李洪超
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 蛇毒锯鳞蝰素基因Leul4－Lys15－Glu16的定点突变被引量：1
- 1996年
- 本研究的目的是利用蛋白质工程定点突变的方法，在蛇毒锯鳞蝰素基因分子上增加另一个保守序列ＲＧＤ（１４位精氨酸残基，１５位甘氨酸残基，１６位天冬氨酸残基），以其增加该分子的生物活性，并探讨蛋白质一级结构，空间结构和功能的关系。在质粒ｐＪＣ２６４的基础上，利用ＰＣＲ定点突变方法，对蛇毒锯鳞蝰素基因Ｌｅｕ１４－Ｌｙｓ１５－Ｇｌｕ１６进行定点突变，使相应的ＤＮＡ片段变成表达Ａｒｇ１４－Ｇｌｙ１５－Ａｓｐ１６的核苷酸顺序，经酶切和ＤＮＡ测序鉴定正确。ＣＮＢｒ裂解后，用反相ＨＰＬＣ分析，分离制备突变体蛇毒锯鳞蝰素，制备的突变体蛇毒锯鳞蝰素的Ｎ－末端１０个氨基酸残基与天然蛇毒锯鳞蝰素的相同。在人的富含血小板血浆测活体系中，经１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导，突变体蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为３．０×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ；重组野生型蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为４．０×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ；天然蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ_（５０）为２．８×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ。此外，就蛇毒锯鳞蝰素中保守序列Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ以及其空间构象对蛇毒锯鳞蝰素抑制血小板凝集之间的关系进行了讨论。
- 李洪超李雄彪胡美浩
- 关键词：蛇类基因定点突变
- 多节核棘尾虫的发现及其与邻近属种的形态比较
- 1993年
- 黑龙江省帽儿山镇沼泽地生存着一种在体形和皮层形态上酷似贻贝棘尾虫的腹毛类纤毛虫。其大核呈多个结节相连的索状,这与传统的棘毛虫属的特征有别。但S期大核复制带两个仍在两端出现,这一点全似棘尾虫属。又鉴于腹毛类的其它属中也有大核结节数目不同的种(Borror,1983),故单纯大核结节数目不同不应被视为属间差别,因此本文将此虫定为棘尾虫属一新种,名之为多节核棘尾虫。据此,棘尾虫属的传统鉴别特征在核形上也予以修正。
- 史新柏李洪超
- 关键词：腹毛类纤毛虫
- 蛇毒蛋白Echistatin的C端突变基因的构建，表达及其活性研究被引量：4
- 1995年
- 通过ＰＣＲ定点突变的技术，将蛇毒蛋白Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ基因的Ｃ端进行了突变（Ａｌａ４８→Ａｒｇ４８→，Ｔｈｒ４９→Ｖａｌ４９），模拟纤维蛋白Ｎ端的四肽（Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｖａｌ），以期增加Ｅｃｓ（Ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ）的活性。突变的基因重组到表达质粒ｐＪＣ２６４上，经ＩＰＴＧ诱导，以ＣｈｅＹ－Ｅｃｓ融合蛋白方式进行了表达，表达量占菌体总蛋白的１５～２０％。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５初步纯化该融合蛋白，然后用ＣＮＢｒ裂解，透析，冻干，反相ＨＰＬＣ纯化Ｃ端突变体Ｅｃｓ蛇毒蛋白，Ｎ端十个氨基酸分析与天然的相符，在ＰＲＰ（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈｐｌａｓｍａ）测活体系中，１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导，Ｃ端突变体Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性约为野生型４倍。得到了Ｅｃｓ的Ｃ端突变后使Ｅｃｓ抑制血小板凝聚的活性提高的结果。
- 李洪超李雄彪胡美浩
- 关键词：蛇类ECS突变基因
- 多节核棘尾虫无小核系虫体的初步研究被引量：3
- 1993年
- 纤毛虫细胞具有大核和小核之分。多年来认为大核控制当代无性系细胞的全部代谢活动,小核只在有性生殖时起产生两性原核和受精的作用,从而更新无性系。近年来的研究证明,小核对当代无性系细胞的皮层形态及形态发生也起相当重要的作用。这此工作是在草履虫上(Ng等,1981,1984,1987)和贻贝棘尾虫上(史新柏等,1983,1990;Lu等,1989)完成的。但小核对大核的影响在任何纤毛虫上尚未见报道。
- 李洪超史新柏
- 关键词：大核
