朱庆平
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 赖型钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA的表达及其促细胞增殖效应被引量：1
- 2004年
- 目的 在大肠杆菌中表达赖型钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA ,并观察该蛋白对ANA 1细胞的增殖作用。方法 将invA基因克隆于pET32a(+)载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达带组氨酸标签的Trx InvA融合蛋白 ,经亲和层析获得纯化Trx InvA蛋白。以不同浓度的Trx InvA融合蛋白作用于ANA 1细胞 ,以四氮唑复合物 [2 ,3 bis(2 methoxy 4 nitro sulfophenyl) 5 〔(Phenylamino)carbonyl〕 2H tetrazoiumhydrixide,XTT]法检测细胞增殖的变化 ,分析InvA蛋白的细胞功能。结果 成功构建pETIN VA原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中表达了相对分子质量 (Mr)约为 35× 10 3的Trx InvA融合蛋白 ,该蛋白能促进ANA 1细胞的增殖。结论 表达并纯化的Trx
- 朱庆平鲍朗张会东赵计林龙洋吴悦涵赵明才
- 关键词：原核表达载体细胞增殖相关蛋白ANA钩端螺旋体
- 结核分枝杆菌免疫相关蛋白PPE68的表达及免疫原性的研究
- 2005年
- 目的:克隆、表达结核分枝杆菌PPE家族蛋白PPE68的编码基因Rv3873,并初步探索PPE68诱导Balb/c小鼠脾淋巴细胞的增殖活性,为进一步研究PPE68的免疫功能提供实验依据。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,PCR扩增Rv3873基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pET32a(+),获得重组表达质粒,转化大肠杆菌后用IPTG进行诱导表达,纯化表达产物,通过XTT比色法检测重组蛋白PPE68诱导脾淋巴细胞的增殖活性。结果:重组质粒pETRv3873构建成功,57kDa的His-PPE68融合蛋白在大肠杆菌中稳定表达,并具有刺激Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖的功能。结论:PPE68蛋白具有较强的免疫原性,其免疫学功能具有进一步研究的价值。
- 王晓琳鲍朗朱庆平龙洋张会东钟琪
- 关键词：PPE68免疫原性结核分枝杆菌
- 赖型钩端螺旋体017株外膜蛋白新基因ompL17基因靶向敲除及其突变株的构建被引量：5
- 2005年
- 目的将外膜蛋白新基因ompL17靶向敲除并构建该基因的突变株。方法提取钩端螺旋体017株基因组DNA,扩增出外膜蛋白新基因ompL17,与打靶载体p2NIL重组,并插入氨苄抗生素抗性基因Ampr+使外膜蛋白新基因ompL17失活,构建重组的基因打靶质粒p2NIL17A。电穿孔转化入钩体017株中构建突变株,通过豚鼠模型观察该突变株的毒力变化。结果PCR、Dotblot和酶切分析,证实构建了以氨苄青霉素抗性基因DNA为标记探针的基因打靶载体,并构建外膜蛋白新基因ompL17敲除的钩体017株突变株。结论成功将钩体外膜蛋白的新基因ompL17进行靶向敲除,并构建钩体017株突变株,为进一步进行该基因的功能研究和阐明赖型钩体致病的分子机制奠定了基础。
- 张会东鲍朗赵计林朱庆平李娅莎
- 关键词：钩端螺旋体基因打靶突变株赖型钩端螺旋体新基因靶向
- 中国强毒赖型钩端螺旋体新基因OmpL17的表达及其免疫原性被引量：2
- 2005年
- 将Omp L17基因克隆于p GEX- 1λT载体,在大肠杆菌JM10 9中表达分子量约为5 4 KDa的GST-Omp L17融合蛋白,凝血酶切割后得到了大小约2 8KDa的Omp L17蛋白。用纯化的Omp L17蛋白免疫大白兔,制备了高滴度的特异性抗体(1∶4 896 )。本研究获得了纯化的Omp L17及其特异性抗体,为该外膜蛋白致病作用及免疫保护力研究奠定基础。
- 朱庆平赵计林鲍朗张会东赵明才黎光
- 关键词：GST融合表达免疫原性赖型钩端螺旋体新基因特异性抗体
- 赖型钩端螺旋体致病相关基因invA的克隆、表达及其功能研究
- 钩体为广泛流行的人兽共患病—钩体病的病原体。目前，对钩体的致病及免疫分子机理的认识不甚清楚。赖型钩体56601株及哥本哈根株基因组测序表明，约60％的钩体预测基因的功能未知。因此，钩体的重要致病及免疫相关基因功能急需加强...
