刘安元 作品数:27 被引量:140 H指数:4 供职机构: 南华大学医学院病原生物学研究所 更多>> 发文基金: 湖南省教育厅科研基金 国家自然科学基金 湖南省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 经济管理 更多>>
GFP-hDaxx融合蛋白高表达抑制活化巨噬细胞分泌TNFα 2003年 目的 研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌TNFα的影响。方法 将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP hDaxx转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP -hDaxx在巨噬细胞内的表达与定位。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS诱导激活巨噬细胞后 ,在 0 .5、4、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子TNFα的含量。结果 GFP -hDaxx在巨噬细胞内即时高表达且定位于细胞核。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌TNFα量明显降低 (在 4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论 hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌TNFα。 何爱桃 唐旭红 周艺 杨露清 刘安元 万艳平关键词:巨噬细胞 TNFΑ hDaxx融合蛋白高表达降低活化巨噬细胞分泌IL-1β 2004年 目的 研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌IL - 1 β的影响。方法 将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,利用Westernblotting检测表达产物。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS刺激巨噬细胞后 0 .5h、4h、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子IL - 1 β的含量。结果 pEGFP/hDaxx在巨噬细胞内成功表达GFP -hDaxx融合蛋白。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β量明显降低 (在4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论 hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β。 余敏君 钟飞 刘安元 朱翠明 万艳平关键词:HDAXX 巨噬细胞 IL-1Β hDaxx高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡 2005年 目的 利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在HeLa细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对HeLa细胞凋亡的影响。 方法 将pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western -blotting鉴定GFP -hDaxx融合蛋白的表达,荧光显微镜观察GFP -hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位,用地塞米松诱导HeLa细胞凋亡,细胞用Giemsa染色后,观察细胞形态变化并计算HeLa细胞凋亡率。 结果 GFP -hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中成功表达并定位于细胞核。地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异(P >0 .0 5 ) ,而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低(P <0 .0 1) ,即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡率。 结论 Daxx为调控蛋白,GFP -hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中表达并定位于细胞核,且hDaxx即时高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡。 刘安元 谭立志 万艳平 吴移谋 刘传爱 余敏君关键词:HDAXX HELA细胞 凋亡 Caski细胞内Daxx与HPV16 E2蛋白的结合作用 2015年 目的研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E2蛋白在Caski细胞内与Daxx的相互作用,探讨它们在HPV16所致宫颈癌发生发展中的作用。方法利用间接免疫荧光染色技术观察HPV16 E2和Daxx在Caski细胞中的分布或共定位;通过免疫共沉淀试验和免疫印迹分析HPV16 E2与Daxx在Caski细胞内的相互作用。结果在Caski细胞内,Daxx和HPV16 E2主要分布于胞浆,少数分布于胞核,且两种信号在细胞浆内有一定的共存;抗E2抗体能沉淀Daxx,反之抗Daxx抗体同样能够沉淀HPV16 E2。结论 HPV16 E2与Daxx在Caski细胞存在直接的相互作用。 刘越 唐双阳 刘安元 蔡恒玲 安振 刘志敏 万艳平关键词:人乳头瘤病毒16型 CASKI细胞 E2蛋白 GFP-hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中的表达与定位 被引量:3 2003年 目的 构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx并在巨噬细胞中表达 ,为研究hDaxx对巨噬细胞凋亡及分泌活性的影响提供实验基础。 方法 将hDaxxcDNA片段亚克隆入载体pEGFP ,构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblotting鉴定表达产物 ,荧光显微镜观察GFP -hDaxx融合蛋白在细胞内的表达与定位。 