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涂新明: 作品数：73 被引量：217H指数：8; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划中国国际公共关系协会项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学环境科学与工程更多>>

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SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR测定猴免疫缺陷病毒RNA拷贝数方法的建立被引量：31: 2006年; 目的建立SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。方法巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNAgag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEMT载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒。该质粒经限制性内切酶NotⅠ酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL。结论制备的RS外标准品纯度高,SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。; 丛喆李兆忠魏强许琰蒋虹佟巍卢圣栋涂新明; 关键词：SIV 实时荧光定量RT-PCR SYBR

重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV病毒的作用效果试验: [目的]评价重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂对预防治疗SARS—CoV病毒感染恒河猴的作用。[方法]10 只恒河猴随机分为2组,每组5只。分别为试验组（重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂）和对照组（空白干扰素）。分别在攻毒前19h...; 高虹魏强涂新明朱华张扬清鲍琳琳邓巍张兵林孔琪黄阑蒋虹丛喆佟巍刘亚莉段招军候云德秦川; 关键词：实验动物 SARS 重组人干扰素Α2B; 文献传递

树类-细小病毒的初步研究: 1997年; 从树肾细胞培养物中分离出3株病毒，嗜在对数分裂期的TL细胞上复制，产生细胞病变和血凝素抗原，能凝集豚鼠和小鼠红细胞。交互血凝抑制实验表明3株病毒同属一个血清型。免疫酶染色显示抗原首先出现于细胞核。电镜观察负染标本病毒形态近似圆形和六角形，无胞膜，直径约30nm。血清学检查大多数树血清中含有该病毒抗体，证明是树的一种潜在病毒。初步鉴定为类细小病毒。; 吴小闲蒋虹涂新明张新生施慧君; 关键词：树QU

SARS—CoV中和抗体保护恒河猴等感染SARS-CoV研究: [目的]阐明SARS病毒感染后能否再次感染,疫苗产生的抗体中长期保护效果,被动免疫是否真正安全有效等,为防治SARS提供实验依据。[方法] 实验分4组,分别为一组（SARS恒河猴恢复组）:用感染SARS-CoV发病12月...; 秦川魏强高红涂新明蒋虹邓巍鲍琳琳朱华佟巍李国生黄澜刘亚莉; 关键词：SARS-COV 动物模型中和抗体; 文献传递

SARS病原体的检测及其在动物模型鉴定及疫苗评价中的应用被引量：6: 2004年; 目的　通过RT PCR及病毒分离等方法 ,鉴定SARS感染性动物模型是否成立 ,并对疫苗效果进行评估。方法　选用 3周岁的健康SPF级恒河猴 8只 ,分为SARS实验感染动物模型组及疫苗组 (Sino 3SARS灭活疫苗2 0 0 30 90 4批肌内注射 ,免疫 2次 )。经鼻吸入Sino 1SARS毒株 ,病毒攻击后 7d动物进行安乐死。自病毒攻击后的第一天起每日连续采集动物咽拭子标本 ,病毒攻击后的第二天、第五天、第七天采集血浆标本[1 ] 。将标本进行病毒分离及RT PCR检测 .结果　模型组动物病毒攻击后第一天至第七天咽拭子RT PCR检测均为阳性。注射疫苗组动物仅在病毒攻击后第一天咽拭子RT PCR检测呈阳性。模型组动物血浆RT PCR检测呈现阳性 ,疫苗组动物血浆RT PCR检测均为阴性。病毒分离结果显示仅在模型动物咽拭子标本中分离到病毒 ,未在疫苗组动物的咽拭子标本分离到病毒 .血浆标本中均未分离到病毒 .结论　RT PCR及病毒分离可以及时有效地检测出病毒在体内的复制情况 ,可作为模型鉴定、疫苗评估及药物筛选的重要手段。; 张扬清鲍琳琳孔琪邓巍涂新明朱华高虹张兵林佟巍秦川; 关键词：SARS 病原体疫苗动物模型逆转录聚合酶链反应病毒培养

无菌小鼠的人工哺乳培育被引量：6: 1999年; 采用无菌子宫摘取术，在隔离器中剥离子宫取仔１６只，生存１５只，在我国首次采用每２４小时插胃管灌胃５～６次的人工哺乳方法，哺乳１５只，离乳６只。粪便、垫料、棉拭子经无菌检查，均无细菌生长。同时对人工乳成分进行了分析比较，比较了人工乳灭菌温度与时间对各营养成分破坏情况，比较了人工乳。; 涂新明寿克让高虹李振杰; 关键词：无菌检查插胃管灌胃人工哺乳人工乳离乳