- 朱庆平
- 关键词：钩端螺旋体细胞增殖效应穿梭载体赖型钩体
- 结核分枝杆菌免疫优势抗原ESAT-6真核表达载体的构建及蛋白表达的鉴定被引量：4
- 2004年
- 目的 克隆并表达结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6的编码基因 ,为研究其免疫功能奠定基础。方法 以结核分枝杆菌H37Rv株基因组为模板 ,用PCR对ESAT 6基因进行扩增 ,扩增产物克隆到真核表达载体pcDNA3 1/Zeo( +)中。对重组表达载体pcDNA ESAT 6进行酶切、PCR及测序鉴定。经鉴定无误的重组质粒用DEAE 葡聚糖法转染COS 7细胞 4 8h后 ,用Trizol法提取转染细胞总RNA进行RT PCR鉴定。结果 重组质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,并能在COS 7细胞中有效表达。结论 结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶ESAT 6真核重组表达质粒pcDNA ESAT 6构建成功 ,为进一步研究ESAT 6和CFP 10的免疫原性。
- 龙洋鲍朗吴悦涵赵明才曾献武张会东朱庆平
- 关键词：结核分枝杆菌免疫学ESAT-6真核表达载体蛋白表达
- 钩端螺旋体InvA蛋白的制备及其用途
- 本发明属于生物技术和医学领域。具体地说，本发明涉及钩端螺旋体蛋白InvA(invasion associated protein)。本发明的InvA蛋白与钩体的致病力有关，并具有促进细胞增殖的作用。可用于开发相关基因工程...
- 鲍朗朱庆平张会东
- 文献传递
- 大肠杆菌-钩端螺旋体重组穿梭质粒pGKINVA的构建及重组钩体的筛选
- 2007年
- 目的构建大肠杆菌-钩体穿梭质粒pGK INVA,并重组于钩体PatocⅠ株,为进一步确定钩体invA基因的功能奠定基础。方法将invA基因克隆于pGK b le24载体,PCR、限制性内切酶双酶切及测序鉴定重组穿梭质粒pGK INVA。质粒pGK INVA经电穿孔法转化无毒钩体PatocⅠ株,并筛选重组钩体菌株。结果从钩体基因组中克隆出长558 bp的invA基因,定向插入pGK b le24构建重组穿梭质粒pGK INVA,抗生素及蓝/白斑筛选和测序鉴定并获得正确的重组质粒后,电穿孔法转化钩体PatocⅠ株,在K orthof固体培养基生长并抗生素筛选、PCR鉴定出重组钩体菌株。结论成功构建重组大肠杆菌-钩端螺旋体穿梭质粒pGK INVA,并筛选出2个重组钩体菌株,将有助于进一步阐明invA基因在钩体体内中的功能分析。
- 朱庆平鲍朗张会东赵明才
- 关键词：钩端螺旋体
- 新型钩端螺旋体疫苗
- 新型钩端螺旋体疫苗，是以钩端螺旋体外膜蛋白Lslp制备的基因工程蛋白疫苗，能有效的预防钩端螺旋体的感染，可用于预防钩端螺旋体病。
- 鲍朗朱庆平张会东
- 文献传递
- 一种钩端螺旋体外膜蛋白疫苗
- 本发明涉及钩端螺旋体外膜蛋白OmpL17(outermembrane protein L17)，该外膜蛋白具有较强的免疫原性和免疫保护性，能产生特异性保护抗体。本发明的外膜蛋白OmpL17可用于制备钩端螺旋体疫苗，广泛应...
- 鲍朗张会东朱庆平
- 文献传递
