胡斌
- 作品数：7 被引量：23H指数：2
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miRNA-125b-1对乳腺癌SKBR-3细胞放射敏感性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨miRNA-125b-1对乳腺癌SKBR-3细胞放射敏感性的影响,及其对靶基因HER-2蛋白表达的影响。方法合成miRNA-125b-1并通过lipofectamineTM2000转染SKBR-3细胞,分别用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot法检测HER-2mRNA和蛋白质表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖抑制率;经不同剂量X线照射后,平板克隆形成实验计算细胞存活率,用单击多靶数学模型进行曲线拟合作图,求曲线参数D0、Dq和N值,比较细胞放射敏感性的变化。RT-PCR和Western blot定量结果的组间比较采用单因素方差分析,细胞周期及细胞增殖实验结果的组间比较采用重复测量方差分析。结果 miRNA-125b-1转染后的SKBR-3细胞中HER-2mRNA(F=447.78,P=0.00)和蛋白质水平(F=10.07,P=0.01)显著下降;转染后的SKBR-3细胞出现了G2M期阻滞;miRNA-125b-1组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组(F=163.28,P=0.00);曲线拟合后显示,转染后的细胞(D0=1.87,Dq=2.68,N=4.21)与对照组(D0=2.51,Dq=4.10,N=5.11)相比D0,Dq和N值均下降(SER=1.34,P<0.05),提示细胞放射敏感性增加。结论 miRNA-125b-1使乳腺癌SKBR-3细胞的放射敏感性增加,可为HER-2阳性的乳腺癌提供新的治疗方法。
- 胡斌吴爱国李学孝纪术峰王梦川吴凯邵国利
- 关键词：乳腺肿瘤放射疗法微小RNA人表皮生长因子受体2
- 转染beclin1基因诱导自噬对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长的影响被引量：14
- 2013年
- 目的探讨转染beclin1基因诱导三阴性乳腺癌BT-549细胞发生自噬及其对细胞生长的影响。方法将BT-549细胞分为4组,包括空白组、空载体组、脂质体组和目的基因组,并以MDA-MB-231细胞作为阳性对照组。采用Lipofectamine^(TM)2000携带含有beclin1基因的质粒转染BT-549细胞,分别于转染后24、36、48、60h用荧光显微镜观察转染效率;于转染后48h利用RT-PCR检测各组细胞beclin1 mRNA表达情况;转染后各组细胞分别在含10%胎牛血清1640培养基和无胎牛血清1640培养基内培养,并分别于24、48、72、96h和12、24、36、48h采用MTT法检测细胞的增殖率和存活率;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内培养24h后,采用流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期情况;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内生长36h后,经吖啶橙染色观察并比较发生自噬的细胞数。MTT数据按重复测量的方差分析进行统计,其余计量资料按单因素方差分析进行统计,计数资料按照R×C表资料的χ~2检验进行统计分析。结果 48h时携带目的基因的质粒经脂质体转染BT-549细胞的效率最高;目的基因组细胞beclin1 mRNR水平显著高于空白组、脂质体组、空载体组和阳性对照组(P<0.01);在含10%胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞的增殖率显著低于空白组(F=112.1,P=0.00),而在无胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞36h和48h的存活率显著高于空白组(F=37.5,P=0.00);目的基因组细胞的凋亡比例增加(F=3914.4,P=0.00),且细胞处于G0/G1期的比例升高(F=258.8,P=0.00);目的基因组细胞发生自噬的数量显著增加(χ~2=7.7,P=0.00)。结论向三阴性乳腺癌BT-549细胞转染beclin1基因,可提高细胞的自噬水平。该作用可抑制细胞在正常培养环境下的增殖,但对低营养环境下的细胞存活具有保护作用。
- 王梦川吴爱国王日玮原红军李学孝胡斌邵国利纪术峰吴凯范旭龙郑临海
- 关键词：BECLIN自噬
- miRNA-125b-1对乳腺癌SKBR-3细胞放化疗敏感性的影响
- 研究背景
乳腺癌/(breast cancer/)是指发生于乳腺导管上皮细胞的恶性肿瘤,是女性常见的肿瘤之一,约占全身恶性肿瘤的7/%-10/%。全世界每年新发乳腺癌约150万例,死亡约57万例。北美、欧洲等西方...
