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自噬在人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型中的表达变化及其意义被引量：3: 2013年; 目的探讨自噬在人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型中的作用及意义.方法选择2012年2至8月皖南医学院弋矶山医院脊柱外科住院接受颈前路椎体次全切除手术的颈椎病患者和颈椎骨折或脱位者48例.分为对照组（17例）和颈椎病组（31例）.将术中取出的颈椎椎体终板软骨用酶消化法分离终板软骨细胞并培养,建立人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型.甲苯胺蓝染色,倒置相差显微镜及HE染色观察细胞形态学变化,单丹磺酰戊二胺（MDC）染色观察自噬小体,激光共聚焦显微镜观察自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3蛋白）,运用反转录聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖及免疫印迹检测LC3蛋白的表达.结果成功建立人颈椎椎体终板软骨细胞退变模型.对照组原代终板软骨细胞以多角形为主,增殖速度较快,而颈椎病组原代终板软骨细胞以梭形为主,细胞增殖速度较对照组慢.两组细胞中MDC染色均可见自噬小体,激光共聚焦显微镜下均可见LC3蛋白位于胞内和核周.颈椎病组终板软骨细胞Ⅱ型胶原基因（0.628±0.254）及蛋白多糖基因（0.715 ±0.194）的表达均低于对照组（0.845 ±0.186,0.913 ±0.254,均P＜0.05）.对照组中LC3-Ⅱ/LC3-I较颈椎病组明显上调.结论自噬在人颈椎终板软骨细胞退变过程中起着重要作用.调控终板软骨细胞中自噬的活性可能会改善椎间盘的退变.; 熊寿良徐宏光王弘张敏俞云飞张巍涂成东赵泉来吕坤; 关键词：椎间盘颈椎软骨细胞基因表达

胸腰椎骨折个体化微创手术治疗的临床研究: 徐宏光王弘熊寿良赵泉来刘平杨晓明陈学武王凌挺张玙李逸峰俞宏星; 该项目总结了胸腰椎骨折的特点，针对患者不同的临床特点，采取个体化微创手术治疗方案。该项目采用微创经皮椎弓根螺钉固定技术结合椎弓根植骨或骨水泥填充的方法治疗胸腰椎骨折，可达到传统手术相同的临床疗效，手术创伤小，术后恢复快且...; 关键词：; 关键词：胸腰椎骨折

小分子药物kartogenin保护终板软骨退变的实验研究被引量：3: 2014年; 目的:研究小分子药物kartogenin(KGN)对终板软骨组织细胞外基质分泌的影响,探讨其在终板软骨以及椎间盘退变中的作用。方法:建立大鼠椎间盘体外器官退变模型,分为对照组、退变组(穿刺注射生理盐水)、KGN处理组(穿刺注射100nmol/L KGN),利用HE染色观察终板软骨及椎间盘形态,番红-固绿染色观察终板软骨细胞外基质的分泌。通过Real time-PCR评价三组终板软骨组织中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9的表达变化,Western blot检测Ⅱ型胶原、SOX-9蛋白表达变化。结果:HE染色结果显示与对照组比较,退变组椎间盘髓核消失,终板软骨减少,发生明显退变,KGN处理组椎间盘结构较完整;番红-固绿染色可见实验组较对照组终板软骨细胞外基质分泌增多。Realtime-PCR结果显示退变组终板软骨组织Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及SOX-9表达明显下调,KGN处理组中终板软骨组织Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及SOX-9表达上调;Western blot结果显示实验组软骨细胞中Ⅱ型胶原、SOX-9蛋白表达明显增高。结论:体外穿刺及培养能够诱导椎间盘及终板软骨的退变,小分子药物KGN能够促进终板软骨细胞外基质的分泌从而保护终板软骨及椎间盘的退变。; 郑权徐宏光汪景熊寿良王弘张晓玲; 关键词：椎间盘退变

