史须
- 作品数：8 被引量：53H指数：5
- 供职机构：北京大学基础医学院人类疾病基因研究中心更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金国家科技部专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 硫氧还蛋白对氢醌细胞毒性的抑制被引量：18
- 2003年
- 目的 氢醌引起细胞凋亡 ,可能是通过降低细胞内巯基水平及升高活性氧水平改变细胞内氧化还原状态。鉴于硫氧还蛋白在维持细胞氧化还原状态平衡上也起着重要作用 ,本研究探讨人硫氧还蛋白(hTRX)对氢醌细胞毒作用有无影响。方法 采用脂质体法 ,将真核表达质粒pVP2 2 hTRX和pVP2 2分别转入人胚肾细胞中 ,并将获得的G4 18抗性单克隆细胞株hTRX12和VP2 2细胞进行Western印迹法分析。分别用荧光探针DCFH DA法、碘化丙啶染色法及MTT法测定活性氧水平、凋亡率及细胞存活率。结果 用不同浓度氢醌处理hTRX12细胞与VP2 2细胞 ,hTRX过度表达可降低氢醌所致的活性氧水平升高 ,降低氢醌诱导的凋亡 ,抑制氢醌的细胞毒性。另外 ,用重组人硫氧还蛋白 (rhTRX)与氢醌同时处理未转染人胚肾细胞 ,也可观察到类似结果。结论硫氧还蛋白可对抗氢醌的细胞毒性 。
- 申东晓史须王应傅娟玲周宗灿
- 关键词：硫氧还蛋白转染氢醌细胞毒性
- 人TRAIL cDNA的真核表达和体外肿瘤细胞的凋亡诱导作用被引量：14
- 2001年
- 目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（ TRAIL）全长 cDNA及其胞外区真核表达产物体外诱导肿瘤细胞的凋亡作用，为 TRAIL基因治疗提供实验依据。方法 从胎心 cDNA文库中经 PCR扩增获得两种形式 cDNAs，构建相应的真核表达载体后进行基因转染，并筛选得到稳定表达细胞株；收集表达上清进行肿瘤细胞的体外凋亡诱导，同时观察凋亡相关蛋白 TFAR19与表达上清共同存在时对肿瘤细胞的作用。结果 成功获得表达两种目的蛋白的真核细胞系，其表达上清均能诱导肿瘤细胞 HeLa和 Hec-1a的凋亡，而且 TFAR19能增强表达上清的凋亡诱导作用。结论 证明 TRAIL基因的真核表达产物同样能诱导肿瘤细胞凋亡，如有 TFAR19存在则效果更佳。
- 史须黄家强张颖妹宋泉声马大龙
- 关键词：CDNA真核表达细胞凋亡TFAR19
- NF-κB_3结合位点在人TNF-α基因转录调节作用中的研究
- 2002年
- 目的 :探讨TNF α启动子中 3个κB位点在调节基因转录中的作用及其与核蛋白作用的亲和力关系。方法 :用含不同调节区域的重组报告基因进行HL 6 0细胞的基因转染 ,检测LPS刺激前后及κB3 反义寡核苷酸封闭后的报告基因表达水平 ;提取LPS刺激 6h的HL 6 0的细胞核蛋白 ,用凝胶迁移率改变实验及竞争结合实验比较NF κB与TNF α的 3个NF κB位点的亲和力。结果 :尽管TNF α基因中 3个κB位点都参与该基因的诱导和非诱导性转录调节 ,但κB3 位点的作用更为重要 ;3个κB位点能同LPS刺激和非刺激的HL 6 0细胞核蛋白发生特异性结合 ,但LPS刺激的蛋白 DNA复合物电泳条带明显增粗 ,尤其κB3 位点出现 2条明显的特异性条带 ;3个κB位点与LPS诱导后HL 6 0核蛋白的亲和力强弱顺序依次为 :κB2 >κB1 >κB3。结论 :TNF α基因的 3个κB位点都能与NF κB结合 ,从而参与调节HL 6 0细胞TNF α组成性表达和LPS诱导性表达。尽管κB3 位点在对LPS刺激的反应性中发挥的作用最大 ,但这种效应与其同核蛋白亲和力的大小无关。
- 史须李卓娅龚非力冯纬徐勇熊平
- 关键词：核因子-ΚB脂多糖
- Chitosan-DNA介导关节基因转移的体外研究被引量：5
- 2003年
- 目的 :探索体外Chitosan对关节软骨细胞、滑膜细胞的转染。方法 :分离培养兔正常滑膜细胞、软骨细胞 ,使用荧光质粒 pEGFP -C3作为报道基因 ,制备Chitosan -DNA超微颗粒转染兔正常软骨细胞、滑膜细胞 ,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果 :Chitosan能将DNA带入胞内 ,该DNA超微颗粒随时间的延长可缓慢进入胞内 ,其包被的DNA也可以被缓慢释放 ,且对软骨细胞的转染能力强。结论 :Chitosan在体外可介导关节软骨细胞、滑膜细胞基因转移 ,为今后关节疾病非病毒基因转移的研究提供实验依据。
