刘晓平
- 作品数：63 被引量：224H指数：9
- 供职机构：北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 逆转录病毒携带白细胞介素-12转染树突状细胞体外诱导特异免疫杀伤肝癌细胞被引量：6
- 2005年
- 目的探讨逆转录病毒携带白细胞介素(IL)12转染树突状细胞(DC)体外诱导免疫杀伤肝癌细胞的效能及其机制。方法感染指数(MOI)为100,含IL12的重组逆转录病毒修饰肝癌患者外周血DC(DCIL12),酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测DCIL12(5×103个/ml)培养上清中IL12和γ干扰素(IFNγ)水平,以冻融肝癌细胞株HepG2(1×107个/ml)所获得的肿瘤相关抗原(TAA)刺激DCIL12,MTT法检测TAA负载的DCIL12刺激同源T淋巴细胞(1×105个/ml)增殖分化能力,细胞毒试验检测DCIL12诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其上清液对HepG2肝癌细胞株杀伤作用,ELISA法检测CTL上清液IFNγ水平。结果DC经IL12基因修饰后48h分泌高水平IL12(24.35±5.40)ng/L及IFNγ(725±30)ng/L,均显著高于未转染DC组(P<0.01及P<0.05)。DCIL12诱导的CTL及其上清液对HepG2均有显著杀伤作用,杀伤率显著高于未转染DC组,分别为(82.43±8.70)%vs(57.4±4.3)%(P<0.01)和(76.45±8.50)%vs(18.23±5.30)%(P<0.01),DCIL12诱导的CTL上清液IFNγ水平显著高于未转染DC组,分别为(1125.0±32.7)ng/Lvs(281.3±14.7)ng/L(P<0.01)。结论IL12基因修饰增强DC体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗肝癌免疫,其机制与IL12基因修饰促进DC分泌IL12、增强T淋巴细胞活化及分泌IFNγ密切相关。
- 刘晓平李宝金张超
- 关键词：逆转录病毒白细胞介素-12树突状细胞体外诱导免疫机制
- 人T-bet基因的体外扩增及克隆和鉴定
- 2007年
- 目的:克隆人T-bet基因,构建其真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。方法:实验于2005-07/2006-07在北京大学深圳医院中心实验室完成。①根据Genebank的人T-bet基因的全长cDNA序列,设计合成一对附加BglⅡ和SalⅠ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物。②分离人外周血单个核细胞,提取RNA,用反转录-聚合酶链反应方法将T-bet的编码序列cDNA扩增,装入pMD18-T载体并送去测序。③BglⅡ+SalⅠ双酶切质粒pMD18-T-bet,经琼脂糖电泳切胶回收T-bet片段,将T-bet插入载体pEGFP-C1构建成重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。④用双酶切和聚合酶链反应对插入片段进行分析和验证。结果:①反转录-聚合酶链反应产物经琼脂糖电泳结果显示在预期位置有相对分子质量为1608bp的特异性扩增带。②测序结果证实,T-bet的编码序列和Genbank中T-bet mRNA序列相同。③双酶切和聚合酶链反应结果证实插入片段序列正确。结论:实验成功扩增出人T-bet基因,构建了基因重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet,为探索T-bet基因对免疫细胞的调节作用和肿瘤基因治疗奠定了基础。
- 郝颖刘晓平徐勤魏小勇李宝金伊远学陶剑平张超张立兵
- 关键词：T淋巴细胞转录因子
- 术前肝纤维化指数对肝癌手术疗效及预后的影响
- 2017年
