刘忠华
- 作品数：61 被引量：81H指数：6
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- 结核分枝杆菌分泌蛋白64抗体适体的获得及血清学检测被引量：8
- 2010年
- 指数级富集配体的系统进化 （ systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX） 技术筛选的适体具有可体外合成、纯度高、稳定性强和易于保存等特点，并已用于检测多种靶物质。目前利用适体检测MTB分泌蛋白64（MPT64）及模拟胸腔积液中γ干扰素含量已有报道，由于MPT64是结核病血清学诊断的重要抗原之一，
- 蔡江丽秦莲花刘忠华郑瑞娟金瑞良胡忠义
- 关键词：血清学检测分泌蛋白结核分枝杆菌适体抗体MPT64
- 结核患者血清IgG抗体适配子及其制备方法
- 本发明提供了一种结核患者血清IgG抗体适配子，其序列为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3所示的核苷酸序列及其制备方法。本发明的结核患者血清IgG抗体DNA适配子亲和性、特异性高，其用于血清学检测能...
- 秦莲花胡忠义杨华刘忠华蔡江丽
- 文献传递
- 新疆北疆地区结核分枝杆菌基因分型及耐药性分析
- 目的 对新疆北疆地区结核分枝杆菌临床株进行基因分型和耐药性检测,研究不同基因型在该地区的流行及耐药性. 方法 收集北疆地区114株结核分枝杆菌临床株,采用间隔区寡核苷酸(Spoligotyping)和多位点可变串联重复序...
- 刘忠华包海洋陈创夫
- 关键词：基因型
- 结核分枝杆菌环七肽配体分子的筛选和鉴定
- 2014年
- 目的 基于噬菌体展示随机环七肽库,通过亲和筛选获得结核分枝杆菌（MTB）环七肽配体分子,初步鉴定其与分枝杆菌的结合能力,以优化纳米检测.方法 以MTB标准株H37Rv灭活菌体为靶分子,卡介苗（BCG）为反筛分子,对噬菌体展示随机环七肽文库进行筛选.4轮淘选后,挑选H37Rv和BCG洗脱单噬菌体进行测序,ELISA检测单噬菌体与其亲和力将高亲和力单噬菌体所展示环肽进行体外合成,并标记荧光,荧光显微镜与流式细胞仪检测合成环肽的结合活性,并与前期获得的线性结合肽进行比较.结果 经过4轮亲合淘选,能与靶分子结合的噬菌体明显富集.单噬菌体测序共获得16种共同序列.ELISA检测显示,单噬菌体SB1、SB5、SB8、SB26与H37Rv和BCG的亲和力均较高,其吸光度值（A450）与阴性对照吸光度值（A450）比≥2.1,与3种非分枝杆菌不结合,确定为阳性克隆.流式细胞仪检测结果显示,H37Rv与环肽SB1、SB5、SB24、SB26结合的阳性细胞率分别为（73.2±6.3）％、（63.2±5.3）％、（32.9±3.1）％、（89.4±7.0）％;BCG与这4种环肽结合的阳性细胞率分别为（65.6±6.1）％、（48.6±4.5）％、（10.3±1.8）％、（86.6±7.9）％,H37Rv和BCG与4种环肽结合的阳性细胞率均高于H8[（4.0±1.0）％、（5.5±1.2）％].荧光显微镜观察结果显示,环肽SB1、SB5、SB24、SB26荧光肽均与H37Rv发生结合,荧光强度较强,与其他18种分枝杆菌均有一定的亲和力,但荧光强度弱于H37Rv,与3种非分枝杆菌均不结合.结论 本研究以环七肽库替代线性七肽库,成功筛选获得新的MTB配体分子,其与分枝杆菌的亲和力提高.
- 杨华马慧黄晓辰陆俊梅刘忠华胡忠义
- 关键词：配体肽库噬菌体展示
- 一种结核病检测多肽及其应用
- 本发明的结核特异性检测多肽，其多肽序列为SEQ ID NO.1所示，应用于结核病的血清学检测，敏感性高、特异性强；同时兼顾了血清学检测方法简单、快速，价格便宜的特点，不需要特殊的大型检测设备，使得基层医院也能够广泛开展高...
