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高效液相色谱法检测大豆1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶活性的研究被引量：2: 2007年; 建立了大豆1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶高效液相色谱法活性分析体系。利用KromasilC18(250mm×4.6mm,5μm)反相色谱柱,以260nm为探测波长,以甲醇和1%醋酸水溶液梯度溶液为流动相,流速梯度为初始0.25mL/min,7min降至0.15mL/min,15min升至0.5mL/min,确定了S-腺苷蛋氨酸(SAM)、腺嘌呤和腺苷标准品的出峰时间分别为25,12和16min。从大豆黄化幼苗下胚轴中提取ACC合酶,与等体积S-腺苷蛋氨酸标准品在30℃恒温水浴中作用1h,利用高效液相色谱体系检测到的产物峰与腺嘌呤标准品一致,经电喷雾电离质谱(ESI-MS)确定,产物峰中含有m/z为136.1的腺嘌呤准分子离子峰(M+H)+。; 关永贺杨君包永明刘明安利佳; 关键词：高效液相色谱 S-腺苷蛋氨酸腺苷腺嘌呤

大豆1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶顺式天然反义转录物的分析鉴定: 2008年; 1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase,ACS)是植物乙烯生物合成途径中的关键酶,催化了乙烯生物合成中由S-腺苷蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)转化为1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylate,ACC)这一限速步骤。ACC合酶由多基因家族编码,在转录及转录后水平上受到多种生物和非生物因素的差异调节,其表达调节机制复杂,尚未完全清楚。最近的研究揭示,在植物中发现的一些天然反义转录物(Natural antisense transcripts,NATs)在基因表达调节机制中发挥了不可忽视的作用,因而天然反义转录物的研究受到了广泛的关注。本研究利用RT-PCR法在6种中国东北大豆中克隆出一种ACC合酶基因天然反义转录物,序列测定结果表明这是一种顺式天然反义转录物(cis-NAT),命名为ASACS2。实时定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)测定结果表明,ASACS2与其高丰度表达的正义转录物SACS2伴随表达,并且在营养生长期得到了积累。令人感兴趣的是,6个大豆品种中ASACS2和SACS2的表达量保持一定比例,且表现出品种特异性。目前的研究工作揭示了一种新的NATs可能参与的乙烯生物合成的调控机制,为转基因育种和植物发育调控研究提供了新的思路。; 刘明杨君安利佳; 关键词：大豆实时定量RT-PCR

花粉管通道法转化大豆的分子表征被引量：3: 2004年; 采用花粉管通道技术将含有 gus基因的pBI12 1质粒DNA导入辽豆 14 ,从处理的 10 0朵花中获得 5 3粒种子。经PCR检测 5 3粒种子的幼苗 ,共检测出 6株阳性植株。采用RT PCR和GUS组织化学染色法对所获得阳性植株进行检测 ,其中 2株幼苗 (T0 代 17号和 33号 )均出现阳性结果 ,进一步对这 2株阳性植株进行Southernblot检测 ,同样获得了阳性结果。上述检测结果表明 ,gus基因已整合到染色体上并得到了表达。对转基因植株后代进行了PCR跟踪检测 ,结果从 17号株系的 2 8株中检测出 19株阳性植株 ,33号株系的 35株幼苗中检测出 17株阳性植株 ,表明 gus基因可以在转基因植株后代遗传。本研究结果为大豆花粉管通道转化技术提供了比较充分的分子生物学证据。; 王利华刘明苏乔高晓蓉安利佳; 关键词：大豆花粉管通道法转基因植株分子生物学 GUS基因

花粉管通道法转化影响因素的分析被引量：13: 2007年; 花粉管通道法转化过程中外源基因转化途径、转化受体细胞、转化时间是重要的影响因素;结合大豆花粉管通道形成与受精过程,突出受体细胞的感受态的获得,对转化操作要点加以分析,为花粉管通道法的进一步研究指明方向。; 刘明杨君安利佳; 关键词：花粉管通道法

T-DNA整合的研究进展被引量：8: 2004年; 根癌农杆菌介导的基因转化过程中 ,T DNA的整合是关系到外源基因能否稳定遗传的关键步骤。影响T DNA整合的因素很多 ,包括毒性蛋白、寄主因子等等 ,对此加以综述 ,同时阐述了T; 杨继芳刘明安利佳

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刘明