刘明智
- 作品数：5 被引量：73H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：广东省海洋渔业科技推广专项项目广东省科技计划工业攻关项目广东省农业领域重大科技专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 嗜水气单胞菌气溶素和溶血素基因的克隆与结构预测被引量：11
- 2010年
- 从患出血病草鱼体上分离出1个菌株,传统分类学及16SrRNA基因鉴定其为嗜水气单胞菌,人工感染实验显示该分离菌株为强毒株。克隆该菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因,序列分析显示这2个基因只有46.7%的同源性。Blast分析显示,hlyA基因与GenBank上已登录的hlyA序列具有较高的同源性,而aerA基因与已登录的aerA基因以及一些hlyA序列也具有较高的同源性。对与aerA基因同源性较高的这些hlyA序列进行结构域预测,发现它们均具有APT结构域和气溶素结构域,说明它们实际上应是aerA基因,只是命名上与hlyA基因混淆。用DNAstar软件预测aerA和hlyA的抗原区,显示它们均具有很好的抗原性。用特异性引物检测菌株的aerA基因和hlyA基因,结果显示2株毒力株均有特异条带,而无毒株则未扩增到特异条带,说明aerA和hlyA有可能作为鉴定嗜水气单胞菌毒力菌株的标记。
- 刘明智叶星田园园邓国成马冬梅白俊杰
- 关键词：嗜水气单胞菌溶血素基因
- 嗜水气单胞菌外膜蛋白W基因的表达及其免疫原性分析被引量：22
- 2011年
- 从患暴发性败血病的草鱼病灶处分离鉴定了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)Wp3菌株。以其基因组DNA为模板扩增外膜蛋白W基因(OmpW),该基因全长为865 bp,开放式阅读框(ORF)为615 bp,与标准株ATCC7966的OmpW基因的同源性为99.8%。根据ORF序列设计引物扩增OmpW成熟肽编码序列并将其插入到表达载体pQE30中,转化大肠杆菌,经诱导可表达分子量为24.7 kD的带His标签的融合外膜蛋白His-W。用此融合蛋白免疫草鱼,所得草鱼血清经ELISA分析显示呈现阳性反应,说明重组蛋白能诱导产生抗体。采用实时荧光定量PCR分析草鱼头肾组织IgM基因表达水平的变化,结果显示免疫组IgM的表达量均明显高于空白组,其中低浓度免疫组(2μg/g)与空白对照组的差异显著(P<0.05),说明融合蛋白可使草鱼产生良好的免疫应答并上调抗体基因表达、产生高效抗体。保护性实验显示,不同免疫剂量均可使免疫组获得较高保护率(57%?86%)。结果显示,重组嗜水气单胞菌外膜蛋白W可作为草鱼嗜水气单胞菌基因工程亚单位疫苗。
- 刘明智叶星田园园马冬梅张莉莉迟妍妍邓国成
- 关键词：基因工程表达免疫原性IGM保护率
- 草鱼出血病混合感染的嗜水气单胞菌的分离、鉴定与理化特性被引量：46
- 2009年
- 从患出血病草鱼的肝脏病灶中分离筛选出2株致病菌。取病鱼样品组织过滤液接种CIK细胞、培养,电镜下观察到细胞质中含有草鱼呼肠孤病毒样颗粒和包涵体,病毒颗粒大小65nm～70nm,包涵体0.46μm～1.81μm。人工回归感染实验显示分离的菌株及细胞毒悬液均能使草鱼致病死亡。对分离菌株进行细胞形态学、理化特性分析及药敏试验,初步判定所分离的2株菌均为嗜水气单胞菌。进一步对菌株进行DNA分子鉴定,结果显示2株菌的16SrRNA基因、促旋酶亚单位蛋白(gryB)基因均与GenBank上的嗜水气单胞菌相应的基因具有较高的同源性。在根据已知序列分别构建的2个基因的分子系统进化树中2株菌均与嗜水气单胞菌聚类。同时2个菌株均可扩增到气溶素基因(aerA)和丝氨酸蛋白酶基因(ahpA),提示它们均可能为嗜水气单胞菌强毒株。综合人工回归感染实验与毒力基因鉴定结果可认为所分析的草鱼出血病病例存在着病毒与嗜水气单胞菌的混合感染。
- 邓国成江小燕叶星刘明智许淑英刘礼辉白岳强罗霞
- 关键词：草鱼出血病嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因
- 嗜水气单胞菌气溶素和溶血素基因的克隆与分析
- 从患出血病草鱼体上分离出2个菌株,分别命名为wp3和zc1.传统分类学及16s rRNA基因鉴定为嗜水气单胞菌.对此2菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因进行克隆、...
- 刘明智叶星
- 关键词：嗜水气单胞菌溶血素基因
- 嗜水气单胞菌鉴定、重组外膜蛋白W的制备及免疫原性研究
- 草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是我国淡水养殖的“四大家鱼”之一，一直以来是中国大部分地区的主养品种，在我国农业经济中具有重要的意义。由于高密度养殖以及水质环境的日益恶化，草鱼养殖过程病害的发生日...
- 刘明智
- 文献传递
