刘志敏
- 作品数：79 被引量：579H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 一种具有促增长作用的融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种具有促进机体增长作用的融合蛋白及其编码基因与应用。其目的是提供一种具有促进机体增长作用的融合蛋白及其编码基因与其在制备儿童及成人生长激素缺乏症治疗性药物中的应用。该融合蛋白的氨基酸残基序列如SEQ ID ...
- 刘志敏王楠赵洪亮薛冲张伟熊向华杨秉芬姚学勤
- 文献传递
- 一种具有抗肿瘤作用的融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种具有抗肿瘤作用的融合蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的融合蛋白的氨基酸残基序列如序列表中的SEQ ID NO：5所示。本发明的具有抗肿瘤作用的融合蛋白可作为预防和/或治疗由人乳头瘤病毒感染引起的适应症...
- 刘志敏张士猛赵洪亮薛冲张伟黎明熊向华
- 文献传递
- 一种具有抗肿瘤作用的融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种具有抗肿瘤作用的融合蛋白及其编码基因与应用，其目的是提供一种具有抗肿瘤作用的融合蛋白及其编码基因与以该融合蛋白为活性成分的预防和/或治疗由人乳头瘤病毒感染引起的肿瘤疫苗。该融合蛋白是具有序列表中的SEQ ...
- 刘志敏张士猛赵洪亮薛冲张伟黎明熊向华
- 文献传递
- 不同信号肽对胞外β-(1,3)-葡聚糖酶在巴斯德毕赤酵母中表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:在胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽的N端添加不同类型的信号肽,研究不同信号肽对其在巴斯德毕赤酵母中表达水平的影响。方法:通过融合PCR方法将α成熟交配因子(MFα)、成熟交配因子Pre肽(αPre)和共翻译转运信号肽(Bip信号肽)等3种信号肽的DNA片段连接至胞外β-(1,3)-葡聚糖酶成熟肽基因的5′端,利用PCR扩增包含其自身信号肽的胞外β-(1,3)-葡聚糖酶基因,将上述4种基因片段分别插入pPIC9质粒,再转化巴斯德毕赤酵母GS115宿主菌并诱导表达;测定胞外β-(1,3)-葡聚糖酶的活性,检测其表达水平。结果:目前在毕赤酵母中已广泛使用的MFα信号肽介导的胞外β-(1,3)-葡聚糖酶表达水平最高,其次是αPre,Bip信号肽介导的该酶表达水平是酶自身信号肽介导的表达水平的2倍。结论:共转运信号肽能够提高胞外β-(1,3)-葡聚糖酶的表达水平。
- 杜济良赵洪亮薛冲任敏刘志敏
- 关键词：信号肽巴斯德毕赤酵母
- 人神经营养因子-3重组逆转录病毒的包装与鉴定被引量：1
- 2001年
- 在逆转录病毒载体pLXSN中引入人神经营养因子 3(hNT 3) ,构建成重组质粒pLXSN NT3,转染包装细胞PA317后经G418筛选得到几个稳定产毒的细胞克隆。测定这几个克隆的病毒滴度 ,最高达到 1 6 0× 10 5 ,且产毒细胞株不产生复制型病毒。PCR和大乳鼠背根神经节活性检测证明hNT 3已整合到宿主细胞基因组并能稳定表达。
- 欧阳立明周涛薛冲刘志敏张嗣良
- 关键词：逆转录病毒载体重组病毒
- 逆转录病毒载体构建的hNT-3基因在大鼠成纤维细胞中的表达被引量：2
- 2002年
- 为了检验重组逆转录病毒对体外培养细胞的感染能力和效率 ,用逆转录病毒载体构建的人神经营养因子 3(pLXSN NT3)感染大鼠原代成纤维细胞 ,经G4 18筛选获得了稳定整合有外源hNT 3的工程细胞株 .RT PCR证实了外源基因hNT 3已整合到宿主细胞基因组 ,并可合成其mRNA ;PCR检测方法证明细胞株不含具有感染能力的病毒 ;Western印迹证明了细胞能正确表达hNT 3;大乳鼠背根神经节检测了细胞上清液中的NT 3生物活性 .
