目的筛选金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的RNA干扰靶位,从而有效抑制肝星状细胞的活化,阻断纤维化进程。方法针对TIMP-1基因,设计3个RNA干扰候选靶位,化学合成双链RNA(dsRNA),分别转染经TGF-β1刺激活化的大鼠肝星状细胞。48h后通过荧光定量PCR测定TIMP-1、前胶原-α1(procol-α1)mRNA相对表达量,计算抑制率;并取上清液检测肝纤维化指标,进行比较分析。结果针对TIMP-1基因的3个靶位,dsRNA都能不同程度抑制TIMP-1基因表达(TIMP-1 mRNA相对表达抑制率在3个靶位分别为26.61%、17.42%和68.55%),其下游Procol-α1基因表达也受到抑制(抑制率在3个靶位分别为6.01%、6.57%和62.84%);肝纤维化指标Ⅲ型胶原(Co1-Ⅲ)、透明质酸(HA)和层粘蛋白(LN)的表达也降低,而且针对第3靶位时降低最明显。结论针对TIMP-1基因第3靶位的dsRNA,即"TIMP-1-3组"对TIMP-1及其下游基因表达的抑制作用最强。成功筛选出TIMP-1最有效的RNA干扰靶位,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径打了基础。
