- 氟啶酮对刚地弓形虫出胞及其宿主细胞的影响
- 研究背景及目的： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii，T.gondii)是在细胞内寄生的原虫之一，其生命周期主要包括侵入细胞、细胞内繁殖、逸出细胞、侵入新的细胞几个步骤。其中，入侵机制已有大量的研究，但如何...
- 孔璟
- 关键词：刚地弓形虫脱落酸宿主细胞
- 刚地弓形虫RH株速殖子协同VP-16体外杀伤小鼠结肠癌细胞ct26的作用被引量：5
- 2010年
- 目的探讨刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞周期的影响及其协同细胞周期特异性抗癌药依托泊甙(VP-16)对ct26细胞的杀伤作用。方法建立弓形虫RH株速殖子与小鼠结肠癌ct26细胞不同比例的共培养模型(虫/细胞比例分别为2:1、4:1、8:1、16:1),流式细胞仪检测24h细胞周期改变;以虫细胞比例2:1预先感染ct26细胞24h,CCK-8比色法观察不同浓度VP-16对细胞增殖抑制的改变;荧光显微镜观察VP-16(40μg/mL)对感染虫体细胞的形态学改变。台盼蓝染色观察不同浓度VP-16分别作用弓形虫RH株速殖子悬液(1×106/mL)2h、4h、12h、24h的虫体存活度改变。琼脂糖凝胶电泳观察VP-16(20μg/mL)对虫体DNA影响。结果流式细胞仪检测发现各浓度弓形虫速殖子均可明显改变ct26细胞24h周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P<0.01)。2×106个速殖子感染细胞24h可使S期和G2期细胞百分比共同增长14.92%。CCK-8比色法检测结果显示虫细胞比例2:1预先感染ct26细胞24h可有效增强各浓度VP-16对ct26细胞的杀伤作用;Hochest33258染色结合荧光显微镜观察到虫体胞质寄生形态及VP-16诱导感染细胞凋亡典型形态;10μg/mL及更高浓度VP-16作用弓形虫4h以上均可使虫体全部死亡;琼脂糖凝胶电泳发现VP-16(20μg/mL)可使弓形虫速殖子DNA呈现典型的云梯状条带。结论弓形虫RH株速殖子可使小鼠结肠癌ct26细胞发生G2/M期,可有效增强细胞周期特异性抗癌药VP-16的抗癌作用,且弓形虫增殖亦明显受抑并发生凋亡。
- 高剑叶彬武卫华孔璟
- 关键词：弓形虫依托泊甙
- 脱落酸抑制剂氟啶酮对小鼠弓形虫病的影响
- 2012年
- 目的观察脱落酸抑制剂氟啶酮对小鼠弓形虫病的影响。方法给感染弓形虫RH株的小鼠腹腔注射氟啶酮,观察小鼠生存延长率、体重变化;光镜及电镜观察腹腔中弓形虫形态;脏器组织印片评估体内弓形虫扩散情况。结果与对照组相比,氟啶酮治疗的小鼠弓形虫病症状出现晚且程度较轻,生存时间延长(P<0.05),生存延长率为45%,体重减少率为6.13%,而对照组体重减少率为7.23%;对照组小鼠腹腔中以游离速殖子为主,实验组则以细胞内虫体为主;实验组小鼠脏器受虫体累及的时间稍晚,感染程度也比对照组轻。结论氟啶酮能对小鼠弓形虫病起抑制作用。
- 孔璟叶彬武卫华
- 关键词：刚地弓形虫脱落酸
- 刚地弓形虫对荷瘤小鼠肿瘤组织微血管生成的抑制作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察刚地弓形虫感染对BALB/c小鼠ct26细胞皮下移植瘤血管生成的抑制作用及其作用机理。方法建立刚地弓形虫感染的小鼠结肠癌ct26皮下移植瘤模型,观察弓形虫感染对小鼠的生存延长率、对肿瘤的质量抑制率,并采用免疫组化方法检测弓形虫感染对肿瘤组织MVD、VEGF、TSP-1表达的影响。结果弓形虫感染的小鼠生存时间比对照组长(P<0.05),生存延长率为57.45%,肿瘤质量抑制率为47.23%;弓形虫感染的小鼠肿瘤组织中MVD及VEGF表达水平低于对照组(P=0.005,P=0.03),TSP-1表达高于对照组(P=0.005)。结论弓形虫感染能抑制荷瘤小鼠肿瘤组织微血管生成;下调VEGF及上调TSP-1与弓形虫感染抗肿瘤血管生成有关。
- 孔璟高剑叶彬武卫华