- 欧阳立明周涛薛冲刘志敏张嗣良
- 关键词：逆转录病毒载体基因治疗基因表达大鼠成纤维细胞
- 生长激素释放激素和人血清白蛋白融合蛋白的克隆表达被引量：4
- 2007年
- 目的:通过与人血清白蛋白(HSA)融合,延长生长激素释放激素(GHRH)在体内的半衰期。方法:根据毕赤酵母偏爱密码子重新设计GHRH的核酸序列,并通过化学合成和重叠PCR法将GHRH的N端与HSA的C端通过一个11肽的接头连接,获得GHRH和HSA融合的全长基因序列。构建pPIC9-HSA-GHRH表达载体,电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌,对表达产物进行分离纯化和生物学活性分析。结果:克隆了HSA-GHRH融合基因,构建了pPIC9-HSA-GHRH融合表达载体;电击转化后通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌;经分离纯化后,对表达产物的生物学活性分析显示其在体内有促进生长的作用。结论:与人血清白蛋白的融合有效地提高了GHRH的表达水平,并延长了GHRH的半衰期。
- 王楠赵洪亮刘志敏刘党生薛冲熊向华
- 关键词：生长激素释放激素人血清白蛋白毕赤酵母生物学活性
- 基因定位修复技术——嵌合修复术(chimeraplasty)
- 2001年
- 传统的以病毒DNA为载体的基因治疗方法存在病毒导入的靶向性差、整合位点的特异性差、基因剂量的可控性差以及病毒载体具有一定的免疫原性的缺点 ,而实际上许多单基因遗传病只要将突变的单个碱基校正就能达到基因治疗的目的 ,不必置换或整合入整个基因 .嵌合修复术 (chimerplasty)是近年来迅速发展起来的一种基因定位修复技术 ,该技术利用RNA/DNA嵌合体分子与要修复的宿主染色体DNA碱基序列互补而精确定位并原位修复 ,也可用于人工定点突变 ,已在单基因遗传病的基因治疗及植物遗传改良等方面获得了成功的应用 .介绍了该技术的原理、应用举例及前景 .
- 欧阳立明张嗣良刘志敏
- 关键词：基因治疗
- 不同分泌信号对豹蛙酶在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:研究不同分泌信号对豹蛙酶(ONC)在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响。方法:根据已知天然ONC的氨基酸序列,结合酵母偏爱密码子,设计并合成了ONC基因序列,通过融合PCR获得了不同分泌信号与ONC的融合基因,将其克隆至表达载体pPIC9k中,然后将线性化的重组表达载体电击转化GS115毕赤酵母感受态细胞,通过SDS-PAGE检测目的蛋白表达量。结果:糖基化ONC表观相对分子质量为(14～16)×103,且其糖基化不均匀,非糖基化蛋白肽链的相对分子质量约为12×103;采用不含EAEA结构的α交配因子作为分泌信号时ONC没有表达,利用含EAEA结构的α交配因子和α交配因子的pre肽作为分泌信号时均能够显著提高其表达量。结论:采用含EAEA结构的α交配因子和α交配因子的pre肽作为分泌信号均能够显著提高ONC在巴斯德毕赤酵母中的表达量。
- 何庆赵洪亮薛冲姚学勤孙博刘志敏
- 关键词：巴斯德毕赤酵母糖基化
- 基质金属蛋白酶及其组织抑制剂研究进展被引量：47
- 2004年
- 基质金属蛋白酶家族是细胞外基质降解过程中的重要酶类,组织金属蛋白酶抑制剂是基质金属蛋白酶的天然抑制物。研究证实,细胞外基质中基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的失衡与多种病理机制有关,尤其与肿瘤的侵袭和转移密切相关。本文就基质金属蛋白酶及其组织抑制剂的性质、结构以及功能进行了综述。
- 闫训友薛冲刘志敏张惟广
- 关键词：基质金属蛋白酶细胞外基质降解组织金属蛋白酶抑制剂肿瘤
