樊游
- 作品数：34 被引量：102H指数：6
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省科技支撑计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程文化科学更多>>
- 16S rDNA序列在大批量细菌分离物分子鉴定中的应用研究被引量：3
- 2013年
- 利用16S rDNA序列同源性分析法对保藏于中国高校工业微生物资源与信息中心(CICIMCU)的3 726株细菌分离物进行了分子鉴定。实验结果显示:其中3 073株细菌分离物可被成功鉴定至种一级水平,分属于210个种,45个属,占整个细菌分离物的82.5%;其余653株细菌分离物可鉴定到属一级,占整个细菌分离物的17.5%。研究中也发现,16S rDNA序列在芽孢杆菌属(Bacillus)和土芽孢杆菌属(Geobacillus)等少数菌属中的部分种间鉴定的敏感性不高。上述结果表明16S rDNA序列在大多数细菌种属鉴定中具有较高的特异性和敏感性,可以作为第一轮分子标识用于大批量细菌分离物的鉴定。
- 陈源源沈微樊游陈献忠Suren Singh石贵阳王正祥
- 关键词：RDNA序列
- 大肠杆菌副产物合成途径删除提高外源蛋白表达水平
- 2014年
- 大肠杆菌是应用最广泛的外源基因表达宿主。为探索阻断副产物产生途径对提高大肠杆菌表达外源蛋白的能力,本实验以野生型大肠杆菌菌株为基础,删除其乳酸脱氢酶基因(ldhA),磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因(pps)和丙酮酸甲酸裂解酶基因(pflB)。在此基础上,以甘露聚糖酶基因man为报告基因,考察阻断以上代谢途径对大肠杆菌产酶能力的影响。结果显示,以上述三个基因叠加删除的三重突变株为宿主时,重组茵产酶水平最高,比酶活达到158.3 U/mg,相比野生出发菌株提高82.3%。
- 夏颖沈微周丽陈献忠樊游王正祥
- 关键词：大肠杆菌基因删除蛋白表达
- 麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的分泌表达被引量：5
- 2011年
- 采用重叠PCR方法在麦芽糖α-淀粉酶编码基因5’端添加地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因信号肽编码区,获得重组基因BlMa。重组基因与芽孢杆菌表达载体pHY-P43连接后直接转化枯草芽孢杆菌,获得重组质粒pHY-P43-BlMa。枯草芽孢杆菌淀粉酶基因缺陷株1A717被用作BlMa基因表达宿主菌,重组菌命名为Bacillus subtilis/pHY-P43-BlMa。酶活检测和SDS-PAGE电泳均显示,B.subtilis/pHY-P43-BlMa表达的重组麦芽糖淀粉酶(BlMa)全部分泌到培养液中。HPLC检测表明,BlMa催化可溶性淀粉水解产物主要为麦芽糖。对B.subtilis/pHY-P43-BlMa摇瓶发酵条件进行优化。获得优化发酵培养基配方:10%玉米淀粉,2.5%药媒,0.3%(NH4)2SO4,0.03%CaCl2,0.1%NaH2PO4,在优化条件下重组菌发酵酶活为5.9 U/mL。
- 沈微俞玲陈献忠樊游王正祥
- 关键词：分泌表达枯草芽孢杆菌
- 表面展示表达果胶酯酶的重组酿酒酵母构建及乙醇发酵被引量：1
- 2016年
