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用整体原位杂交法研究微管蛋白基因在斑马鱼胚胎中的表达被引量：3: 1998年; 斑马鱼是一个很好的脊椎动物发育研究模型 ,斑马鱼胚胎发育过程中基因表达调控的研究对揭示脊椎动物形态发生的分子机理非常重要 .微管蛋白固定受精卵细胞质中的形态发生决定子 ,组织形成基本的细胞骨架 ,控制细胞的各种运动 .在脊椎动物中已发现有几种微管蛋白 ,每种微管蛋白都有其特定的表达位点和功能 .本研究用一种 β2 微管蛋白基因的全长cDNA为模板 ,合成地高辛标记的RNA为探针 ,对斑马鱼各时期的胚胎进行整体原位杂交 .β2 微管蛋白基因的mRNA最初出现于斑马鱼囊胚中期胚胎的特定区域 ,随着发育的进行 ,这种mRNA逐渐局限于斑马鱼胚胎的神经系统中 .这些结果表明 ,β2; 李书鸿郭绍东孙方臻; 关键词：整体原位杂交斑马鱼胚胎发育

用mRNA差显法识别金鱼胚胎发育基因的可能性初探被引量：2: 1997年; 动物早期胚胎发育过程中,贮存于卵内的母体mRNA(Maternal mRNA)首先产生作用并随着发育而逐渐降解。许多动物(如鱼类和两栖类)当胚胎发育到囊胚中期前后,合子核基因开始转录新的mRNA。这些mRNA的降解、合成反映了相应基因在发育过程中的作用时间。寻找与发育有关的基因(以下简称发育基因)是从分子水平上研究发育机理的最关键一步。但因为这些基因一般都是表达量极低的调控基因,所以寻找起来十分困难。以往对脊椎动物早期发育基因的识别多参照果蝇等无脊椎动物基因的序列,从基因库中钓取同源基因。差异显示法(mRNA differential display,本文简称mRNA差显法)通过一个较特殊的RT-PCR过程能把极微量的mRNA以及mRNA之间的差异显示出来,因此这一方法在发现高等动物胚胎发育基因的研究中可能具有广阔的应用潜力。笔者一直认为对动物早期胚胎发育的认识最重要的是对母体贮存在卵内的信息的研究,其中一个重要的方面就是对母体mRNA的研究。这里我们使用mRNA差显法在金鱼中进行了识别早期胚胎发育基因的尝试并得到了初步结果。这些结果说明mRNA差显法将会使我们有机会获得与金鱼早期胚胎发育有关的多种基因。; 马海飞李书鸿韩文; 关键词：胚胎发育金鱼基因

通过mRNA差异显示分离一个新的斑马鱼胚胎发育基因被引量：6: 1998年; 无脊椎动物果蝇形态发生分子机理被揭示之后 ,脊椎动物形态发生分子机理的研究成为发育生物学的研究焦点 .作为脊椎动物研究模型的斑马鱼 ,其胚胎发育基因的分离无疑是进行该研究的入手点 .分离斑马鱼胚胎发育基因有多种有效的方法可供选择 .本文用mRNA差异显示技术对斑马鱼卵受精后 4 ,5和 6h(2 8 5℃ )的胚胎 (分别相当于oblong ,dome和shield 3个时期[1] ,分别称为囊胚、原肠胚和神经胚 )的mRNA进行了差异显示 ,对其中一个神经胚特异的cDNA片段 (pNs 2 )进行了克隆和序列分析 ,与Genbank中已有的基因序列比较后发现 ,该片段是一个新的基因片段 .采用整体原位杂交 (wholemountinsituhybridization)技术 ,对该基因在斑马鱼胚胎发育过程中的表达进行了研究。; 李书鸿郭绍东孙方臻; 关键词：斑马鱼基因胚胎发育

mRNA差异显示技术在动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用被引量：1: 1997年; 动物从卵裂开始的早期胚胎发育始终伴随着ｍＲＮＡ不断的合成与降解。最初受着受精卵内母体ｍＲＮＡ的控制。当这些ｍＲＮＡ在发育过程中逐渐被降解时，有些动物（如小鼠）在比较早的时期已有新基因的转录；而有些动物（如鱼类、两栖类）迟到囊胚中期以后，合子核的基因才开始转录新的ｍＲＮＡ。ｍＲＮＡ这种有规律的代谢活动控制着细胞的分化、胚层的形成以及模式形成（ｐａｔｅｒｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）。所有这些ｍＲＮＡ水平上的变化都可以用ｍＲＮＡ差异显示法（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ）检测出来并进而获得与早期胚胎发育有关的基因。ｍＲＮＡ差异显示法是由Ｌｉａｎｇ和Ｐａｒｄｅｅ于１９９２年建立起来的，用于显示两种不同组织之间ｍＲＮＡ差异的方法。基于绝大多数ｍＲＮＡ有一个ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴，选用一个较特殊的３’端引物─５’Ｔ１１ＭＮ３’，其中Ｍ可以是ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ之一，而Ｎ可以是ｄＡＴＰ，ｄＴＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ之一，进行逆转录时，１／１２的ｍＲＮＡ可被逆转录为ｃＤＮＡ。这种ｃＤＮＡ第一链被用来ＰＣＲ扩增，所使用的３’端引物与逆转录引物相同，而５’端引物为１０个碱基的一段寡核苷酸，这类任意（ａｒｂｉｔｒａｒ?; 李书鸿韩文马海飞; 关键词：相关基因 MRNA差异显示