- 目的探讨术前肝纤维化指数(HFI)对肝癌手术疗效及预后的影响。方法 2011年4月至2015年4月,将北京大学深圳医院接受肝癌切除术的65例患者分为低指数组(HFI≤5.4)与高指数组(HFI>5.4)。分析两组术后疗效及预后情况。结果术前资料,两组性别、年龄、谷氨酰转肽酶、透明质酸、血小板、肝功能分级、HBV-DNA拷贝量比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。术中、术后资料,两组肿瘤数目、肿瘤最大径、肝纤维化类型、术后血管侵犯情况、切缘情况、肝门静脉癌栓和HBVDNA变化比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。低指数组并发症发生率20.0%,复发率23.3%,1、3、5年生存率分别为93.0%、53.0%、53.0%;高指数组并发症发生率22.9%,复发率25.7%,1、3、5年生存率分别为72.0%、29.0%、25.7%,两组生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤数目>3、HFI>5.4、肝、门静脉癌栓是肝癌术后复发的独立危险因素。结论术前肝纤维化指数对手术疗效及预后均有显著影响,是术后复发的独立危险因素。
- 谢勇马晓飞刘晓平黄志峰欧希刘吉奎
- 腹腔镜下脾囊肿的保脾术探讨被引量：10
- 2010年
- 目的探讨腹腔镜下脾囊肿保脾手术的可行性。方法应用腹腔镜微创器械和镜下单人双手操作缝合技术为8例脾囊肿施行保脾手术,根据囊肿所处的部位、大小、性质,采用囊肿完整剥除4例,脾部分切除2例,囊肿去顶开窗引流2例。结果8例脾囊肿都成功地完成了腹腔镜下去除囊肿和脾脏的保留,手术时间60～120min,平均100min;术中出血量60～120ml,平均80ml。术后无出血、感染等并发症,4～6d出院。8例术后随访1～72个月,平均38个月,恢复良好,无复发。结论腹腔镜下去除囊肿而保存脾脏的术式可行。
- 彭毅杨崇毛钟立明张风涛刘晓平熊沛
- 关键词：腹腔镜脾囊肿保脾手术
- CD4+T细胞新家族成员——Th17被引量：1
- 2009年
- 抗原特异的CD4＋T辅助细胞（Th细胞）在获得性免疫中起重要作用，人们根据分泌细胞因子的不同以及介导免疫功能的不同将它分为Th1和Th2两个亚群，共同前体细胞是Th0。Th1主要分泌IFN-1、IL-2、IL-18等细胞因子，介导细胞免疫，与自身免疫病及细胞内寄生病原体清除密切相关；
- 吴立旋张维刘晓平
- 关键词：CD4+T细胞家族成员分泌细胞因子获得性免疫T辅助细胞IL-18
- 胆总管囊肿内引流术后胆肠吻合口处巨大结石病1例
- 2011年
- 1病例资料
患者女,41岁,胆囊切除术后15年余,出现上腹部包块伴反复上腹部疼痛2年余入院。患者15年前＂因胆囊结石外院行胆囊切除术＂,具体手术方式不能提供。2年前发现上腹部异常包块并逐渐增大,伴反复上腹疼痛。疼痛无明显放射性,伴有发热、畏寒、恶心、呕吐等不适,无皮肤巩膜黄染。
- 袁晓东刘晓平田培凯骆必伟谢勇刘吉奎
- 关键词：胆总管囊肿巨大结石
- FOXP3基因下调EMT抑制肝细胞癌细胞迁移
- 2023年
- 目的 探讨FOXP3基因对肝细胞癌细胞迁移能力的影响及机制研究。方法 利用慢病毒感染的方式构建FOXP3稳定敲低的细胞模型。采用qRT-PCR和Western blot实验验证病毒感染效率。利用划痕实验检测肝癌细胞的迁移能力,并采用Western blot的方法检测下调FOXP3基因后上皮细胞-间充质转化(EMT)通路相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Slug的表达变化。结果 感染FOXP3-shRNA后,肝癌细胞HepG2和MHCC97H中FOXP3的表达水平显著降低。体外试验证明敲低FOXP3可显著抑制肝癌细胞的迁移能力。Western blot实验表明下调FOXP3可抑制EMT通路,上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin及Slug的表达。结论 下调FOXP3通过介导EMT抑制肝癌细胞的迁移能力;FOXP3可能作为肝癌复发转移的潜在治疗靶点。
- 黄志锋矫元君徐喆刘吉奎黄东欧希刘晓平
- 关键词：肝细胞癌FOXP3迁移上皮间充质转化
- 联合肝叶肝段切除治疗多叶段肝内胆管结石的临床体会
- 2007年
