姚萍萍
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
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- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
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- Taqman-MGB双重探针PCR技术检测含89K毒力岛猪链球菌2型被引量：9
- 2009年
- 目的建立同时检测猪链球菌(Streptococcus suis,SS)种特异性16S rRNA及其89K毒力岛基因的SS2中国毒力株双重荧光定量PCR方法。方法利用SS种特异性16S rRNA和89K毒力岛基因的特异性序列设计引物和MGB探针。优化荧光定量PCR反应条件和反应体系,并对21株猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果该技术的种特异性16S rRNA及其89K毒力岛两基因检测灵敏度分别为6个拷贝/反应(或12cfu/mL)及27拷贝/反应(或58cfu/mL);重复性实验,变异系数为0.30%～2.11%;从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。用该方法对有关菌株进行考核,21株SS2菌检测结果均为SS种特异性16S rRNA基因阳性,其中15株含有89K毒力岛的SS2菌株的89K毒力岛基因检测均阳性;而非SS菌株的16S rRNA和89K毒力岛基因检测结果均为阴性。对49份呼吸道咽拭子、血液应急样本等进行实际考核,有2份血液样本16S rRNA基因阳性,其中1份血液样本89K毒力岛基因阳性。结论本次建立的Taq Man-MGB双重探针荧光定量PCR方法特异、快速、敏感,可特异性鉴定SS2中国毒力株(含有89K毒力岛),区分SS与非SS菌以及是否含有89K毒力岛基因,该方法的建立将有益于目前针对猪链球菌2型中国毒力株快速定量检测,以及疑似猪链球菌病患者病原的早期甄别、猪链暴发疫情调查及猪群暴发或带菌调查与评估等。
- 朱水荣王志刚杨婷婷金大智张政徐宝祥姚萍萍
- 关键词：猪链球菌2型RDNA基因
- 环介导等温扩增法应用于肠出血性大肠埃希菌O157：H7的检测被引量：3
- 2009年
- 目的建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速鉴定检测肠出血性大肠埃希菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）0157：H7的方法。方法应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP），针对EHEC0157：H7的0157抗原编码rfbE、志贺样毒素stx2、H7鞭毛抗原编码fliC基因分别设计引物，并对LAMP反应条件和反应体系进行优化。对2株种系背景明确的实验对照菌EHEC0157：H7标准菌株、17株0157地方分离菌株、33株非0157其他肠道菌株进行检测，并与PCR结果比较，验证该方法的特异性、敏感性。结果具有相应靶基因的O157菌株经LAMP检测，其结果均与PCR法相同，呈绿色且电泳有相应条带为阳性，非O157其他肠道菌株均检测呈橙色并电泳无相应条带为阴性。该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1．5h左右，该体系检测限均为26CFU／反应，而且其检测结果在白光下通过肉眼即可判断。结论本次建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测鉴定EHECO157：H7，无需昂贵的仪器，非常适合基层检验部门及小型实验室与流行病学人员现场监测使用，具有较为广泛地应用前景。
- 朱水荣陈寅王志刚金大智陆群英姚萍萍
- 关键词：大肠杆菌O157核酸扩增技术环境监测
