徐晓明
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控被引量：3
- 2009年
- 目的探讨miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控作用。方法人工合成miRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建重组真核表达质粒,并转染至肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞PTEN基因mRNA转录水平和蛋白的表达水平。结果经酶切和测序鉴定,表明重组真核表达质粒构建正确。转染重组真核表达质粒的A549细胞PTEN基因mRNA转录水平与未转染组相比,差异无统计学意义,蛋白表达水平较未转染组明显降低。结论miRNA-21可能主要在翻译水平调控PTEN基因的表达。
- 徐晓明张政彭惠民晏宁
- 关键词：微小RNA-21真核表达载体肺癌PTEN基因
- microRNA-21调控A549细胞抑癌基因PTEN的研究
- 目的:构建载有microRNA-21的重组真核表达质粒，转入人肺癌细胞，观察microRNA-21对抑癌基因PTEN的调控作用。
方法:人工合成microRNA-21序列，插入到质粒pGenesil-1中，构建...
- 徐晓明
- 关键词：MICRORNA-21PTEN基因真核表达载体基因调控
- 文献传递
- 小鼠微RNA miR-21真核表达质粒的构建及其在小鼠肾小球系膜细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建小鼠微RNA miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中表达。方法人工合成小鼠miR-21基因序列,构建miR-21真核表达质粒pGenesil-miR-21。使用脂质体Lipofectamine2000转染小鼠肾小球系膜细胞后,G418筛选,获得稳定转染克隆,提取总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR技术检测miR-21的表达。结果经酶切鉴定和测序证实,合成的miR-21基因序列完全正确,并已成功克隆到真核表达质粒pGenesil-1上。重组真核表达质粒转染小鼠肾小球系膜细胞后,筛选出的阳性克隆可稳定高表达miR-21。结论已成功构建miR-21真核表达质粒,并在小鼠肾小球系膜细胞中高效表达,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了基础。
- 张政彭惠民徐晓明何晓燕
- 关键词：微RNAMIR-21真核细胞肾小球系膜细胞
- miR-21对早期糖尿病肾病db／db小鼠蛋白尿的影响被引量：3
- 2010年
- 目的了解miR-21对早期糖尿病肾病db／db小鼠24h尿白蛋白、肾小球形态学及其分子机制的影响。方法24只5周龄雄性小鼠分为4组：6只db／m小鼠作为对照组，18只5周龄高血糖且无蛋白尿的db／db小鼠分别随机分为pGenesil—miR-21质粒处理组、对照空质粒处理组及未处理组，每天尾静脉液压法注射质粒30mg·kg^-1·d^-1，直至未处理组db／db小鼠尿白蛋白排泄（UAE）显著高于db／m小鼠组。在光学显微镜下观察肾小球形态大小，计算机计算肾小球面积，实时RT—PCR检测肾脏组织miR-21的表达水平，Western印迹、免疫组化PTEN、p-Akt（Ser473）和P13Kp85d肾脏组织的蛋白质表达水平。结果5周龄db／db小鼠连续注射质粒4周后，未处理组db／db小鼠出现高血糖伴UAE显著增高，提示9周龄db／db小鼠进入早期糖尿病肾病阶段。实时RT-PCR结果显示，在注射pGenesil—miR-21重组质粒的db／db小鼠肾脏组织中，miR-21的表达显著增高（P〈0．01）。光镜观察和肾小球面积测量实验发现，pGenesil-miR-21重组质粒组肾小球显著减小。Western印迹和免疫细胞化学结果显示，miR-21处理组的db／db小鼠肾脏组织中PTEN蛋白较注射对照空质粒和未注射质粒的db／db小鼠组显著降低，而P13K p85α和磷酸化Akt（Ser473）蛋白显著增高（均P〈0．01）。结论miR-21通过特异性靶向调控PTEN／P13K信号传导途径，以抑制肾小球肥大，可能是一个新的糖尿病肾病的保护因子。
- 张政彭惠民陈涛徐晓明何晓燕晏宁
- 关键词：糖尿病肾病微RNAPTEN磷脂酰肌醇3激酶
- 糖尿病肾病相关微小RNA对高糖下肾小球系膜细胞增殖的影响及其机制被引量：5
- 2010年
- 目的探讨在高糖培养条件下,糖尿病肾病相关微小RNA(MicroRNA,miRNA)即miR-21对小鼠肾小球系膜细胞生长、增殖的影响,及miR-21高表达对PTEN/PI3K信号途径的影响。方法采用高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞模拟糖尿病状态,在Lipofectamine2000介导下经miR-21真核表达质粒pGenesil-miR-21转染,G418筛选获得稳定表达细胞株。采用实时RT-PCR检测转染细胞miR-21的表达水平,MTT法检测细胞增殖,细胞免疫化学法和Western blot法检测PTEN/PI3K信号途径关键分子PTEN、phospho-Ak(tSer473)和PI3Kp85α蛋白的表达水平。结果筛选出的肾小球系膜细胞能稳定高表达miR-21;高表达的miR-21对细胞增殖能力有明显的抑制作用,且可显著下调PTEN的表达水平(P<0.05),同时上调phospho-Akt(Ser473)和PI3Kp85α的表达水平(P<0.05)。结论 miR-21可通过特异性靶向抑制PTEN蛋白的表达,提高phospho-Akt(Ser473)和PI3Kp85α蛋白的表达水平,以减缓肾小球系膜细胞增殖,可能为一个预防和治疗糖尿病肾病新型的潜在靶点。
- 张政彭惠民徐晓明陈涛何晓燕
- 关键词：糖尿病肾病微RNASPTENPI3K