SIVp27抗原双抗体夹心ELISA检测方法的研究被引量：4: 2007年; 目的建立检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA方法并进行初步应用。方法使用ProteinA亲和层析柱纯化腹水中的SIVp27单抗,用过碘酸钠法对单抗进行辣根过氧化物酶标记。经抗体配对实验确定包被抗体和检测抗体,再用棋盘滴定法确定抗体工作浓度后,探索构建检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA法。应用建立的双抗体夹心ELISA法,对SIV模型猴血浆标本和SHIV模型猴病毒分离培养上清标本进行了检测,并将其结果与Coulter公司试剂盒检测结果进行比较。结果以稀释至20ug/mL的2E12为包被抗体、1:400稀释的酶标3G3为检测抗体为ELISA最优体系。模型猴血浆标本和病毒分离培养上清标本的检测结果表明自建体系可以用于SIVp27抗原的检测,特异性良好,灵敏度略低于Coulter公司试剂盒。结论检测SIVp27抗原的双抗体夹心ELISA方法初步建成,为研制有独立知识产权的检测试剂奠定了一定的基础。; 孙敏魏强梁成珠佟巍丛喆蒋虹涂新明; 关键词：SIV P27抗原单克隆抗体双抗体夹心ELISA

SARS恢复猴和灭活疫苗免疫实验猴再次感染SARS-CoV研究被引量：1: 2006年; 目的研究SARS-CoV实验感染恢复猴，以及灭活疫苗免疫猴对SARS—CoV再次感染的疾病状况。方法动物分四组，分别为SARS感染恢复动物组，灭活疫苗免疫不同时间2组和SARS模型对照组。动物分别接种病毒，1～7d进行病毒检测和血清学检测，7d后安乐处死动物，进行病理检测。结果实验感染SARS-CoV猴和灭活疫苗免疫猴均产生了中和抗体，猴体内SARS-CoV复制得到一定程度的抑制，病理变化也比SARS-CoV模型组轻。结论SARS-CoV感染恢复猴对SARS-CoV再次感染有一定抵抗作用；灭活疫苗免疫是预防实验猴感染SARS—CoV的有效方法。; 魏强高虹蒋虹涂新明邓巍丛喆朱华佟巍李国生张连峰秦川; 关键词：SARS-COV 灭活疫苗恒河猴食蟹猴中和抗体

猴副流感病毒SV5的PCR检测方法建立及初步应用: [目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以...; 于浩蒋虹佟巍丛喆孙敏涂新明魏强; 关键词：聚合酶链反应巢式PCR; 文献传递

SIV p27单克隆抗体的制备和鉴定被引量：3: 2006年; 目的建立SIVp27杂交瘤细胞株，并对其分泌的SIVp27单克隆抗体进行初步鉴定。方法使用基因重组的SIVp27蛋白免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术使用半固体培养基法建立杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。通过染色体核型对杂交瘤细胞株进行鉴定；采用Western blot、免疫荧光法、酶联免疫吸附法确定单克隆抗体的交叉反应性、相对亲和力、抗原识别表位、免疫球蛋白的类型和亚类。对单克隆抗体进行鉴定。结果获得4株可稳定分泌SIVp27单克隆抗体的杂交瘤细胞，IC3、286为IgG1类，2E12为IgG2b类，3G3为IgG2a类。4株单抗均能识别SIV的p27蛋白，与逆转录病毒SRV、STLV无交叉反应，286、2E12与H1Vp24有交叉反应。免疫荧光法检测腹水效价为1：10240～1：40960。1C3、286、2E12、3G3染色体平均数分别为103、97、96、101。2E12与3G3识别不同的抗原表位。结论成功地制备出4株SIVp27单克隆抗体，均具有良好的特异性和亲和力，为进一步建立免疫分析方法，进行SIV／SAIDS及其艾滋病相关研究，奠定了基础。; 孙敏涂新明魏强丛喆蒋虹佟巍陈颂赖春晖于浩秦川; 关键词：SIV 蛋白质P27 杂交瘤单克隆抗体

涂新明

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