- 目的探讨联合肝叶肝段切除治疗多叶段肝内胆管结石的方法及疗效。方法回顾性分析2004年12月～2007年3月联合肝叶肝段切除治疗多叶段肝内胆管结石12例的临床资料。结果全组无手术死亡,术后并发膈下感染者1例(8%),腹腔脓肿1例(8%),胆漏2例(16%),1例合并乙肝患者术后一过性肝衰(8%),均经抗感染、止血、引流,对症处理和支持疗法而获痊愈。结论联合肝叶肝段切除术是治疗多叶段肝内胆管结石安全有效的手段。
- 尹耀新龙光辉刘晓平熊沛钟立明周晓初叶建宇彭毅
- 关键词：胆石病肝内胆管结石肝叶切除术
- FOXP3 shRNA3对肝癌细胞趋化因子及受体CXCL12、CXCL11、CXCR4、CXCR7作用的研究被引量：2
- 2018年
- 目的研究FOXP3 shRNA对肝癌细胞株SMMC-7721和MHCC-97H的趋化因子及受体CXCL12、CXCL11、CXCR4、CXCR7的影响。方法设计三种编码FOXP3 shRNA的FOXP3干扰慢病毒,sh-FOXP3-1-pGreenPuro、sh-FOXP3-2-pGreenPuro和sh-FOXP3-pgreenpuro并分别转染SMMC-7721和MHCC-97H细胞。q-PCR检测各组CXCL12、CXCL11、CXCR4、CXCR7 mRNA的表达情况;Western Blot检测各组CXCL12、CXCL11、CXCR4、CXCR7蛋白的表达情况。结果经菌落PCR和测序验证证明三个FOXP3干扰慢病毒载体构建正确;三种干扰序列中sh-FOXP3-1干扰效果最明显,因此后期实验都使用sh-FOXP3-1进行下面的实验。研究显示:(1)与对照组相比,sh-FOXP3-1组的CXCL12、CXCL11、CXCR4、CXCR7 mRNA表达明显下降,差异具有统计学意义。(2)与对照组相比,sh-FOXP3-1组的CXCL12、CXCL11、CXCR4、CXCR7蛋白表达明显下降,差异具有统计学意义。结论干扰FOXP3的表达后,能减少趋化因子CXCL12、CXCL11、CXCR4、CXCR7的表达。
- 欧希张光涛田佩凯陈景森徐喆谢勇王爱红刘吉奎刘晓平
- 关键词：FOXP3趋化因子趋化因子受体肝癌细胞
- T-bet和c-FLIP双基因共表达质粒的构建及生物学活性检测被引量：1
- 2008年
- 目的构建携带T-bet和c-FLIP双基因的真核表达载体及检测其生物学活性。方法采用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出T-bet和c-FLIPcDNA,利用pIRES和pEGFP-C1,构建T-bet和c-FLIP双基因真核表达载体pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP。采用非脂质体的脂质型介导载体将pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP转染至外周血淋巴细胞,观察T-bet和c-FLIP在外周血淋巴细胞中的表达,并检测其诱导淋巴细胞的抗凋亡作用及Th1/Th2细胞偏移。结果成功构建pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP质粒,运用非脂质体的脂质型介导载体将该质粒转染淋巴细胞,其转染率为34.6%。流式细胞仪分析未经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理的淋巴细胞在CH-11作用24h后,细胞的凋亡率分别为(50.12±8.02)%;经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理1d的淋巴细胞,其细胞凋亡率分别下降到(5.73±0.37)%;双基因表达的淋巴细胞的Th1型细胞因子IFN-γ表达水平明显高于空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞组(P<0.01),且Th2型细胞因子IL-4表达水平较空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞低(P<0.01),差异有统计学意义。结论转染T-bet和c-FLIP共表达基因后的T淋巴细胞可产生抗凋亡作用及向Th1细胞分化。
- 伊远学李宝金刘晓平张超张维冯子毅冷希圣
- 关键词：T-BET基因PEGFP-C1生物学活性共表达