- 关键词：刚地弓形虫肿瘤血管生成微血管密度血小板反应素-1
- 刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌细胞ct26体外增殖和细胞周期的影响被引量：6
- 2010年
- 目的研究刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖和细胞周期的影响,并探讨其作用的分子机制。方法取对数生长期的小鼠结肠癌ct26细胞,建立弓形虫与ct26复合感染度(moi)分别为1∶1、2∶1、4∶1、8∶1、16∶1的共培养试验模型,台盼兰排斥试验连续7d绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测8∶1共培养模型组6h、12h、24h、48h细胞周期改变;采用半定量RT-PCR方法分别检测ct26细胞cyclinB1、cdc2基因转录水平变化;Westernblot方法检测细胞周期蛋白cyclinB1蛋白水平变化。结果台盼兰排斥试验发现各比例组弓形虫均能有效抑制小鼠ct26细胞的体外增殖,且呈现前4d缓慢抑制,4d后细胞大量死亡的现象,以8∶1模型组的增殖抑制作用最明显,感染7d后细胞抑制率达80.77%(P<0.01);流式细胞仪检测发现8∶1模型组弓形虫可在各作用时间明显改变ct26细胞周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P<0.01),24h达到作用高峰,使G2/M期百分比升高12.77%,48h则细胞G2/M期百分比下降;弓形虫感染ct26细胞3～24h,细胞cdc2转录水平在各个时间点未见明显变化,细胞cyclinB1从转录水平和蛋白水平均呈现为感染3h时表达增强,随后各时间点均明显降低的现象,cyclinB1基因转录水平在感染后24h只达到对照组的16.55%。结论弓形虫RH株速殖子可明显抑制小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖,感染前期以诱导细胞发生G2/M期阻滞为主要机制,细胞周期蛋白cyclinB1活性下降在G2/M期阻滞中起主要作用。
- 高剑叶彬武卫华孔璟
- 关键词：刚地弓形虫细胞周期蛋白
- hsa-mir-373对肿瘤细胞中E-钙黏蛋白表达的影响被引量：2
- 2011年
- 旨在探讨hsa-mir-373重组真核表达载体对肿瘤细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。根据miR-Base数据库中hsa-mir-373序列,设计并构建hsa-mir-373重组表达质粒和对照质粒。采用脂质体转染技术将mir-373重组质粒和阴性对照质粒分别转染BIU87细胞株。采用荧光显微镜观测转染效果。Western blotting检测细胞的E-钙黏蛋白表达量,免疫细胞化学方法检测细胞E-钙粘蛋白的分泌。结果显示,酶切和测序证明hsa-mir-373真核表达载体构建成功。E-钙黏蛋白在转染细胞中表达有明显增加。人工构建的hsa-mir-373载体经转染后可增加肿瘤细胞中E-钙黏蛋白的表达量。
- 武卫华孔璟叶彬
- 关键词：E-钙黏蛋白
- hsa-mir-520真核表达载体的构建及对E-钙粘蛋白表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的构建hsa-mir-520真核表达载体,并转染大肠癌细胞SW-480细胞,检测细胞中E-钙粘蛋白表达情况。方法依据miRBase数据库中hsa-mir-520序列,设计并合成寡核苷酸片段,构建hsa-mir-520表达载体和对照载体。采用脂质体转染方法分别将mir-520表达载体、及对照质粒转染大肠癌细胞SW-480细胞株。采用酶切、测序检测载体构建;Western blot检测E-钙粘蛋白的表达。结果酶切和测序表明hsa-mir-520真核表达载体构建成功。Western blot结果显示与转染对照质粒和未转染的细胞相比,转染了hsa-mir-520重组质粒的细胞中E-cadherin蛋白的表达明显增加(P<0.01),密度扫描半定量分析显示E-cadherin蛋白的表达增加了大约40%。结论成功构建了hsa-mir-520和对照的真核表达载体,hsa-mir-520质粒转染大肠癌细胞SW-480后可增加E-钙粘蛋白的表达。