- 戈宝学杨华刘忠华郑瑞娟黄晓辰
- 文献传递
- 结核分枝杆菌重组蛋白Rv0222的表达及血清学鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值。方法通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签(His-tag)亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者(痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者),28例非结核病患者(8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿)和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和最佳阳性判定值。结果成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95%以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合。酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,最佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5%(57/82),非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0%(54/60),结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义(t=25.78,P<0.0001)。结论成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一。
- 王庆杨华金瑞良胡忠义刘忠华
- 关键词：重组蛋白质类细菌蛋白质类酶联免疫吸附测定
- 一种用于结核病诊断的标记物及其应用
- 本发明涉及结核分枝杆菌Rv0859蛋白在诊断结核病中作为诊断标记物，所述Rv0859蛋白是SEQ ID No.1所示的氨基酸序列或为该序列的变体且与其具有相同功能的蛋白质；本发明还涉及抗Rv0859蛋白的抗体的制备，以及...
- 戈宝学杨华刘忠华黄晓辰王洁
- 文献传递
- 结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测被引量：1
- 2010年
- 目的构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值。方法通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ESAT-6(CE)基因片段,分别连接到pMD18-T,并将两片段2次连接到表达载体pET21a(+)中,获得pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21重组质粒;经表达纯化和复性后,去除内毒素,利用酶联免疫吸附试验检测48例结核病患者、30例非结核肺部疾病患者及32例健康对照者全血中IFN-γ的释放量。结果CE21经SDS-PAGE分析后相对分子质量为45,与预期大小一致。CE21融合蛋白全血标本IFN-γ的检测,结核组阳性率为72.9%,非结核疾病对照组和健康对照组阳性率分别为3.3%和3.1%。结论成功获得CE21融合蛋白,IFN-γ的检测证明该融合抗原具有良好的结核病检测价值。
- 周舟丁元生刘忠华毛翎桂徐蔚胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核重组融合蛋白质类
- 结核分枝杆菌MPT64蛋白适配子的筛选与鉴定被引量：10
- 2008年
- 目的利用指数富集配体系统进化（SELEX）技术筛选能与结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64特异性结合的寡核苷酸适配子，寻找早期诊断结核病的方法。方法体外合成随机单链DNA（ssDNA）文库，以MPT64蛋白为靶物质，采取SELEX技术进行12轮筛选，将适配子库克隆、测序后，用DNAMAN软件对其结构进行分析，经生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定亲和力，并利用捕获适配子与检测适配子组成的“三明治”夹心法对获得的适配子进行初步验证。将13个非结核分枝杆菌菌株和BCG菌株作为阴性组计为0，将结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌组作为阳性组计为1，采用MedCalc软件分析受试者操作特征曲线，确定最佳阳性判定值，并构建散点图。结果经12轮筛选后，随机挑选15个适配子与MPT64蛋白的亲和性进行分析，吸光度值为0．492—1．243，73．3％的适配子的吸光度值在1．0以上；二级结构分析显示，适配子与MPT64蛋白亲和性的基础主要是大口袋茎环结构，口袋与环之间的茎桥含有不同数量的GC碱基对；“三明治”夹心法对阴性组[非结核分枝杆菌标准菌株及卡介苗（BCG）株]和阳性组（结核分枝杆菌实验室H37Rv株及临床株、牛结核分枝杆菌标准株）共47个菌株培养上清的检测结果显示，在临界（cut-off）值为0．61时，H37Rv、牛结核分枝杆菌组为阳性，BCG株为阴性；阴性组标本的阴性检出率为85．7％，阳性组标本的阳性检出率为87．9％，表现出一定的检测价值。结论已初步筛选到与MPT64蛋白具有高亲和性的DNA适配子。
- 秦莲花马占忠郑瑞娟刘忠华陆俊梅胡忠义
- GPR160调控分枝杆菌入侵宿主巨噬细胞的机制研究（英文）
- 结核分枝杆菌可入侵宿主巨噬细胞,调控机体免疫应答,从而逃避宿主免疫监视和药物攻击。G蛋白耦联受体(GPCRs)广泛地参与细胞的各类生理和病理活动的调控,但其在结核分枝杆菌入侵宿主细胞中的功能尚不明确。本室前期研究发现在B...
- 杨华刘海鹏陈建霞黄晓辰郑瑞娟刘忠华戈宝学
- 关键词：BCG入侵巨噬细胞
- 文献传递
