秦莲花
- 作品数：80 被引量：142H指数：8
- 供职机构：上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海市科学技术委员会资助项目上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学理学更多>>
- 一种特异性识别鸟-胞内分枝杆菌复合群的DNA适配子及其筛选方法和应用
- 本发明提供了一种特异性识别鸟‑胞内分枝杆菌复合群的DNA适配子及其筛选方法和应用。该DNA适配子的序列为SEQ ID NO.1。本发明在全细胞SELEX技术基础上利用构建进化发育树的方法系统地监测了整个筛选过程，进而获得...
- 秦莲花王洁郑瑞娟黄晓辰冯永红冀俊峰
- 结核分枝杆菌分泌蛋白64抗体适体的获得及血清学检测被引量：8
- 2010年
- 指数级富集配体的系统进化 （ systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX） 技术筛选的适体具有可体外合成、纯度高、稳定性强和易于保存等特点，并已用于检测多种靶物质。目前利用适体检测MTB分泌蛋白64（MPT64）及模拟胸腔积液中γ干扰素含量已有报道，由于MPT64是结核病血清学诊断的重要抗原之一，
- 蔡江丽秦莲花刘忠华郑瑞娟金瑞良胡忠义
- 关键词：血清学检测分泌蛋白结核分枝杆菌适体抗体MPT64
- 结核分枝杆菌pyrF基因的生物信息学分析被引量：5
- 2019年
- 目的应用生物信息学软件分析预测结核分枝杆菌乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶(orotidine 5'-monophosphate decarboxylase,OMPdecase)的结构与生物学特性。方法采用ProtParam,ProtScale,TMPred,SignalP4.1,NetNGlyc1.0,Netphos3.1,SOPMA,SWISS-MODEL和STRING等生物信息学软件对结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis)H37Rv的pyrF基因及其编码蛋白OMPdecase的理化性质、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三维结构和蛋白-蛋白相互作用网络等进行预测分析。结果预测结核分枝杆菌pyrF基因编码的OMPdecase为相对分子质量27.4×10~3的富含丙氨酸、甘氨酸和缬氨酸的稳定疏水性膜蛋白或胞浆蛋白,不含信号肽,且磷酸化程度较高。α螺旋和无规卷曲为OMPdecase的主要二级结构元件,分别占51.09%和27.37%。同源建模分析显示D93-K95-D98-I99-T102位于活性中心区域内。结论生物信息学方法预测结核分枝杆菌pyrF基因编码的OMPdecase相对分子质量为27.4×10~3,为稳定疏水性膜蛋白或胞浆蛋白,其含有的保守氨基酸残基D93-K95-D98-I99-T102与该蛋白的催化活性密切相关。
- 黄劲王洁牛雪可邱文赵亮王梅竹康颖倩冯永红秦莲花
- 关键词：结核分枝杆菌生物信息学
- SELEX技术筛选结核分枝杆菌MPT64蛋白DNA适配子方法学研究被引量：2
- 2008年
- 目的利用指数富集配体系统进化（SELEX）技术筛选能与结核分枝杆菌MPT64蛋白特异结合的寡核苷酸适配子。方法体外合成长度为78个核苷酸的随机ssDNA文库，利用sELEX技术筛选，以MPT64蛋白为靶物质进行12轮筛选，利用生物素-亲和素显色系统检测寡核苷酸与蛋白的结合性。结果SELEX技术筛选MPT64蛋白适配子的技术体系：PCR扩增的最佳退火温度为65℃；文库优化时，最佳Mg^2＋的浓度为1．5mmol／L；不对称PCR法制备ssDNA时，Mg^2＋的浓度为0．75mmol／L；以酶联板为介质筛选时，在10轮后筛选达到饱和，且随着筛选轮数的增加，PCR扩增产物的电泳条带逐渐单一、致密，亲和性检测显示第10轮获得的适配子库，比初始的文库亲和性吸光度（A）值增加了9．18倍。将适配子库克隆，随机挑取10个单克隆子，利用混合夹心法检测其与MPT64的亲和性，亲和性范围分布在0．572—1．606之间。结论已初步筛选到与MPT64蛋白高亲和性结合的DNA适配子。
