胡美浩
- 作品数：60 被引量：266H指数：9
- 供职机构：北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程农业科学更多>>
- 纤溶酶原激活物抑制因子-1蛋白分子的结构与功能
- 1994年
- 纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)是组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和尿型纤溶酶原激活物(u-PA)的特异性抑制剂。对PAI-1分子的结构与功能的认识,有助于了解PAI-1发挥抑制 作用的机理。本文综述了近年来对PAI-1蛋白分子结构与功能研究的进展,介绍了PAI-1分子中一些区域的作用以及影响PAI-1抑制活性的一些因子。
- 隋广超胡美浩
- 关键词：纤溶酶原激活剂蛋白突变体
- 去B链羧端三肽人胰岛素原的基因构建和表达
- 1995年
- 用改进的寡核苷酸诱导突变法将人胰岛素原基因（ＢＣＡ）删除编码Ｂ链羧端三肽（２８～３０残基）的碱基片段，得到去Ｂ链羧端三肽胰岛素原的基因（Ｂ￣（－３）ＣＡ）。为了便于表达产物的蛋白质后加工，又用ＰＣＲ的方法在Ｂ链Ｎ端起始Ｍｅｔ与Ｐｈｅ密码子之间增加了编码Ｌｙｓ的３个碱基，得到改造后基因ＬＢ￣（－３）ＣＡ。将ＬＢ￣（－３）ＣＡ克隆到表达质粒ｐＢＶ２２０上，在大肠杆菌系统中热诱导表达，表达率为１２％。表达产物经蛋白质后加工，得到的去Ｂ链羧端三肽人胰岛素（ＤＴＥＩＢ２８～３０人胰岛素）其受体活性和放免活性分别是猪胰岛素的４５％和４９％。
- 黄春媚陈来同陈仁馨胡美浩
- 关键词：胰岛素基因表达
- 持续高+Gy对豚鼠耳石器的影响被引量：3
- 1999年
- 目的观察持续高Ｇ刺激对耳石器的影响。方法应用原位杂交技术观察了１６只豚鼠在＋３Ｇｙ、＋１０Ｇｙ和＋１８Ｇｙ持续刺激１５ｍｉｎ后，前庭囊斑感觉上皮细胞中ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ和ＢＭＰ１ｍＲＮＡ表达量的变化，并观察了高Ｇ刺激后动物的行为变化。结果三种刺激量均引起豚鼠姿势不稳，出现前庭功能不平衡的症状，并引起中耳腔出血；前庭囊斑感觉上皮中ｃ－ｆｏｓ及ＢＭＰ１ｍＲＮＡ的表达量明显增加。结论＋３Ｇｙ以上的高Ｇ刺激可引起豚鼠出现前庭功能不平衡症状。
- 戴建国于立身胡美浩
- 关键词：加速度内耳原位杂交骨形态发生蛋白基因表达
- B22Asn人胰岛素突变体的研究被引量：1
- 1995年
- 通过ＤＮＡ定点突变法将人胰岛素Ｂ２２Ａｒｇ改造成Ｂ２２Ａｓｎ，去除其一级结构中碱性蛋白酶位点，以期提高胰岛素在体内的稳定性。突变体基因克隆到表达载体ｐＢＶ２２０中，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α中进行表达。分离纯化后的表达产物经胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ联合作用获得重组Ｂ２２Ａｓｎ－人胰岛素．该突变胰岛素具有抗胰蛋白酶水解能力，但是其与受体的结合能力只有标准猪胰岛素的１２．４％．胰岛素结构中Ｂ２２Ａｒｇ可能在胰岛素与其受体结合过程中起重要作用。
- 张洪涛陈劲秋胡美浩
- 关键词：突变体胰岛素
- 小儿扁桃体淋巴细胞Poly(A)-RNA的制备及其cDNA的合成
- 1989年
- 采用盐酸胍法从经PHA诱导的小儿扁桃体淋巴细胞中提取总RNA,经Oligo(dT)-纤维素柱层析制备了Poly(A)-RNA。经蔗糖线性密度梯度超速离心步骤,富集了含IL-2mRNA的Poly(A)-RNA。经麦胚无细胞体系翻译实验表明,富集后的Poly(A)-RNA具有良好的模板翻译活性,其~3H-亮氨酸参入活性是对照的5.1倍。又以此富集了的Poly(A)-RNA为模板,按照Watson和Jackson的最新方法合成了小儿扁桃体淋巴细胞的双链cDNA。经碱性凝胶电泳检查,用此方法合成的cDNA长度最长的超过了IL-2的cDNA长度。
- 吴建新安文谦吴竹照王正森胡美浩
- 关键词：CDNA淋巴细胞
- 人尿激酶原cDNA在昆虫杆状病毒真核表达系统中的高效表达被引量：9
- 1993年
