龚秀丽
- 作品数：21 被引量：13H指数：2
- 供职机构：卫生部更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 人羊水祖细胞的分离和基因修饰被引量：1
- 2014年
- 探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。
- 杨辰敏范书玥唐汇祥巩芷娟龚秀丽龚秀丽任兆瑞
- 关键词：血友病B人凝血因子IX基因治疗
- 人凝血因子FⅧ BD区缺失载体对血友病A小鼠基因治疗效果的研究
- 龚秀丽许淼任晓叶郭歆冰陈雁雯曾凡一
- 小鼠胎肝单个核细胞行骨髓腔内注射重建造血系统的效果被引量：2
- 2019年
- 目的·观察用小鼠胎肝单个核细胞悬液行骨髓腔内注射以重建小鼠造血系统的效果。方法·用Ficoll分离技术获取胎龄13.5 d的小鼠胎肝单个核细胞悬液,采用磁珠分选的方法获得造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)并计数。以骨髓腔内注射的方法对137Cs辐射清髓后的小鼠胫骨进行小鼠胎肝单个核细胞移植。对移植后的受体小鼠通过血常规检测、血涂片及骨髓涂片镜检的方法观察造血系统的重建情况。对受体小鼠移植后1年骨髓中的供体HSC进行流式细胞检测。结果·胎龄13.5 d的小鼠胎肝单个核细胞中HSC占0.171%。小鼠胎肝单个核细胞移植后1周,外周血即能探测到供体细胞来源的血细胞;移植后第3周受体小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白基本恢复至辐照前水平;第5周外周血中供体细胞来源的血细胞比例趋于稳定;移植后1年受体小鼠骨髓中的HSC基本来自供体细胞。结论·小鼠胎肝单个核细胞通过骨髓腔内注射的移植方法能高效重建小鼠造血系统。
- 伊庆福迟亚男刘光辉杨冠恒龚秀丽龚秀丽曾凡一
- 关键词：造血干细胞骨髓腔内注射胎肝
- 优化反向PCR法对hTF转基因小鼠整合位点旁侧序列分析
- 2011年
- 自1982年世界上首次通过转基因动物技术获得＂巨鼠＂[1]以来,转基因动物的研究发展迅速。随着多种转基因动物的成功获得,研究者设想利用动物表达外源基因,以动物个体作为一个反应器来生产有价值的蛋白质。
- 谢俊许淼龚秀丽曲立娟颜景斌黄英
- 关键词：转基因小鼠整合位点转基因动物技术外源基因
- 转基因小鼠乳腺上皮细胞的体外培养及其对催乳素反应的研究被引量：4
- 2012年
- 实现转基因生物乳腺反应器对外源蛋白的高效表达是目前生物制药亟待解决的难题。催乳素对泌乳期乳蛋白的合成与分泌具有重要的调控功能。通过转基因小鼠乳腺上皮细胞模型的建立,研究催乳素如何调控乳蛋白的表达,为提高乳腺反应器高效表达外源蛋白提供技术及理论支撑。应用机械破碎及胶原酶消化法,经差速贴壁纯化,成功培养含人转铁蛋白基因的小鼠乳腺上皮细胞,细胞上清液中检测到人转铁蛋白表达。细胞经牛催乳素诱导后人转铁蛋白的表达水平明显升高。利用转基因小鼠乳腺上皮细胞模型,可以进行催乳素和环境因素等对乳腺上皮细胞合成及分泌蛋白能力影响的研究。
- 蒋世忠闫亚彬谢飞龚秀丽黄英吕宝忠
- 关键词：转基因小鼠乳腺上皮细胞催乳素转铁蛋白
- 卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。
- 徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔
- 关键词：卵母细胞基因操作位点特异性重组
- 利用TALEN治疗β654地中海贫血模型小鼠
- 目的:β珠蛋白第2内含子的第654位碱基C→T突变(IVS-2-654 C→T,β654)是导致中国人β地贫特有的、也是最常见的突变类型之一。该突变会产生IVS-2剪接异常的β-珠蛋白mRNA,导致β地贫表现型。TALE...
- 方彧聃龚秀丽巩芷娟鲁丹桑晓杨冠恒朱怡文蔡勤张敬之
- 文献传递
- 人凝血因子FVⅢ BD区缺失载体对血友病A小鼠基因治疗效果的研究
- 目的:血友病A是由于人凝血因子Ⅷ(hFVIII)缺乏所导致的遗传病。本研究旨在探究血友病A基因治疗载体对血友病A小鼠的治疗效果。方法构建带有CMV启动子的hFVIIIBD质粒载体,使用受精卵原核显微注射技术制备转基因小鼠...
- 龚秀丽许淼任晓叶郭歆冰陈雁雯曾凡一
- 文献传递
- 不同家系HSV-tk转基因小鼠诱导肝损伤的研究
- 巩芷娟马晴雯龚秀丽蔡勤朱怡文黄淑帧曾凡一
- 慢病毒介导的人转铁蛋白转基因小鼠的研制及表观遗传修饰对其表达的影响
- 转铁蛋白(Transferrin,TF)是一种与铁结合的糖蛋白,在细胞生长、分化、增殖过程中起着十分重要的功能。因此, 利用转基因动物生物反应器生产转铁蛋白在生物制药上具有重要的意义和前景．但是外源基因整合率不高和外源基...
- 颜景斌潘树标郭歆冰张敬之龚秀丽曾溢滔
- 文献传递