自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化被引量：4: 2014年; 目的探讨自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化及作用。方法取10只清洁级SD大鼠腰椎终板软骨进行细胞培养。对P。代终板软骨细胞分别加载间歇循环张力（10％伸长率，0．5Hz）0h、3h、12h、24h、48h。以倒置相差显微镜观察细胞形态学变化，实时PCR与蛋白印迹法检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、转录因子SOX．9及蛋白多糖转录因子、Beclin．1和LC3基因表达的变化，以单丹磺酰戊二胺染色观察自噬小体。MTT（3．2，5-二苯基四氮唑溴盐染色）法检测3．甲基腺嘌呤（自噬抑制剂）刺激前后的细胞存活率。结果间歇循环张力诱导后0h组与3h组为正常终板软骨细胞形态，呈多角形；12h组略呈不规则形；24h组和48h组呈梭形改变。实时PCR显示24h组和48h组中Ⅱ型胶原、转录因子SOX．9及蛋白多糖的表达量降低；自噬相关基因LC3和Beclin-1表达量呈时间依赖性增加。单丹磺酰戊二胺染色显示24h组和48h组自噬发生率呈时间依赖性增加。MTT结果显示细胞存活率呈降低趋势；添加3-甲基腺嘌呤刺激后细胞活性减弱、存活率降低。结论间歇循环张力刺激下终板软骨细胞表型逐渐丧失；自噬相关基因LC3与Beclin．1表达明显上调，但细胞活性降低；抑制自噬水平可降低细胞存活率，提示自噬参与了间歇循环张力诱导的终板软骨细胞退变过程。; 俞云飞徐宏光王弘张巍熊寿良张敏涂成东宋俊兴张晓玲; 关键词：椎间盘退行性变自噬

自噬在不同年龄大鼠终板软骨中的变化被引量：6: 2013年; 目的观察不同月龄SD大鼠终板软骨中自噬的变化及其意义.方法取3、6、12月龄SD大鼠的原代终板软骨细胞,分为自然培养组和雷帕霉素组.茜素红染色观察细胞形态,实时聚合酶链反应和免疫印迹检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、SOX-9、蛋白多糖转录因子和基质分解酶相关基因MMP-13以及自噬相关基因Beclin-1和LC3基因的表达,单丹磺酰戊二胺（MDC）染色观察细胞的自噬率,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞存活率.结果茜素红染色显示细胞呈梭形改变,蛋白多糖转录因子、Sox-9和Ⅱ型胶原基因表达呈年龄依赖性降低趋势（P〈0.05）,提示随年龄增长,终板软骨细胞出现退变;自噬相关基因Beclin-1和LC3在各组终板软骨细胞中均有表达,且呈年龄依赖性降低趋势[（1.0±0.1）比（0.6±0.1）,（1.0±0.1）比（0.3±0.2）;（1.0±0.2）比（0.4±0.1）,（1.0±0.2）比（0.1±0.1）]（P〈0.05）,自噬发生率也呈现明显降低（P〈0.05）.自然培养组中,细胞存活率呈逐渐降低趋势（P〈0.05）;与自然培养组相比,雷帕霉素组中各组细胞存活率明显增加（P〈0.05）.结论自然增龄大鼠中,终板软骨细胞逐渐出现退变,且存活率降低;上调其自噬水平,可提高细胞存活率,提示呈年龄依赖性降低的自噬活性,可能与椎间盘的自然退变有关.; 俞云飞徐宏光王弘张巍熊寿良张敏; 关键词：椎间盘软骨细胞物理刺激

关节镜下两种手术方法治疗中年单纯ⅡC型上盂唇前后损伤的早期疗效对比被引量：2: 2016年; 目的:观察关节镜下单纯盂唇修复与肌腱切断及固定两种手术方法治疗单纯ⅡC型上盂唇前后(superior labrum from anterior to posterior,SLAP)损伤早期疗效。方法:回顾性分析关节镜下确诊为单纯ⅡC型SLAP损伤的中年患者22例,且所有患者均为单侧损伤,按照不同的手术方式将其分为两组:设盂唇单纯修复术组为对照组(n=11);肌腱切断及固定组为观察组(n=11)。观察记录两组患者术后6、12个月肩关节的加州大学洛杉矶分校(University of California at Los Angeles,UCLA)评分和美国肩肘外科医师(American Shoulder and Elbow Surgeons Scale,ASES)评分。结果:观察组术后6个月及12个月肩关节UCLA功能评分与ASES评分,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于中年单纯ⅡC型SLAP损伤,肌腱固定组术后早期肩关节功能恢复优于单纯盂唇修复组。; 陈进王强熊寿良董利军黄德刚; 关键词：关节镜肩关节

RhoA信号通路在软骨细胞生长发育中的作用: 2012年; RhoA信号通路在软骨细胞中起着重要作用,它既能通过调控软骨细胞内肌动蛋白聚合状态调节软骨细胞增殖,又能参与维持软骨细胞极性、细胞形态,调节软骨细胞分化,促进软骨弹性纤维生成等过程,同时也可与其他信号通路相互作用,共同调节软骨细胞生长发育。该文就RhoA结构功能及其信号通路在软骨细胞生长发育中的作用作一综述。; 熊寿良徐宏光宋俊兴; 关键词：软骨细胞

