李星潘
- 作品数：8 被引量：5H指数：1
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种应用pCold载体表达可溶性广州管圆线虫galectin-1蛋白的方法
- 本发明涉及一种应用pCold载体表达可溶性广州管圆线虫(Angiostrongylus Cantonensis)galectin-1蛋白的方法，步骤如下：(1)引物合成；(2)galectin-1基因的扩增；(3)gal...
- 黄慧聪李星潘赵梦静
- 刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的制备、评价特异性抗刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白8(autophagy protein 8,TgAtg8)多克隆抗体。方法生物信息学方法分析弓形虫基因组中自噬相关蛋白的基因序列和氨基酸序列。以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgAtg8编码基因,克隆入pGEX-6p-1载体,构建pGEX-6p-1-TgAtg8重组质粒,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签亲和层析法纯化表达产物。以纯化的TgAtg8蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,获得特异性抗TgAtg8多克隆抗体。以制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western blotting分析和间接免疫荧光(IFA)检测。结果双酶切和测序结果证实,原核表达质粒pGEX-6p-1-TgAtg8构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,TgAtg8蛋白在E.coli BL21中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约40 000,与理论值相近。Western blotting结果证实,所制备的多克隆抗体能特异性识别融合蛋白TgAtg8和虫株体内天然的TgAtg8蛋白。IFA实验表明,TgAtg8均匀分布于虫体胞浆中,但在自噬诱导培养后,TgAtg8逐渐聚集成颗粒状。结论制备的特异性抗TgAtg8多克隆抗体可用于检测虫体内TgAtg8蛋白在弓形虫自噬形成过程中的变化情况。
- 谭峰华倩倩李星潘李相志梁韶晖
- 关键词：刚地弓形虫细胞自噬多克隆抗体
- 白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP的制备及抗原性分析被引量：1
- 2014年
- 目的克隆、表达白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP编码基因并分析其抗原性。方法运用生物信息学方法分析alALP与aegyptin氨基酸序列(GenBank登录号为ABF18122.1)的同源性、二级结构和抗原肽段。提取白纹伊蚊唾液腺总RNA,根据alALP的基因编码序列(GenBank登录号为AY826121)设计引物,RTPCR扩增目的基因,亚克隆至pGEX-6P-1质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。重组aegyptin相似蛋白(GST-alALP)经还原型谷胱甘肽(Glutathione Sepharose 4B)亲和层析法纯化后,皮下注射免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量60μg,共免疫3次,每次间隔2周,制备小鼠抗GST-alALP血清。分别以小鼠抗GST-alALP血清和白纹伊蚊叮咬后小鼠血清为一抗,Western blotting分析GST-alALP蛋白的抗原性。结果生物信息学预测结果显示,alALP与aegyptin的氨基酸序列具有65.58%的同源性,二级结构高度相似并具有一段保守的抗原多肽。RT-PCR结果显示,alALP成熟肽基因扩增产物约为762 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒pGEX-6p-1-alALP构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约56 000的可溶性重组融合蛋白。Western blotting结果显示,GST-alALP蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和白纹伊蚊叮咬后的小鼠血清识别。结论克隆的alALP成熟肽基因能在原核表达系统中高效表达,且具有抗原性。
- 李星潘曹国梅邢翠翠华倩倩张亮亮梁韶晖
- 关键词：白纹伊蚊原核表达抗原性
- 蚊唾液腺功能蛋白研究进展被引量：1
- 2013年
- 蚊能传播多种疾病,严重危害人类健康。蚊唾液腺中存在多种功能蛋白,它们有些与疾病传播相关,有些参与蚊的吸血作用,有些具有潜在的药理学活性。本文主要对蚊的gSG6、aegyptin、saglin等唾液腺功能蛋白研究进展进行介绍。gSG6是一种潜在的按蚊叮咬的免疫流行病学指示器;aegyptin具有潜在的抗凝血药理学活性;saglin是疟原虫子孢子入侵蚊唾液腺的受体,参与疾病传播过程。同时,对蚊唾液腺其他功能蛋白的研究进展也进行了简单介绍。
- 李星潘梁韶晖
- 关键词：唾液腺
- 白纹伊蚊唾液腺aegyptin相似蛋白(alALP)的重组表达和功能研究
- 蚊能传播多种疾病，严重危害人类健康。蚊唾液腺中存在多种功能蛋白，如抗凝剂、抗炎剂和免疫流行病学分子靶标等。虽然，已有报道蚊唾液腺30KD的蛋白组分是主要的分泌蛋白，具有很强的抗原性，但是其单个成员的蛋白抗原性及是否具有其...
- 李星潘
- 关键词：白纹伊蚊唾液腺抗原性分子标志物
- 文献传递
- 广州管圆线虫半乳糖凝集素-1基因的克隆、表达和凝集反应被引量：2
- 2017年
- 目的克隆、表达广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)半乳糖凝集素-1(galectin-1)基因并分析其凝集反应。方法用Swiss Model分析galectin-1的三维结构。提取广州管圆线虫雌性成虫总RNA,根据galectin-1基因编码序列(Gen Bank登录号为JN133961.1)设计引物,RT-PCR扩增目的基因,亚克隆至p ColdⅢ质粒,转化大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,取重组质粒进行双酶切、PCR鉴定和测序。阳性质粒经0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍柱亲和层析法纯化galectin-1重组表达蛋白后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白表达情况。以广州管圆线虫全虫免疫的小鼠血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)验证目的蛋白。将重组蛋白10倍稀释为5.55×10^(-1)~5.55×10^(-5)ng/μl,显微镜观察其与新鲜的ICR小鼠血液中红细胞的凝集反应。结果 Swiss Model分析结果显示,galectin-1以非二聚体形式发挥作用。galectin-1基因RT-PCR扩增产物约为850 bp,与预期结果一致。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ColdⅢ-galectin-1构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量约36 000的可溶性重组融合蛋白。Western blotting分析结果显示,galectin-1蛋白能被全虫免疫的小鼠血清识别。凝集反应结果显示,galectin-1蛋白与小鼠红细胞发生明显凝集反应的最低浓度为5.55×10^(-4)ng/μl。结论克隆的galectin-1基因能在p ColdⅢ原核表达系统中呈可溶性表达,并与小鼠红细胞发生凝集反应。
- 李星潘赵梦静史晓萌闫兰竹闫宝龙黄慧聪
- 关键词：广州管圆线虫原核表达凝集反应
- 一种新型抗凝剂白纹伊蚊唾液腺aegyptin相似蛋白ALP的表达制备方法和应用
- 本发明涉及一种新型抗凝剂白纹伊蚊唾液腺aegyptin相似蛋白ALP的表达制备方法，步骤如下：(1)优化合成ALP成熟肽DNA；(2)重组质粒pPICZαA-ALP的构建；(3)重组蛋白ALP的表达和纯化。本发明方法利用...
- 梁韶晖李星潘刘文权张亮亮
- 文献传递
- 一种应用pCold载体表达可溶性广州管圆线虫galectin‑1蛋白的方法
- 本发明涉及一种应用pCold载体表达可溶性广州管圆线虫(Angiostrongylus Cantonensis)galectin‑1蛋白的方法，步骤如下：(1)引物合成；(2)galectin‑1基因的扩增；(3)gal...
- 黄慧聪李星潘赵梦静
- 文献传递