- 胡斌
- 关键词：微小RNAHER-2
- 文献传递
- miR-125b-1增强乳腺癌SKBR-3细胞对紫杉醇的药物敏感性被引量：4
- 2012年
- 目的探讨miR-125b-1增强紫杉醇对乳腺癌SKBR-3细胞化疗敏感性的影响,及其对靶基因Her2蛋白表达的影响。方法合成miR-125b-1并通过LipofectamineTM2000转染SKBR-3细胞,将实验分为空白对照组(脂质体转染SKBR-3细胞株)、阴性对照组(siRNA转染SKBR-3细胞株)、miR-125b-1组(miR-125-1转染SKBR-3细胞株)3组。分别用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Her2 mRNA和蛋白质表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测miR-125b-1对紫杉醇作用于SKBR-3细胞化疗敏感性的影响。结果 miR-125b-1转染后的SKBR-3细胞中Her2 mRNA和蛋白质水平显著下降;流式细胞仪检测结果显示,转染miRNA-125b-1的SKBR-3细胞G2M期细胞比例显著高于其他组(P=0.000),而空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P=0.094)。三组之间比较,G0-G1期、S期比例差异无统计学意义;用miR-125b-1处理组细胞的IC50与未处理组相比下降2.69倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-125b-1可增强乳腺癌SKBR-3细胞对紫杉醇的化疗敏感性,下调Her2可能是其作用机制之一。
- 胡斌吴爱国李学孝纪术峰王梦川吴凯邵国利
- 关键词：乳腺肿瘤紫杉醇微RNAS
- DNA聚合酶θ表达对MCF-7乳腺癌细胞系体外增殖和早期凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究DNA聚合酶θ(POLQ)在MCF-7乳腺癌细胞系中的表达及其对该细胞系体外增殖和早期凋亡的影响。方法经脂质体LipofectamineTM2000介导将POLQ-siRNA转染入MCF-7乳腺癌细胞系中,MCF-7细胞被分为POLQ-siRNA组、Control-siRNA组和空白对照组;用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(qRT-PCR)和Western blot分别从基因和蛋白水平检测POLQ表达率的变化;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化;用流式细胞术判断转染前后细胞周期和凋亡率的改变。数据采用单因素方差分析和重复测量数据的方差分析进行统计。结果 POLQ在MCF-7乳腺癌细胞系中高表达,其相对分子质量(Mr)>250000,同时在Mr约170000和100000处容易检测到明显的条带。POLQ-siRNA组细胞POLQmRNA平均表达量是空白对照组的(0.12±0.01)倍(P=0.00),POLQ蛋白表达率为(32.0±0.7)%。POLQ-siRNA组细胞增殖能力显著低于空白对照组(P=0.00);POLQ-siRNA组细胞克隆形成率明显低于空白对照组(P=0.00)。转染后48h,POLQ-siRNA组G0/G1期细胞比例显著高于空白对照组(P=0.00),S期细胞比例显著低于空白对照组(P=0.00),细胞早期凋亡率高于空白对照组(P=0.00),阴性对照组与空白对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 POLQ在MCF-7乳腺癌细胞系中高表达,阻断该基因表达可以抑制细胞增殖,同时提高乳腺癌细胞的早期凋亡率。
- 李学孝吴爱国胡斌王梦川纪术峰邵国利吴凯
- 关键词：小干扰RNA凋亡
- 正常和低氧环境下转染beclin-1对乳腺癌细胞BT-549的抑制作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究转染beclin-1基因对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞BT-549在正常及低氧环境下的增殖抑制情况,促自噬和促凋亡作用,以及其对细胞迁移能力的影响。方法利用脂质体将真核载体pDS-RED-C1-beclin-1转染进入BT-549细胞作为实验组,空白组细胞和转染pDS-RED-C1空质粒的细胞分别作为空白对照组和阴性对照组,用RT-PCR检测转染后beclin-1mRNA表达,Western blot检测转染后蛋白表达。在正常及低氧环境下分别培养后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞增殖率,吖啶橙染色后用荧光显微镜观察细胞自噬情况,流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。通过细胞划痕试验研究转染beclin-1基因对细胞迁移能力的影响。RT-PCR和Western blot结果及MTT所测增殖率结果用单因素方差分析,自噬和凋亡的差异采用卡方检验分析。结果 beclin-1基因被成功转染进细胞;转染后目的基因组beclin-1mRNA和蛋白表达均高于对照组,72h最明显。MTT测定结果:正常与低氧环境下实验组48h和72h增殖率均低于对照组(48hP_1=0.002,P_2=0.000;72hP_1=0.006,P_2=0.001;P_1和P_2分别为正常与低氧环境下统计结果),beclin-1与低氧刺激有明显交互作用(P=0.016),即二者能增强彼此对细胞增殖率的抑制作用。吖啶橙染色镜下观察正常和低氧环境下实验组自噬发生率明显高于空白对照组(P_1=0.004,P_2=0.001),阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.050)。流式细胞仪检测正常和低氧环境下实验组凋亡发生率均高于空白对照组(P_1=0.045,P_2=0.008)。体外划痕试验发现转染beclin-1后细胞迁移能力降低。结论在正常和低氧环境下,转染beclin-1基因可抑制TNBC细胞BT-549增殖,促进细胞发生自噬及凋亡,并且降低其迁移能力。
- 原红军吴爱国王梦川王日玮李学孝胡斌邵国利纪术峰吴凯范旭龙郑临海
- 关键词：自噬
- DNA聚合酶θ对乳腺癌细胞株MCF-7放射敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的观察DNA聚合酶θ（POLQ）对人类乳腺癌细胞株MCF-7放射敏感性的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT—PCR）和Westernblot法检测siRNA转染前后POLQ表达率的变化；利用噻唑蓝（MTr）比色法、平板克隆形成实验、流式细胞术对不同实验组进行分析。结果POLQ—siRNA组细胞POLQmRNA和POLQ蛋白表达量分别是空白对照组的（12．16±0．56）％和（32．01±0．65）％（P〈0．01）。转染后72h，POLQ—siRNA组、空白对照组细胞吸光度（A）值分别为（0．76±0．02）和（0．81±0．02），POLQ．siRNA组细胞增殖能力明显低于空白对照组（P〈0．01）；平板克隆形成实验分析结果显示POLQ—siRNA组放射增敏比（SER）为1．24（〉1），表明转染POLQ—siRNA后MCF-7细胞放射敏感性显著增强。结论抑制POLQ表达可以显著提高MCF-7细胞对放射的敏感性。
- 李学孝吴爱国胡斌纪术峰王梦川邵国利
- 关键词：乳腺癌小干扰RNA
