6胶质瘤细胞经全反式维甲酸诱导后,细胞增殖受到明显抑制,并且密度明显减少(P<0.01)。细胞周期受阻,G0/G1期延长,S期细胞比例明显减少(P<0.01)。光镜观察到诱导前的C6胶质瘤细胞呈正常的成纤维细胞形态,而诱导后的C6胶质瘤细胞变细长,中间呈圆形或卵圆形,两端形成长尖突起。流式细胞仪的凋亡率检测显示,未见明显的凋亡;透射电镜观察显示,细胞有早期凋亡改变,且胞浆内空泡增多,线粒体和内质网丰富,细胞结构基本趋向正常。C6胶质纤维酸性蛋白表达明显增强。结论:全反式维甲酸能抑制胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化。
- 唐珂曹利范松青武明花黄河周艳宏周鸣唐运莲王蓉曾芳廖萍李小玲李桂源
- 关键词：分化全反式维甲酸胶质纤维酸性蛋白胶质瘤
- 一种细胞芯片制作方法及其器具
- 本发明涉及一种细胞芯片。细胞芯片的制作方法为细胞固定、脱水、透明后，将经透明处理后的细胞置于一定规格的条形模具中浸蜡制成条状石蜡细胞芯条，然后直接将一定长度的条状石蜡细胞芯条按序放置于受体石蜡块中，利用胶带转移辅助系统进...
- 李桂源范松青周洁肖炳燚熊炜曹利欧阳珏李伟芳唐珂
- 文献传递
- 维甲酸对鼻咽癌细胞生长、表型和瘤基因表达的作用被引量：1
- 1998年
- 研究了维甲酸（ＲＡ）对鼻咽癌细胞生长、表型和癌基因表达的作用．用ＲＡ诱导鼻咽癌细胞，绘制诱导前后的细胞曲线，观察细胞形态，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＤＮａｓｅⅠ超敏感区分析法检测基因表达和调控．结果表明，ＲＡ能显著抑制鼻咽癌细胞的生长，前５ｄ下降约５０％．ＲＡ处理后的细胞从典型的多边形形态变成扁平、细长，类似纤维细胞状的形态．ＲＡ诱导前ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因ＨＮＥ２细胞中高表达，而诱导后ｃ－ｍｙｃ基因表达水平急剧下降，ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因无明显改变．在实验中还发现ＲＡ诱导前后的ｃ－ｍｙｃ基因和ｃ－Ｈａ－ｒａｓ基因中一些重要的超敏感位点和它们的功能．由实验结果可得到如下结论：ＲＡ能促进鼻咽癌细胞分化，通过对染色体上调控位点的作用来抑制ｃ－ｍｙｃ基因的表达，ＤＮａｓｅⅠ超敏感位点与细胞的分化程度、细胞的组织特异性和基因表达状态有关，ｃ－ｍｙｃ基因可通过不同的调控方式而失活．
- 江宁曹利张询姚开泰李桂源
- 关键词：鼻咽癌诱导分化癌基因
- 一种检测多癌风险易感性的方法及试剂盒
- 本发明公开了一种检测多癌风险易感性的方法及试剂盒，包括检测与多癌家系发生关联的AADAC基因启动子区的两个SNP位点rs16833935和rs8193024的特定基因型，rs16833935特定基因型包括阴性基因型cc和...
- 肖岚李桂源武明花张文玲周艳宏曹利曾朝阳熊炜谭世明
- 文献传递
- 利用全基因组表达谱筛查鼻咽癌分子标志物
- 本文为了寻找鼻咽癌的分子标志物,在鼻咽癌全基因组表达谱分析的基础上利用监督聚类方法筛选到的100个鼻咽癌差异表达基因,然后使用Weighted Voting算法最终筛选到6个基因,包括鼻咽癌上调基因RB1,STMN1,D...
- 周艳宏李桂源曾朝阳熊炜李小玲肖岚张文玲武明花曹利李伟芳
- 关键词：鼻咽癌分子标志物
- 文献传递
