江娜
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：安徽农业大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- E.coliT蛋白CM的原核表达及核磁方法指导下的晶体优化
- 2013年
- 越来越多的研究表明许多致病菌的病原性与生物体内莽草酸途径中的分支酸变位酶(chorismate mutase,CM)有着密切的关系,因此CM成为了开发新型抗生素和抗菌药物的热门靶标酶。采用分子克隆的方法,在感受态细胞BL21-Gold(DE3)中重组表达大肠杆菌(E.coli)T蛋白的CM(CM T)。通过Ni-NTA亲和层析柱、GE Superdex75凝胶过滤层析柱和GE MonoQ阳离子交换层析柱纯化后得到电泳纯的重组蛋白,质谱鉴定结果与原始序列基本吻合。经过蛋白质晶体试剂盒的初步筛选,在30%PEG 4000,100mmol/L NaAc pH4.6,200mmol/L NH4Ac条件中发现CM T晶体。利用核磁共振方法,分析CM T的1H-15N HSQC谱图信息,指导设计CM T晶体的优化方案,成功获得高衍射能力的CM T晶体,为CM T结构的解析奠定了坚实的基础。
- 芮斌谢长林江娜文汉
- 关键词：CMT原核表达HSQC
- 人源EFA6A蛋白Sec7结构域的克隆表达与纯化
- 2013年
- 作为小GTP酶Arf6的鸟甘酸交换因子(GEF),人EFA6A蛋白主要包含PH和Sec7两个结构域,Sec7是行使GEF功能的核心区域。通过分析Jpred、Uniprot等生物信息学软件的预测结果,从全长1 024 aa中选取的重组Sec7结构域的边界为506-719,共214 aa。以人脑cDNA文库为模板,通过优化PCR程序成功扩增出Sec7基因,经NdeI和XhoI双酶切后亚克隆至原核表达载体p28a中,成功构建p28-Sec7重组子,测序结果与NCBI中公布的序列100%吻合。将重组质粒p28-Sec7转化至BL21-Gold(DE3)宿主菌中,终浓度0.3 mmol/L IPTG、16℃、24 h诱导表达,重组蛋白经过Ni柱和分子筛两步纯化。试验结果显示,重组Sec7成功表达,性质均一,纯度高于95%,表达量为70 mg/L。
- 谢长林芮斌江娜赵晨唐雅珺文汉
- 关键词：分子筛