- 人尿激酶原(pro-urokinase,pro-UK)是一种新型溶栓剂,优于尿激酶,具有血纤维蛋白特异性。为了在昆虫杆状病毒表达系统中高效表达pro-UK,我们在pAc373基础上,插入野生型AcMNPV polyhedrin启动子区-7～1碱基序列,构建了一个高表达转移载体pAcYT。分别经三次克隆将pro-UK cDNA正向插入到转移载体pAc373或PAcYT的BarnHI-KpnI位点上。用LiPofectin将pAcyT-UKDNA或pAc373-UK DNA与AcMNPV DNA共转染到昆虫Sf9细胞中,空斑法筛出重组病毒阳性克隆株。高效表达结果是:1.ELISA法确定重组病毒Sf9细胞分泌表达产物pro-UK为96mg/L培养基上清,平板法测定溶圈活性为1600IU/mL培养基上清;2.亲和层析一步法纯化表达产物,回收率选70％,以上,比活约为60000IU/mg;3.纯化的pro-UK,无论是否经还原处理,其SDS-PAGE图谱均为相同的单一条带,MR 50000;4.Western blot与SDS-PAGE图谱吻合。
- 徐扬张洪涛宓怡德吴祥甫胡美浩
- 关键词：昆虫杆状病毒尿激酶原CDNA
- 血管成形术后原癌基因c－fos、c－myc表达的研究被引量：1
- 1995年
- ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ是两种参与细胞增殖的原癌基因。动脉血管成形术（ＰＴＡ）后的血管再狭窄，是由于血管壁平滑肌细胞增生所致。利用大白兔建立的试验动物模型，提取ＰＴＡ后不同时间间隔的动脉壁总ＲＮＡ，并用斑点杂交法分析两种原癌基因的表达情况，发现了ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的基因分别在术后１５分钟内转录活性提高，并分别在３０分钟和第２小时达到高峰。
- 隋广超林左军胡美浩王岚峰赵进军黄永麟
- 关键词：血管成形术再狭窄原癌基因
- 人胰岛素原类似物（B－Arg－Arg－A）基因的构建和表达被引量：6
- 1995年
- 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法将Ｃ肽为６个氨基酸残基的胰岛素原类似物基因删除突变成Ｃ肽仅为２个精氨酸残基的胰岛素原类似物（ＢＡｒｇ－Ａｒｇ－Ａ）基因，即把ｐＵＣ１８ＢＣ＇Ａ改建为ｐＵＣ１８ＢＲ＿２Ａ。再将ｐＵＣ１８ＢＲ＿２Ａ与ｐＪＧ１０５重组为表达质粒ｐＪＧ１０７，使Ｂ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａ与ｐＪＧ１０５编码的一种多肽构成融合蛋白在大肠杆菌体系中表达。融合蛋白占细菌蛋白总量的５８％。表达产物具有人胰岛素放射免疫活性。
- 李雄彪谢斌陈来同唐建国胡美浩
- 关键词：胰岛素类聚合酶链反应基因表达
- 胰岛素B链N端的修饰及其生物活性变化
- 1994年
- 通过对在大肠杆菌体系中表达及部分加工的粗产物的反相快速蛋白液相色谱的分离，我们得到了Ｌ－Ｍｅｔ^（ＢＯ）－人胰岛素原、Ｌ－Ｍｅｔ^（Ｂ－１）－Ｌ－Ｌｙｓ^（ＢＯ）－人胰岛素原，氨基酸组成分析结果与设想的完全一致。两者的胰岛素受体活性分别为人胰岛素原的６６％及５４％，而胰岛素的放射免疫活性分别降为人胰岛素原的２２％及９％。表明胰岛素Ｂ链的Ｎ端对胰岛囊分子与其受体的结合有一定的重要性，而更重要的是它非常可能参与组成胰岛素分子的抗原决定簇。
- 唐建国张洪涛孙怀宇戴勇胡美浩
- 关键词：胰岛素生物活性
- 几种不同细胞系之间P68 RNA解旋酶表型差异的研究被引量：1
- 1997年
- 对分别来自4种不同细胞系的细胞,在生长期间胞内P68 RNA解旋酶的动态变化进行了蛋白质和mRNA的比较研究。结果发现随着细胞培养时间的延长,各系细胞中P68 RNA解旋酶均呈现出有规律的改变,并且这种规律具有明显的细胞系特征:肿瘤细胞系之间表现出P68 RNA解旋酶蛋白条带单一的一致性;非肿瘤细胞系P68 RNA解旋酶蛋白出现多条带变化,并表现出明显的适应性;肿瘤细胞系与非肿瘤细胞系之间P68 RNA解旋酶的表型存在着明显的差异,这种差异从分子水平上揭示出P68 RNA解旋酶与细胞生长密切相关,并可能与细胞癌化有关。对产生这种差异的可能原因及其生物学意义进行了讨论。
- 韦毅胡美浩
- 关键词：RNA解旋酶细胞系