结果 成功构建了GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx ,GFP -hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核。 结论 pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中即时高表达GFP 谭立志 刘传爱 刘安元 万艳平关键词:HDAXX 巨噬细胞 HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响 被引量:1 2008年 目的:研究HPV16 E6(human papillomavirus type16 E6)蛋白与hDaxx(human death domain associated protein)的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响,为探索HPV16 E6蛋白的致癌机制提供实验依据。方法:构建pGADT7-E6和pGBKT7-hDaxx重组载体,利用酵母双杂交系统检测HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用,并用Western印迹法检测二者在酵母菌中的表达。将E6与hDaxx的真核表达载体共转染HeLa细胞,用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡,FCM法检测凋亡率。结果:E6蛋白与hDaxx在细胞内存在相互作用。共转染pcDNA3.1(-)/E6和pcDNA3.1(-)/hDaxx的HeLa细胞,随pcDNA3.1(-)/hDaxx转染量的增加凋亡率上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HPV16 E6蛋白与hDaxx在细胞内相互作用,hDaxx过表达可提高表达E6蛋白的HeLa细胞对5-FU的敏感性,且这种关系存在剂量依赖性。E6蛋白可能通过和hDaxx的相互作用抑制细胞凋亡。 王鑫 朱翠明 刘安元 尹卫国 李金丽 蔡恒玲 万艳平关键词:HELA细胞 双杂交系统技术 细胞凋亡 人巨细胞病毒IE1蛋白促进巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α及凋亡 被引量:1 2008年 为了研究HCMV IE1-GFP融合蛋白瞬时高表达对巨噬细胞分泌活性及其凋亡的影响,将真核表达载体pEGFP/IE1转染至巨噬细胞(Mφ),转染48h后,用荧光显微镜观察GFP-IE1融合蛋白或GFP的表达与定位。ELISA法检测细胞培养上清中IL-1β或TNF-α的含量以及用RT-PCR检测其mRNA的表达情况,并收集Mφ经PI染色后流式细胞术(FCM)检测其凋亡率。结果发现,GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时表达且定位于细胞核,GFP定位于整个细胞中。GFP-IE1融合蛋白在Mφ内瞬时高表达使Mφ分泌IL-1β和TNF-α量及其mRNA表达量均增加且Mφ凋亡率明显上升,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而GFP表达对Mφ分泌及其凋亡无影响(P>0.05)。HCMV IE1瞬时高表达可上调Mφ分泌细胞因子IL-1β和TNF-α并促进Mφ凋亡。 刘安元 陈琳 万艳平 陈熙 朱翠明 余敏君 曹清香关键词:巨噬细胞 IL-1Β TNF-Α 凋亡 硕士研究生培养模式构建研究——以南华大学研究生教育为例 本文简述了国内外研究生培养模式的发展史:学徒式培养模式、专业化模式、协作式培养模式、教学式培养模式;并分析了南华大学研究生教育现状及特点,并探讨了构建硕士研究生培养模式的思路。 周晓东 樊华 刘锋 刘安元 张良久关键词:研究生教育 教育质量 课程设置 文献传递 16S rDNA技术在鼻咽癌患者和正常人咽部细菌组成中的比较研究 被引量:4 2009年 目的比较分析鼻咽癌患者和正常人咽部标本中的细菌种类和比例,探讨细菌感染和鼻咽癌的关系。方法选择1 1例初次确诊的鼻咽癌患者以及1 1例与鼻咽癌患者年龄和性别匹配的健康对照者,两组1年内均未使用抗生素、化疗等药物。提取咽拭子中的细菌总DNA,针对1 6 S rDNA保守区设计通用引物进行PCR扩增,PCR产物克隆到T载体,在转化的白色克隆中随机挑选1 0 0个左右进行测序。将获得的1 6 S rDNA序列与网上已公布的1 6 S rDNA序列进行Blast比对,分析克隆群中细菌的种类和比例。结果1 1例鼻咽癌患者中9例结核分枝杆菌和奈瑟菌占优势菌群;另2例排第四和第五位,而在1 1例健康对照者中未发现结核分枝杆菌和奈瑟菌。鼻咽癌患者与健康对照者的菌群分布明显不同。结论用1 6 S rDNA技术发现鼻咽癌患者与正常人咽部细菌组成存在较大的差异,结核分枝杆菌和奈瑟菌感染可能与鼻咽癌相关。 江青山 肖建华 刘安元 沈宝茗关键词:RDNA 鼻咽癌 咽拭子 hDaxx基因转染抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡 2004年 利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对巨噬细胞凋亡的影响。将pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblot鉴定Daxx的表达 ,荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位 ,用地塞米松诱导巨噬细胞凋亡 ,细胞用Giemsa染色后 ,观察细胞形态变化并计算巨噬细胞凋亡率。结果显示 :GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中成功表达并定位于细胞核 ,且GFP hDaxx融合蛋白不影响Daxx的特异性 ;地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低 (P <0 0 1) ,即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡率。Daxx为调控蛋白 ,GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核 ,且hDaxx即时高表达可抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡。 刘安元 万艳平 谭立志 吴移谋 余敏君关键词:HDAXX 巨噬细胞 凋亡