- 【目的】以淀粉为原料的乙醇发酵工艺仍然是当前燃料乙醇的主要生产方式。然而,一些原料中含有的果胶物质不仅降低了乙醇产率,而且会导致醪液粘度增大,从而会进一步影响传质和传热、增加设备负担等。构建能够自主降解果胶质的重组酿酒酵母并应用于燃料乙醇生产是值得探索的领域。【方法】论文将来源于黑曲霉的果胶酯酶基因克隆于α因子信号肽下游并通过酵母α-凝集素C-端蛋白的介导构建了在细胞表面锚定表达果胶酯酶的重组酿酒酵母PE。【结果】重组酵母的果胶酯酶表达水平达到2.6 U/g(菌体湿重),并进一步鉴定了重组果胶酯酶性质。以甘薯粉为原料的同步糖化发酵实验中,重组酵母PE的乙醇浓度和乙醇转化率分别达到95 g/L和88.1%,与出发菌株相比提高了2.2%。更重要的是,表面展示果胶酯酶能够显著降低发酵过程中的发酵液粘度。【结论】通过在工业酿酒酵母表面展示表达果胶酯酶不仅能够提高糖化酶等的作用效果和酿酒酵母的代谢能力,而且能够显著降低乙醇生产过程中发酵液的粘度,将对工业规模乙醇生产在降低设备负担、节约能耗方面具有一定的潜在价值。
- 陈献忠肖艳沈微樊游
- 关键词：生物燃料酿酒酵母果胶酯酶粘度乙醇
- 代谢工程改造大肠杆菌生产乳酸的研究进展被引量：4
- 2017年
- 乳酸是自然界中最小的手性分子,广泛应用于食品、医药和化工等领域,同时也是合成生物可降解塑料——聚乳酸的前体。目前,化学合成法和微生物发酵法是生产乳酸的两种主要方法,而后者在底物的可再生性、产物光学纯度和环境友好等方面均具有潜在优势。自然界中许多微生物细胞都能合成和积累乳酸,如大肠杆菌、酿酒酵母和乳酸菌等。与乳酸菌、芽胞乳杆菌和谷氨酸棒状杆菌等乳酸生产菌株相比,大肠杆菌具有生长速度快、营养要求简单、易于高密度发酵、代谢网络清楚、遗传操作方法成熟和产物乳酸光学纯度高等优势。本文中,笔者介绍了乳酸的研究现状及其在工业生产领域中的作用,系统综述了国内外通过代谢工程改造大肠杆菌生产乳酸的研究进展,在此基础上展望了乳酸生产研究的发展方向,以期为其工业应用提供参考。
- 张利华陈献忠沈微樊游
- 关键词：大肠杆菌乳酸代谢工程细胞工厂
- 食具镉污染检测的新光度方法被引量：2
- 2003年
- 通过对新试剂2,6-二甲苯基重氮氨基偶氮苯与镉显色反应研究,建立了检测食具镉污染的新方法 在0 2mol/L的氨水介质中,镉可与2,6-二甲苯基重氮氨基偶氮苯发生灵敏的显色反应,生成物质的量比为1∶3红色配合物,配合物最大吸收峰位于522nm,表观摩尔吸光系数达2 03×105L/(mol·cm);在室温下,显色反应立即完成,而配合物吸光度可以稳定24h以上 25mL标准溶液中Cd(Ⅱ)含量为0～12μg服从比耳定律,在不加任何掩蔽剂的条件下,常见金属离子有较大的允许量 与其它试剂相比,2,6-二甲苯基重氮氨基偶氮苯与镉的显色反应在灵敏度和选择性方面均有明显地改进,用于实际样品的分析。
- 李秋萍刘忠云樊游
- 关键词：光度法食具
- 酿酒酵母表面展示β-淀粉酶及其酶学性质研究被引量：1
- 2012年
- 通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因,将其与酿酒酵母细胞壁蛋白α凝集素基因在读框内融合,构建得到表面展示载体pBA-AG,进一步将该重组质粒通过遗传转化,整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中,获得了β-淀粉酶经过α凝集素锚定信号结合到细胞壁上的重组酵母。重组酵母表面展示的β-淀粉酶活力为131U/g干细胞。对展示的β-淀粉酶酶学性质研究表明,其最适反应温度为50℃,最适作用pH为5.0,与游离酶相比,其温度稳定性和pH稳定性均得到提高。本研究利用α凝集素系统首次将β-淀粉酶成功展示在酿酒酵母表面,为以酿酒酵母为基础的全细胞催化剂研究与应用打下了一定基础。
