胡忠义
- 作品数：304 被引量：1,107H指数：18
- 供职机构：上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海市科学技术委员会资助项目上海市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学机械工程更多>>
- 细菌L型依赖利福平结核分枝杆菌的多种形态和动态变化被引量：3
- 2003年
- 钟敏胡忠义王易伟钟明方启雪王洪海
- 关键词：细菌L型细菌学检验细菌培养
- 结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测被引量：1
- 2010年
- 目的构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值。方法通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ESAT-6(CE)基因片段,分别连接到pMD18-T,并将两片段2次连接到表达载体pET21a(+)中,获得pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21重组质粒;经表达纯化和复性后,去除内毒素,利用酶联免疫吸附试验检测48例结核病患者、30例非结核肺部疾病患者及32例健康对照者全血中IFN-γ的释放量。结果CE21经SDS-PAGE分析后相对分子质量为45,与预期大小一致。CE21融合蛋白全血标本IFN-γ的检测,结核组阳性率为72.9%,非结核疾病对照组和健康对照组阳性率分别为3.3%和3.1%。结论成功获得CE21融合蛋白,IFN-γ的检测证明该融合抗原具有良好的结核病检测价值。
- 周舟丁元生刘忠华毛翎桂徐蔚胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核重组融合蛋白质类
- 用DNA芯片快速检测结核分支杆菌对利福平的耐药性被引量：42
- 2001年
- 目的 研制一种新型DNA芯片 ,用于结核分支杆菌对利福平的耐药性快速检测。方法 根据结核分支杆菌rpoB基因的序列信息设计探针并制作DNA芯片 ,PCR扩增并荧光标记包含结核分支杆菌rpoB基因突变热点的目的片段 ,与芯片杂交 ,同时以DNA测序法为对照。结果 17株随机抽取的耐利福平结核分支杆菌菌株有 14株可用DNA芯片检测出来 ,效率可达 83%;患者痰液中少量的DNA足够进行芯片检测 ,无须进行培养。结论 用DNA芯片来检测结核分支杆菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和灵敏度 ,该法快速、精确 。
- 景奉香胡忠义孙悦孙斌赵建龙
- 关键词：结核分支杆菌RPOB基因利福平药物耐受性DNA芯片
- 双相罗氏培养基检测痰标本中分枝杆菌的研究
- 目的对双相罗氏培养基检测痰标本中分枝杆菌的效果进行研究评价。方法使用双相罗氏培养基和罗氏培养基对573份疑似结核患者的痰标本进行分枝杆菌分离培养检测,并分析比较两种培养基检测分枝杆菌的阳性率及报阳时间。结果罗氏培养的阳性...
- 崔振玲王洁黄晓辰陆俊梅胡忠义
- 文献传递
- 结核分枝杆菌MPT64蛋白适配子的筛选与鉴定被引量：10
- 2008年
- 目的利用指数富集配体系统进化（SELEX）技术筛选能与结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64特异性结合的寡核苷酸适配子，寻找早期诊断结核病的方法。方法体外合成随机单链DNA（ssDNA）文库，以MPT64蛋白为靶物质，采取SELEX技术进行12轮筛选，将适配子库克隆、测序后，用DNAMAN软件对其结构进行分析，经生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定亲和力，并利用捕获适配子与检测适配子组成的“三明治”夹心法对获得的适配子进行初步验证。将13个非结核分枝杆菌菌株和BCG菌株作为阴性组计为0，将结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌组作为阳性组计为1，采用MedCalc软件分析受试者操作特征曲线，确定最佳阳性判定值，并构建散点图。结果经12轮筛选后，随机挑选15个适配子与MPT64蛋白的亲和性进行分析，吸光度值为0．492—1．243，73．3％的适配子的吸光度值在1．0以上；二级结构分析显示，适配子与MPT64蛋白亲和性的基础主要是大口袋茎环结构，口袋与环之间的茎桥含有不同数量的GC碱基对；“三明治”夹心法对阴性组[非结核分枝杆菌标准菌株及卡介苗（BCG）株]和阳性组（结核分枝杆菌实验室H37Rv株及临床株、牛结核分枝杆菌标准株）共47个菌株培养上清的检测结果显示，在临界（cut-off）值为0．61时，H37Rv、牛结核分枝杆菌组为阳性，BCG株为阴性；阴性组标本的阴性检出率为85．7％，阳性组标本的阳性检出率为87．9％，表现出一定的检测价值。结论已初步筛选到与MPT64蛋白具有高亲和性的DNA适配子。
- 秦莲花马占忠郑瑞娟刘忠华陆俊梅胡忠义
- 结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合基因的表达及其多克隆抗体的制备被引量：13
- 2006年
- 以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组DNA为模板,经重叠PCR扩增获得CFP10-ESAT-6融合基因片段,克隆于pET21a表达载体中,获得了重组质粒pET21a-CFP10-ESAT-6,将其转化大肠杆菌BL21细胞,经IPTG诱导表达,得到了25 ku的目的蛋白。表达产物经纯化和定量分析后免疫新西兰大白兔,收集兔血清进行抗体ELISA检测。结果显示,成功构建了CFP10-ESAT-6融合基因的原核表达质粒,获得了CFP10-ESAT-6融合蛋白,以此蛋白免疫动物可产生高效价的抗体。