不同纲动物间的细胞核移植——将小鼠细胞核移到泥鳅细胞质中被引量：5: 1998年; 我们以前的细胞核移植工作［１，２］表明：移核卵早期胚胎发育模式（主要指卵裂速度及卵裂模式）与受体卵相同，而与供体核种类无关；供体与受体之间亲缘关系的远近及染色体数目的差异程度，对移核卵囊胚以后的发育有重要影响，但对不同组合间细胞核移植所得囊胚比例影响...; 李书鸿毛钟荣韩文陈惠萍严绍颐夏仕铃戴世行; 关键词：细胞核移植小鼠泥鳅

鼠精子发生时期差异表达基因的克隆: 2001年; 为了分离鼠精子发生时期表达的基因，本文采用mRNA差异显示法，以鼠的粗线期卵母细胞为对照，检测了出生后60天和16天鼠的睾丸，得到12个有差异的片段（Fig.l&Table1)。克隆测序表明，其中5个与已知基因非常吻合，另外6个与一些未知功能的cDNA,ESTs有较高的同源性，只有1个与已知序列没有同源性，Northern杂交分析显示spl和sp8主要在成年鼠睾丸表达（Fig.4B），采用5’RACE对sp1的cDNA进行了全长分析，该基因编码一个推测是高度磷酸化蛋白的541个氨基酸（Fig.2)，其中包括一个核定位信号，无论在核苷酸水平上，还是在氨基酸水平上均没有明显的同源性，仅在2个蛋白区有少量同源氨基酸（Fig.3)。该基因在20-60天龄鼠的睾丸均有表达，并且具有很高的组织特异性-只在睾丸里表达（Fig.4A)。因而，这个基因有可能参与减数分裂及其以后的整个过程，可以认为这是一个新基因，我们把它命名为peat(predominantly expressed in adult testis)。; 王天奇李书鸿等; 关键词：精子发生差异表达基因基因克隆 PEAT

斑马鱼—发育生物学研究的最佳脊椎动物模型: 1997年; 从八十年代初开始的、通过突变体分离早期胚胎发育基因的研究，揭示了无脊椎动物果蝇形态发生的分子机制，成为1995年诺贝尔生理或医学奖的主要内容，同时也标着发育生物学已经成为生物学的带头学科。该成果的取得得益于果蝇具备发育生物学研究模型的特点，即可同时进行胚胎学和发育遗传学研究。在脊动物发育生物学研究方面，由于缺少适当的研究模型，有关早期胚胎发育基因表达调鬼斧神工的研究始终未获突破性进展。包括小鼠、鸡、爪蟾等在一些脊椎动物都只适用于胚胎学或者遗传学某一学科的研究，均不是理想的发育生物学研究模型。一种小型的鲤科鱼－斑马鱼，逐渐成为发育生物学研究的最佳脊椎运动模型。它光周期产卵、卵大，胚胎在体外发育，胚胎发育速度快，早期胚胎完全透明，这些特点使它成为很好的脊椎动物胚胎学研究模型；同时，它个体小，产卵量大，产卵周期短，单倍体、雌核发育二倍体的制作和突变体的获得均较容易，精子可以冷冻保存，所有这些特点又使斑马鱼非常适合于发育遗传学研究。本文将详细论述斑马鱼作为脊椎动物发育生物学研究模型的特点，以及作为模型动物正在进行的有关工作。; 李书鸿; 关键词：斑马鱼发育生物学

斑马鱼卵母细胞的体外成熟及成熟卵的受精发育被引量：3: 1993年; 采用体外培养的方法，研究斑马鱼卵母细胞的成熟过程。Ⅵ时相初级卵母细胞在０．５μｇ／ｍｌ１７ａ－羟基孕酮的ＥＭ－１９９培养液中，８０％氧气，２５℃的体外培养条件下，在４０ｍｉｎ内，胚泡逐渐由卵母细胞中央至动物极边缘１／２处移到动物边缘，进入Ⅴ时相卵母细胞。３０ｍｉｎ后胚泡破裂，胚泡破裂率为５９％，此种卵母细胞继续培养２ｈ才完全成熟，成熟卵不能不滤泡膜中自然排出。; 李书鸿毛钟荣韩文孙志远闫维陈惠萍严绍颐; 关键词：卵母细胞斑马鱼受精体外

转抗冻蛋白基因鱼的研究被引量：7: 1993年; 鱼类抗冻蛋白(AFP)或抗冻糖蛋白(AFGP),可使鱼类体液的冰点降低至-1.9℃左右,并减少冰晶的生长速度,它们的生物活性比小分子NaCl等无机盐、尿素。; 费云标黄涛于建康夏仕玲李光三阎维高素琴毛钟荣李书鸿王壬学张培军严绍颐; 关键词：转基因鱼抗冻蛋白鱼纲

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