胫骨平台骨折33例手术治疗分析: 目的：探讨胫骨平台骨折的手术治疗的临床疗效。<br>　　方法：对2010年5月到2012年5月间我科收治的胫骨平台骨折66例进行分析。骨折按Schatzker分型标准,Ⅰ型8例,Ⅱ型24例,Ⅲ型18例,Ⅳ型8...; 徐宏光熊寿良; 关键词：胫骨平台骨折手术治疗内固定术临床疗效

白细胞介素1β诱导软骨细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路被引量：4: 2017年; 目的检测白细胞介素-1β（IL-1β）诱导下哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在大鼠关节软骨细胞中表达变化。方法无菌术下分离出大鼠关节软骨，采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶连续消化法提取细胞，二代软骨细胞经过3 d预培养后，加入不同浓度IL-1作用24 h，通过甲苯胺蓝染色进行细胞表型鉴定后；用倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化；逆转录聚合酶链反应（PCR）检测软骨细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、mTOR以及核糖体40S小亚基S6蛋白激酶（P70S6K）基因表达变化；酶联免疫测定mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果随着IL-1β浓度的增加，软骨细胞表型出现由多角形变成梭形，PCR检测Ⅱ型胶原在各组中的相对表达量（对照组：0.821±0.014；1 ng/ml组：0.614±0.014；10 ng/ml组：0.549±0.009；100 ng/ml组：0.520±0.008）、蛋白聚糖（0.867±0.005；0.857±0.001；0.554±0.008；0.538±0.004）以及mTOR（0.845±0.015；0.785±0.009；0.569±0.025；0.518±0.014）的表达量减少，且各基因组组内表达差异均有统计学意义（均P〈0.05）；而P70S6K基因表达量（0.465±0.024；0.566±0.022；0.663±0.022；0.896±0.015）增加，各组表达差异均有统计学意义（均P〈0.05）；免疫印迹检测mTOR蛋白以及P70S6K蛋白表达量与PCR检测趋势一致。结论在软骨细退变过程中mTOR信号通路可能起着重要作用，通过调控mTOR信号通路可能延缓关节软骨退变。; 熊寿良徐宏光王强王剑贺华正杨昕董利军赵泉来黄德刚宣华兵; 关键词：细胞衰老白细胞介素1 蛋白激酶类雷帕霉素

Wnt／β-catenin 信号通路在终板软骨细胞体外自然退变模型中的表达被引量：8: 2014年; 目的：探讨Wnt/β-联蛋白（ catenin ）信号通路中关键基因在终板软骨细胞自然退变中的表达变化及意义。方法分离培养大鼠终板软骨细胞，建立终板软骨细胞体外自然传代退变模型。分为空白对照组（ P2代细胞）、自然传代组（ P5代细胞）及wnt信号通路抑制组，倒置显微镜观察细胞形态，HE染色及甲苯胺蓝染色检测终板软骨细胞表型改变。实时聚合酶链反应检测各组细胞中Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因及β-catenin的表达变化；免疫印迹检测β-catenin蛋白表达变化。激光共聚焦显微镜检测β-catenin在细胞内的表达与定位。结果随着自然传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失；P5代终板软骨细胞较P2代细胞Ⅱ型胶原（P5/P2＝0.11，P＝0.0039）、蛋白多糖（P5/P2＝0.32，P＝0.0046）及SOX-9（P5/P2＝0.58，P＝0.0168）表达明显降低，而Wnt/β-catenin信号通路中关键基因β-catenin（P5/P2＝1.62，P＝0.0082）表达明显增高；抑制wnt 信号通路后β-catenin （XAV-939/P5＝0.23，P＝0.0017）表达降低，Ⅱ型胶原（XAV-939/P5＝2.60，P＝0.0180）、蛋白多糖（XAV-939/P5＝2.56，P＝0.0041）及SOX-9（XAV-939/P5＝1.47，P＝0.0382）表达增高。激光共聚焦显微镜观察可见P5代终板软骨细胞较P2代中β-catenin表达增高且明显入核，抑制wnt信号通路后β-catenin表达明显减少。结论β-catenin基因在终板板软骨细胞体外退变过程中具有重要的作用，调控Wnt/β-catenin信号通路有可能保护终板软骨的退变。; 郑权徐宏光张晓玲王弘汪景王传东宋俊兴熊寿良赵泉来; 关键词：椎间盘软骨细胞信号传递细胞衰老

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熊寿良

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