- 杨华樊游沈微石贵阳SurenSingh王正祥
- 关键词：酿酒酵母Β-淀粉酶全细胞催化
- 代谢工程改造大肠杆菌合成酪醇被引量：2
- 2019年
- 酪醇是一种天然存在于橄榄油、酒及绿茶中的酚类化合物。由于酪醇具有抗炎症和抗氧化的生理活性,因此广泛应用于医药、化工等工业领域。传统的酪醇生产方法是化学合成法,但是这些方法存在着工艺复杂、得率低和环境污染等问题。另外,植物中较低的酪醇含量也限制了酪醇的分离纯化工艺研究。因此微生物发酵法生产酪醇研究越来越受到重视。通过在大肠杆菌内异源表达酿酒酵母中的丙酮酸脱羧酶基因ARO10,成功构建了合成酪醇的重组大肠杆菌。通过敲除预苯酸脱水酶编码基因pheA和苯乙醛脱氢酶编码基因feaB,提高了酪醇的合成能力。在最适的培养条件下,过表达ARO10基因的重组菌利用10 g/L葡萄糖作为碳源,发酵48 h酪醇产量可达4.15 mmol/L。研究发现,发酵培养基中外源添加酪氨酸能够提高重组大肠杆菌的酪醇合成能力。同时,研究还发现在大肠杆菌细胞中存在能够催化酪氨酸合成酪醇的前体物质4-羟基苯丙酮酸的酶。为工业水平微生物发酵法合成酪醇提供了思路。
- 薛宇翔陈献忠杨翠沈微樊游
- 关键词：酪醇丙酮酸脱羧酶大肠杆菌基因敲除
- 代谢改造热带假丝酵母发酵木糖母液生产木糖醇被引量：3
- 2017年
- 木糖醇是一种在食品、医药、轻工等领域具有广泛用途的多元醇,目前主要通过酸水解木聚糖获得木糖并进一步化学催化加氢方法制备。提取木糖过程中会产生大量的木糖母液副产物,其中含有一定浓度的葡萄糖、木糖、阿拉伯糖等碳源,以及少量的糠醛、四氢呋喃等物质。研究微生物转化木糖母液生产高附加值化学品不仅能够提高木糖母液的利用价值,而且能够减少环境污染。热带假丝酵母不仅能够利用葡萄糖,也具有高效的木糖代谢途径。首先利用代谢工程技术删除了热带假丝酵母菌株的木糖醇脱氢酶基因,获得能够转化木糖积累木糖醇的突变株。在此基础上,评价了突变株在木糖母液培养基中的发酵性能。通过单因素优化实验确定了突变株发酵生产木糖醇较优的发酵工艺:培养基组成为木糖母液300g/L,玉米浆5g/L;最佳发酵条件为:发酵温度35℃,初始p H为5.0,接种量15%,200r/min摇床培养140h。利用优化后的发酵工艺,木糖醇产量达到83.01g/L。初步建立了转化木糖母液生产木糖醇的工艺,为进一步利用木糖母液奠定了基础。
- 陈振陈献忠张利华王均华沈微樊游
- 关键词：热带假丝酵母木糖醇木糖母液基因删除发酵
- 扣囊复膜孢酵母α-淀粉酶基因在乳酸克鲁维酵母中的表达与重组酶性质被引量：5
- 2014年
- 通过PCR方法从扣囊复膜孢酵母基因组DNA中克隆获得α-淀粉酶基因成熟肽编码区(SfA),插入乳酸克鲁维酵母表达载体pKLACl的α因子信号肽下游,构建重组表达载体pKLAClSfA。重组载体转化乳酸克鲁维酵母GG799,筛选获得表达α-淀粉酶SfA水平较高的重组菌。酶活检测和SDS-PAGE电泳检测均显示,重组菌分泌重组酶SfA到发酵液中。酶学性质研究表明:SfA最适温度为45℃,最适pH5.0,在pH4.5~5.5、50℃条件下保持稳定。Ca^(2+)等二价金属离子对SfA酶活有激活作用,EDTA强烈的抑制SfA活性。HPLC分析显示SfA水解糊精获得麦芽寡糖和少量葡萄糖,其中麦芽三糖是主要产物,占水解产物总量的52%。
- 郭玉婉沈微王一恬樊游陈献忠王正祥
- 关键词：乳酸克鲁维酵母麦芽三糖