- 唐宇龙刘湘新杨华丁元生胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌多克隆抗体
- 结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的噬菌体测定被引量：6
- 2004年
- 目的 建立噬菌体生物扩增法快速测定乙胺丁醇 (EMB)耐药性 ,并探讨其在结核分枝杆菌 (MTB)EMB耐药性测定中的应用价值。方法 应用噬菌体生物扩增法测定 10 2株MTB临床分离株EMB耐药性 ,并与绝对浓度法结果进行比较 ,对不符合的菌株测定其最低抑菌浓度 (MIC)。结果 噬菌体法测定 10 2株MTB临床分离株EMB敏感 82株、耐药 2 0株 ,绝对浓度法敏感 77株、耐药 2 5株 ;二法测定均为敏感 74株、耐药 17株。噬菌体法与绝对浓度法测定EMB耐药性结果相符 91株 ,符合率 89.2 % ;不符 11株 ,不符合率 10 .8%。11株两种测定方法结果不符的菌株中 ,7株(6 3.6 % )噬菌体法与MIC测定结果相符合 (5株噬菌体法敏感、绝对浓度法耐药 ,2株噬菌体法耐药、绝对浓度法敏感 )。结论 噬菌体生物扩增法测定EMB耐药性只需 3d时间 ,操作简便 ,不需特殊仪器设备 ,可作为MTB的EMB耐药性快速筛选方法。
- 马晓薇胡忠义崔振玲景玲杰王洁曹相原张文宏翁心华
- 关键词：耐药性噬菌体乙胺丁醇结核分枝杆菌扩增临床分离株
- 加强结核病耐药性检测新技术研究迫在眉睫被引量：2
- 2011年
- 据WHO最新完成的《耐多药结核病和广泛耐药结核病：2010年全球监测与反应报告》估计，2008年全球范围内耐多药结核病患者有44万例，其中有1／3已死亡。超过50个国家存在广泛耐多药结核病患者，中国在全球27个耐多药结核高负担国家[即估计每年发生至少4000例耐多药结核病和（或）至少10％新登记的耐多药结核病患者的国家]中排行第2，仅次于印度。
- 郑瑞娟胡忠义
- 关键词：耐药结核病耐药性检测耐多药结核病结核病患者WHO新登记
- 结核分枝杆菌CFP10和MPT48及TB8．4融合蛋白的表达与临床应用被引量：3
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8．4融合蛋白，评价其用于结核病血清学检测的价值。方法选取2008年上海市肺科医院肺结核患者150例，非结核肺部疾病患者70例，健康体检者103名，采集血清标本共323份。构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8．4融合表达载体。融合蛋白经免疫印迹分析后，采用酶联免疫吸附试验检测血清标本，运用Medcalc11．5对结果进行统计学分析。结果成功构建重组质粒pET21a—cfp10—mpt48-tb8．4，获得95％以上纯度的融合蛋白。免疫印迹法发现融合蛋白与血清抗体发生免疫反应。融合蛋白检测血清抗体敏感度56．7％（85／150），特异度90．8％（157／173），其中非结核病患者特异度为85．7％（60／70），健康体检者特异度为94．2％（97／103）。结论CFP10-MPT48-TB8．4融合蛋白所具有的免疫反应性，有可能成为结核病血清学诊断的候选抗原。
- 刘忠华杨华秦莲花金瑞良崔振玲郑瑞娟毕爱笑胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核细菌蛋白质类重组融合蛋白质类
- 结核特异性抗体结合肽的筛选研究被引量：3
- 2011年
- 目的 利用纯化的结核病患者血清IgG从噬菌体展示随机7肽库中筛选结核特异性抗体结合肽,为下一步开发新的结核病血清学检测试剂提供思路.方法 以纯化后结核病患者血清IgG作为固相配基,按吸附、洗脱、扩增的生物淘洗（简称淘选）过程对噬菌体展示随机7肽库进行筛选,并于第2至3轮的筛选中加入纯化后健康人血清IgG进行反筛,经过3轮淘选使噬菌体得到富集,分别从滴度测定平板上各个方位挑取结核病患者IgG和健康人IgG洗脱单噬菌体各20个进行扩增纯化,提取单链DNA作为模板进行测序,间接ELISA法检测不同单噬菌体与结核病患者和健康人IgG的结合情况,鉴定出阳性克隆.取收集的47份结核病患者和37份有卡介苗接种史的健康人血清标本,采用phage-ELISA法对获得的阳性单噬菌体进行初步验证,并对其中24份筛选用血清标本的检测结果进行分别统计.结果 通过3轮淘选,能与靶分子特异性结合的噬菌体得到明显富集.单噬菌体测序分析共获得12种共同序列.12种序列各取1个克隆扩增后进行间接ELISA检测,结果表明单噬菌体H12与结核患者IgG具有较高的亲和力（S/N≥2.1）,确定为阳性克隆.间接ELISA检测发现,单噬菌体H12对47份结核病患者血清标本的检出值（0.105±0.010）明显高于对37份健康人的检出值（0.070±0.005）,t=2.912,P〈0.0001.对其中筛选用12份结核病患者和12份健康人血清标本的检出值分别为0.144±0.016、0.052±0.004,差异同样具有统计学意义（t=5.69,P〈0.0001）.结论 利用噬菌体展示随机肽库淘选获得了结核特异性抗体结合肽,显示出与结核病患者IgG较特异的结合活性,为以多肽为基础探索新的结核病血清学诊断方法提供了依据.
- 杨焕森胡忠义刘忠华王洁沙巍杨华
- 关键词：分枝杆菌结核肽库免疫测定C肽