- 张潞渝孔璟李春蕾高剑叶彬武卫华刘革力
- 关键词：E-钙粘蛋白SW-480细胞
- 超声造影剂协同下的高强度聚焦超声对包虫原头蚴酶活性的影响被引量：5
- 2013年
- 为探索高强度聚焦超声结合适宜比例的微泡造影剂对离体细粒棘球绦虫原头蚴酶活性的影响,实验分离包虫原头蚴,在原头蚴悬液中加入比例为1:80的微泡造影剂(含氟脂质体微泡),以声功率为50W的高强度聚焦超声波辐照30s,辐照后悬液涂片作酶组织化学染色,检测原头蚴三磷酸腺苷酶、葡萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性。结果显示,超声剂量相同时,微泡造影剂组的原头蚴三磷酸腺苷酶和琥珀酸脱氢酶活性明显低于单纯超声辐照组(P<0.05);葡萄糖-6-磷酸酶活性有一定降低;阴性对照组无酶反应物产生。高强度聚焦超声结合微泡造影剂能增强对离体原头蚴三磷酸腺苷酶和琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。
- 孔璟蔡辉叶彬张静韩秀敏杨永海李发琪
- 关键词：包虫原头蚴高强度聚焦超声微泡造影剂三磷酸腺苷酶葡萄糖-6-磷酸酶
- 高强度聚焦超声结合微泡造影剂杀伤原头蚴的效果被引量：9
- 2011年
- 目的探讨高强度聚焦超声结合不同比例微泡造影剂对离体原头蚴的杀伤效应。方法在原头蚴悬液中加入不同比例的微泡造影剂(含氟脂质体微泡),以相同超声功率及辐照时间作用(治疗声功率为50W,辐照时间为30s)。台盼蓝排斥试验计数原头蚴杀伤率,光镜检测原头蚴形态结构变化。结果超声剂量一定时,加入适宜比例的微泡造影剂组原头蚴杀伤率比单纯超声辐照组高(P<0.05);随着微泡造影剂比例的增大,原头蚴杀伤率呈增高趋势;原头蚴结构损伤严重,台盼蓝染色深,被膜皱缩体积变小,甚至被膜崩解成碎片,小钩及钙颗粒散在分布。结论 HIFU结合微泡造影剂能增强对离体原头蚴的杀伤效应。
- 孔璟叶彬张静韩秀敏杨永海李发琪
- 关键词：高强度聚焦超声波微泡造影剂棘球蚴原头蚴
- 自制高吸水性树脂对棘球蚴囊液吸水性能的测试被引量：2
- 2011年
- 目的制备淀粉类高吸水性树脂,测试其对棘球蚴囊液吸水性能及影响因素。方法以玉米淀粉和丙烯酸为原料,N,N-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,过硫酸铵为引发剂,采用水溶液聚合法制备淀粉接枝丙烯酸高吸水性树脂。分别测定高吸水性树脂在不同环境温度(37℃、25℃、20℃)、不同粒径对去离子水、0.9%生理盐水、无水酒精和棘球蚴囊液吸水倍率,并测定了不同粒径高吸水性树脂吸水后凝胶的保水性能。并通过光镜观察吸水前后的凝胶结构。结果自制的淀粉类高吸水性树脂在去离子水中瞬时吸水倍率在700倍以上,在棘球蚴囊液中为200～300倍,生理盐水中为25倍左右,在无水乙醇中树脂颗粒几无吸水能力。160～180目大小的颗粒其对去离子水的最大吸水倍率可达到700倍,在4～8min内即可达到吸水高峰;80～120目大小的颗粒吸水倍率亦可达700倍,但在吸水后16min时才达到吸水高峰。160～180目大小的颗粒常压室温(25℃)放置2d保水率为55%,0.5mm×0.5mm×0.5mm颗粒常压室温(25℃)放置5d保水率为58%。20℃、25℃和37℃时同样大小的树脂颗粒其吸水倍率接近。10倍光镜即可观察到树脂颗粒吸液后形成的网格状结构。结论成功制备各种粒径的高吸水性树脂颗粒,其吸水倍率可达700倍;树脂颗粒越小,其吸水速度越快,但保水效果较差;颗粒越大,吸水速度越慢,但保水效果好。温度变化对吸水速率影响不大。溶液性质,尤其是溶液含水量对树脂颗粒吸水率影响较大,因此树脂颗粒在去离子水中吸水倍率最高,其次棘球蚴囊液,生理盐水和对无水酒精几乎无吸水能力。
- 张静孔璟叶彬邹晓毅武卫华
- 关键词：高吸水性树脂