- 秦莲花郑瑞娟杨华冯永红王洁胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌SELEX亲和性
- 焦磷酸测序技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性研究被引量：9
- 2007年
- 目的利用焦磷酸测序技术,建立一种高通量结核分枝杆菌利福平耐药性快速基因检测方法。方法应用生物素标记的引物扩增 rpoB 基因片段,经链亲和素标记的磁珠分离制备单链模板,设计2个测序引物在焦磷酸测序仪上检测 rpoB 基因耐药突变区的81 bp 序列突变情况,与 H_(37)Rv序列比对后判断耐药结果。结果通过建立的基于焦磷酸测序技术的结核分枝杆菌 rpoB 基因突变检测平台,32株利福平耐药株均在 rpoB 基因片段上检测到突变,22株利福平敏感株未检测到突变,检测结果与直接测序符合率达100%。结论本方法可快速、准确、高通量检测结核分枝杆菌耐利福平 rpoB 基因突变。
- 郑瑞娟秦莲花冯永红杨华王洁陆俊梅胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核利福平RPOB基因焦磷酸测序
- 结核患者血清IgG抗体适配子及其制备方法
- 本发明提供了一种结核患者血清IgG抗体适配子，其序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示的核苷酸序列及其制备方法。本发明的结核患者血清IgG抗体DNA适配子亲和性、特异性高，其用于血清学检测能...
- 秦莲花胡忠义杨华刘忠华蔡江丽
- 文献传递
- 结核分枝杆菌MPT64蛋白DNA适配子的筛选及结构分析
- 目的利用 SELEX 技术筛选能与结核分枝杆菌 MPT64蛋白特异结合的寡核苷酸适配子,为进一步尝试利用筛选出的特异性寡核苷酸适配子与 MPT64蛋白的高亲和性结合进行结核病临床血清学诊断研究奠定基础。方法体外合成长度为...
- 秦莲花郑瑞娟杨华冯永红王洁胡忠义
- 文献传递
- HCMV PP65抗原核酸适配子的筛选及活性鉴定
- 2014年
- 目的以人巨细胞病毒HCMV PP65抗原为靶分子,筛选与其有高亲和力、高特异性的适配子。方法采用SELEX技术筛选HCMV PP65抗原特异的适配子,进行亲和性检测以及二级结构预测,以筛选获得的最优序列作为捕获适配子,建立基于"磁珠-适配子-抗原-荧光单克隆抗体"的夹心检测方法,实现对PP65抗原的初步检测。结果本实验经过8轮筛选获得6条与靶物质高亲和性,高特异性结合的适配子。结论适配子的成功筛选,为建立基于适配子检测HCMV PP65抗原的新方法奠定了基础。
- 夏宇王永虎秦莲花韩梅姚远和昱辰罗娟张波
- 关键词：PP65抗原SELEX适配子
- 寡核苷酸酶联免疫法检测结核患者IgG抗体的研究
- 目的:研究结核患者IgG抗体适体在结核病血清学检测中的应用价值。方法SELEX技术筛选得到结核患者IgG抗体适体,并将适体构建的混合ELISA体系用血清标本的检测。结果 SELEX筛选得到4个高亲和适体;单适体血清学检测...
- 秦莲花柏文娟胡忠义刘忠华杨华
- 文献传递
- 对利福平敏感的多耐药结核分枝杆菌rpoB基因突变一例被引量：1
- 2013年
- 2011年10月11日,世界卫生组织《2011年全球结核病（TB）控制报告》显示,2010年全球结核病新发患者880万例,死亡145万例。虽较前有所下降,但下降过于缓慢,提醒我们结核病防治的工作仍任重道远。利福平是目前广泛使用的杀菌作用最强的抗结核药物之一,其通过结合依赖DNA的RNA多聚酶β亚单位抑制细菌RNA转录。
- 闫丽萍唐神结秦莲花韩敏肖和平
- 关键词：RPOB基因突变耐药结核分枝杆菌利福平RNA多聚酶抗结核药物结核病
