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牦牛乳酸脱氢酶B基因突变体的克隆鉴定研究被引量：5: 2008年; 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析证实牦牛(Bos grunniens)乳酸脱氢酶存在两种类型,根据LDH同工酶谱的特点推测牦牛LDH多态是由B基因变异所致,并由此将凝胶电泳中迁移率快的LDH同工酶谱带称为LDH-Bf类型,迁移率慢的称为LDH-Bs类型.为阐明牦牛LDH变异体的分子机制,实验从牦牛心脏组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法分别克隆了LDH-Bf和LDH-Bs两种类型的B基因cDNA全长序列;序列比对分析发现LDH-Bf和LDH-Bs基因存在4个碱基差异;依据cDNA序列推导的氨基酸序列的比对分析,发现两者之间存在两个氨基酸差异;利用Deepview分子建模软件进行的牦牛H亚基及LDH1突变体的高级结构预测,发现突变的两个氨基酸都能产生新的H键,影响整个蛋白分子的H键网络,并进一步导致蛋白分子空间结构的变化.; 郑玉才赵兴波周静朴影金素钰贺庆华洪键李宁吴常信; 关键词：乳酸脱氢酶基因克隆

藏绵羊肌红蛋白(Mb)基因克隆及肌肉Mb含量的测定被引量：1: 2008年; 为探索藏绵羊适应青藏高原缺氧环境的分子机制,克隆了藏绵羊的肌红蛋白(Mb)基因,纯化了心肌Mb,同时比较了心肌和骨骼肌的Mb含量。用RT-PCR克隆了心肌Mb的cDNA,长度为640 bp,编码153个氨基酸。试验采用盐析、CM-Sephadex离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了藏绵羊Mb,SDS-PAGE分析其分子量约为17kD。组织含量测定表明,藏绵羊心肌中Mb含量极显著高于骨骼肌。; 郑玉才王永邓会平金素钰朴影苏永杰贺庆华; 关键词：藏绵羊肌红蛋白纯化

牦牛乳酸脱氢酶-1两种遗传变异体的纯化及酶学特性比较被引量：6: 2009年; 【目的】从乳酸脱氢酶(LDH)水平上探索牦牛(Bos grunniens)低氧适应性分子机制。【方法】利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析牦牛组织中LDH同工酶谱;用比色法测定牦牛、黄牛和水牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力;采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析从牦牛心肌组织中纯化LDH1(由4个H亚基组成)的2种遗传变异体,进行酶学性质的比较。【结果】电泳方法检测发现牦牛LDH1存在2种遗传变异体,根据电泳迁移率分别命名为快型和慢型(LDH1-F和LDH1-S)。获得纯化的牦牛LDH1-F和LDH1-S,比活力分别为21.4U·mg-1蛋白和17.8U·mg-1蛋白,在SDS-PAGE和PAGE上均显示1条区带。2种变异体以NADH为底物的米氏常数(Km)值差异不大,均显著高于普通牛的LDH1;以丙酮酸钠为底物的Km值LDH1-F小于LDH1-S。试验进一步比较了携带不同LDH1变异体的牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力和各种同工酶谱,未见显著差异,而牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力显著或极显著低于黄牛和水牛。【结论】牦牛LDH12种遗传变异体的Km值存在差异,且Km(NADH)高于普通牛;牦牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力低于普通牛。; 郑玉才赵兴波周静朴影金素钰贺庆华洪键李宁吴常信; 关键词：牦牛乳酸脱氢酶

利用β-乳球蛋白遗传变异体检测牦牛乳中的普通牛乳被引量：1: 2006年; 建立简便、可靠的方法检测牦牛乳中添加的普通牛乳。在牦牛乳中加入5%￣30%的普通牛乳,采用等电点沉淀法制备乳清,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳清蛋白。根据牦牛与普通牛β-乳球蛋白遗传变异体在电泳中的迁移率差异,可检测到牦牛乳中添加的5%的普通牛乳。该法也适用于牦牛奶粉的检测,对牦牛乳制品的质量监测有实际应用价值。; 陈琛胡强郑玉才文勇立陈炜苏永杰朴影; 关键词：牦牛奶粉 Β-乳球蛋白

牦牛PIT-1基因第5、6外显子部分序列的克隆测序被引量：2: 2006年; 利用PCR方法扩增了麦洼牦牛PIT-1基因第5、6外显子的部分序列,扩增片段长度为1 285 bp,克隆到PND-18载体中进行测序,结果牦牛与普通牛的PIT-1基因有97%的同源性,共有28处不同,其中在内含子5的347处有18个碱基的缺失,565处有4个碱基的插入；外显子6有一个碱基突变,并导致氨基酸由普通牛的Thr变为牦牛的Arg。对61头麦洼牦牛和30头九龙牦牛PIT-1基因部分序列进行PCR-RFLP分析,均未检测到多态性。; 朴影金素钰郑玉才苏永杰陈炜; 关键词：牦牛克隆多态性

牦牛血红蛋白β链基因的克隆及序列分析被引量：2: 2007年; 从麦洼牦牛脊髓中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增血红蛋白β链基因,获得了513bp的cDNA,连接到PMD-18载体,进而转化到TOP-10感受态细胞中进行克隆测序。测序结果显示:牦牛血红蛋白β链基因与普通牛相比,序列相似率为99%,存在4个碱基的差异,并导致49、116和134位的3个氨基酸改变。; 朴影郑玉才金素钰苏永杰文勇立陈炜; 关键词：牦牛血红蛋白克隆测序

牦牛肌红蛋白的基因克隆测序、分离纯化、含量及其与乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活力的关系被引量：8: 2007年; 为探索牦牛适应高原缺氧环境的分子机制,测定了麦洼牦牛心肌和骨骼肌中肌红蛋白(Mb)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)活力,并对牦牛Mb进行了分离纯化和基因克隆测序。牦牛心肌和骨骼肌中Mb含量显著高于水牛和黄牛(P<0.01);牦牛、黄牛和水牛心肌MDH/LDH活力比均显著高于骨骼肌;牦牛心肌MDH/LDH活力比显著高于水牛和黄牛,但在不同牛种骨骼肌之间无显著差异。各组织Mb含量与MDH/LDH活力比呈显著正相关。试验用RT-PCR方法从牦牛心肌中克隆了Mb基因,与普通牛相比,核苷酸序列同源性为99.5%,氨基酸序列完全相同;用盐析、CM-Sephadex阳离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了牦牛Mb,SDS-PAGE显示其分子量约为17 ku。; 郑玉才苏永杰文勇立金素钰陈炜周静朴影; 关键词：牦牛肌红蛋白乳酸脱氢酶苹果酸脱氢酶

高原家畜低氧适应的分子机制及其应用研究: 郑玉才文勇立王永金素钰李玉萍司晓辉朴影周静洪键; 1、任务来源：　　四川省青年科技基金课题：“牦牛乳酸脱氢酶-B遗传变异体的分离纯化及其基因的克隆”，No.05ZQ026-024；国家民委课题：“牦牛乳酸脱氢酶-B遗传变异体的纯化及其性质研究”，2004年度；西南民族大...; 关键词：; 关键词：低氧适应分子机制牦牛乳酸脱氢酶

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朴影