- 张晓玲史须于长隆傅欣张继英
- 关键词：CHITOSAN滑膜细胞基因转染非病毒载体
- IL-18对慢性乙型肝炎患者Th1/Th2细胞分化的影响被引量：7
- 2003年
- 目的 :观察IL 18对慢性乙肝患者Th1/Th2细胞分化的影响。方法 :分离 4 0例慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 (peripheralbloodmonoclearcells,PBMC) ,分别与植物血凝素 (PHA ,10 0mg/L)、HBcAg(1mg/L)、HBeAg(1mg/L)单独或联合IL 18(10 μg/L)体外培养 4 8h ,ELISA法检测培养液中IL 2、IFN γ、IL 4、IL 10水平。 2 0例健康人群作对照。结果 :IL 18对健康人群PBMC产生的Th1/Th2类细胞因子无明显影响 ,但对慢性乙肝患者在IL 18和HBcAg或IL 18和HBeAg联合诱导下则显著增强PBMC产生的Th1类细胞因子IL 2和IFN γ ,但对Th2类细胞因子IL 4和IL 10无明显影响。结论 :IL 18增强慢性乙肝患者Th1类细胞因子的优势表达 ,从而促进Th1细胞的优势分化 。
- 孙长宇余祖江安敬军史须
- 关键词：IL-18慢性乙型肝炎细胞因子
- NF-κB结合位点在LPS诱导人TNF-α基因转录中的调节作用被引量：6
- 2001年
- 为探讨人TNF α基因启动子区域NF κB结合位点对LPS诱导性基因表达的调节作用 ,将构建的含人TNF α基因启动子区域及其不同缺失片段的pGL2萤光素酶报道基因重组体 ,体外转染HL 60细胞 ,观察LPS刺激对TNF基因启动子指导萤光素酶表达的影响 .发现TNF α基因启动子区域的 3个NF κB结合位点的存在是该基因最大组成性表达和LPS诱导性表达所必需 ;将这 3个位点缺失可完全阻断报道基因的LPS诱导性表达 ,并使其组成性表达明显受到抑制 (P <0 .0 0 1) .缺失κB1和κB2位点 ,使基因组成性表达与LPS诱导性表达均减少约 50 % (P <0 .0 1) ,但诱导倍数则与非突变体相近 ;反之 ,用κB3反义寡核苷酸封闭κB3位点 ,保留κB1和κB2功能 ,使LPS诱导性基因表达抑制 70 % (P <0 .0 0 1) ,诱导倍数明显降低 .保留原有κB3位点 ,再将κB3位点取代κB1和κB2位点 ,可使基因组成性和诱导性表达几乎完全恢复 ;将κB3位点向TSS移近 (- 98→ - 52 ) ,取代Sp1位点 ,虽然κB1和κB2位点仍然缺失 ,但仅一个κB3位点即可使基因组成性和LPS诱导性表达恢复到 80 % .用反义寡核苷酸封闭这个κB3位点 ,不但可使TNF α启动子完全丧失对LPS的反应性 ,还可完全阻断所控基因的组成性表达 .结果表明 ,人TNF α启动子区域 3个NF κB位点均参与该?
- 史须卜夏黄家强熊平徐勇李卓娅龚非力
- 关键词：核因子ΚB结合位点转录基因调控
- 1.人TRAIL cDNA的真核表达及其体外诱导肿瘤细胞凋亡效应;2.NFκB活化诱导剂筛选的建立;3.非病毒DNA导入系统体内外应用的初步研究
- TRAIL是TNF家庭成员之一,广泛表达于多种正常细胞的表面.它具有诱导多种肿瘤细胞和转化细胞发生凋亡,而对多数正常组织和细胞没有杀伤作用的特点,因此它在肿瘤的治疗中具有光明的前景.分别用将表达两种蛋白的细胞株培养上清和...
- 史须
- 关键词：真核表达TFAR19
- 谷胱甘肽合成抑制对人胚肾细胞的毒作用被引量：3
- 2002年
- 目的 研究细胞谷胱甘肽 (GSH)合成抑制对人胚肾细胞的影响。方法 用GSH合成特异抑制剂 (BSO)抑制GSH合成 ,从而降低胞内GSH的水平。测定BSO处理不同时间人胚肾细胞内GSH的水平、细胞周期的变化、活性氧水平、细胞凋亡率和细胞存活率。结果 细胞内总GSH水平随BSO处理时间的延长而下降。处理 2 4h时 ,总GSH水平下降至对照的 10 % ,分析发现细胞周期G2 M期增多 (P <0 0 1) ,S期减少 (P <0 0 5 ) ;但活性氧水平、细胞凋亡率及细胞存活率没有明显改变。处理 48h时 ,总GSH水平下降至对照的 4% ,细胞存活率明显降低 (P <0 0 1) ,活性氧水平明显升高(P <0 0 1)。细胞凋亡率直到处理 72h时升高才有显著性 (P <0 0 1,n =3 ) ,此时细胞内总GSH已基本耗竭。结论 由于GSH水平下降而引起的氧化还原状态失衡可能是凋亡发生的普遍诱导因素。
- 申东晓傅娟玲史须周宗灿
- 关键词：谷胱甘肽人胚肾细胞细胞周期氧化还原状态肾毒性
