李茹
- 作品数：3 被引量：14H指数：1
- 供职机构：复旦大学附属华山医院检验医学科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 调节高致病力CA—MRSA α-毒素表达的基因筛选及功能研究被引量：1
- 2010年
- 目的 从CA-MILSA全基因组水平筛选出除域值感知（quorum sensing）基因系统以外对α-毒素表达有明显调节作用的基因,并研究其调节机制.方法 使用本实验室构建并已申请国家专利的真核转座酶为基础的转座系统构建CA-MKSA转座子,并随机插入突变文库.通过用5%羊血平板筛选出与野生株相比溶血明显改变的克隆,接着用定量RT-PCR以及WB等实验筛选出α-毒素表达明显下降的突变菌株,运用随机引物反向PCB和测序等方法鉴定出突变基因.通过基因互补表达实验、小鼠菌血症与皮肤脓肿模型实验以及荧光定量RT-PCR等方法对目标基因以及其编码蛋白的功能进行研究.结果 在CA-MRSA中建立了一个库容量约为104个克隆的转座子随机插入突变库,最终筛选出25株α-毒素表达明显下降的突变菌株.CA-MRSA野生株溶血直径平均为212 mm,而其中AraC转录调节子突变株（AraC-）几乎无溶血,当将AraC基因互补回突变株（AraC-pT181araC）后,其溶血直径平均为197 mm,部分恢复到野生株溶血水平.荧光定量RT-PCR结果显示,与CA-MRSA野生株（PSMα为257.30±37.33,agr为115.60±0.81,α-毒素为3.23±0.21）相比,在AraC-中α-毒素、PSMα以及agr表达均明显下调（α-毒素1.09±0.01：t=10.18,P〈0.01;PSMα 34.85±2.15：t=5.95,P〈0.05;agr 35.19±1.72：t=42.33,P〈0.01）.小鼠菌血症模型实验结果为CA-MRSA野生株与AraC-（（x）±5）差异具有统计学意义（χ2=21.34,P〈0.01）.AraC-p1F181araC中PSMα、agr、α-毒素（hla）表达（分别为PSMα：180.10±15.29,agr：101.50±8.96,α-毒素：2.59±0.26）均部分恢复到野生株表达水平,与CA-MRSA野生株相比,差异无统计学意义（PSMα：t=1.914,P〉0.05;agr：t=1.563,P〉0.05;α-毒素：t=1.923,P〉0.05）.CIpP在MaC-（0.21±0.01）和AraC-pT181araC（0.17±0.03）中的表达与CA-MRSA野生株（0.20±0.01）相比,差异无统计学意义（t=0.555,P〉0.05和t=0.851,P〉0.05）.小鼠皮肤脓肿�
- 李敏胡锦辉李茹张心菊阮斐诒吕元
- 关键词：甲氧西林抗药性细菌毒素类
- 利用EZ-Tn5转座子插入突变探索细菌基因组中影响其耐药性变化的因素被引量：1
- 2010年
- 目的研究细菌基因组中影响抗菌药物活性的因素。方法用EZ-Tn5转座复合物通过电转化,随机插入大肠埃希菌BL21细菌染色体基因组,获得BL21菌株的插入突变文库;对所有突变克隆株进行37种抗菌药物体外药敏试验;耐药性发生明显恒定改变的菌株进行反向PCR,并对产物进行测序和序列分析,确定转座子插入的确切位点;结合被灭活基因的表达功能推测耐药性改变的原因。结果确定大肠埃希菌电转化最佳条件为菌液OD值为0.8(600 nm)时进行感受态制备,10%甘油缓冲体系和2.7 V电击电压;共得到182株成功插入Tn5转座子的克隆,建立大肠埃希菌BL21菌株随机插入突变文库,其中插入突变菌株BLmu29对青霉素、头孢唑林、头孢克洛、头孢丙烯等抗菌药物的敏感性增加,其中以对青霉素的变化最为明显,抑菌圈直径从对照菌株的12 mm扩大到17 mm;对其进行反向PCR,并对PCR产物测序证实插入转座子的位点为1736,其灭活的基因为甘油-3-磷酸酰基转移酶。结论灭活大肠埃希菌基因组中甘油-3-磷酸酰基转移酶所对应基因,使对细菌对青霉素等亲水性抗菌药物的耐药表型发生改变,提示此基因可影响大肠埃希菌对于亲水性抗菌药物的耐药性。
- 陈晓耘蒋晓飞魏取好李茹王艳艳吕元
- 关键词：大肠埃希菌细菌耐药电穿孔
- 耐万古霉素肠球菌的基因检测被引量：12
- 2010年
- 目的 调查上海华山医院2007-2009年间VRE的分离率,并对耐药菌株的分子特性进行研究,为本地区VRE的预防和控制提供有价值的信息.方法 通过琼脂平板稀释法（ADSP）从临床鉴定的890株肠球菌中筛选VRE菌株,并通过微量肉汤稀释实验测其对万古霉素及替考拉宁的MIC;采用PCR及测序方法检测万古霉素耐药基因以及可能毒力基因esp,hyl;运用MLST对VRE进行克隆分型并通过PFGE分型技术进行验证.结果 ADSP法及微量肉汤稀释实验共筛选出13株VRE菌株.其中6株VRE（2007-2008年）只对万古霉素耐药,但对于替考拉宁敏感（万古霉素MIC64～256μg/ml）;耐药基因PCR产物测序结果提示这6株VRE均携带同一种可能导致万古霉素耐药的新型基因,该基因序列与已报道的耐药基因均不同;MLST及PFGE分型提示其属于不同型别.另外7株VRE（2009年1-7月）对万古霉素和替考拉宁的MIC结果分别为32～64μg/ml和16～32 μg/ml,耐药基因检测均为vanA.MLST分型结果提示13株VRE共分为4个不同的ST型,其中11株均属克隆复合型CC-17.13株VRE毒力基因esp和hyl的阳性率分别为69.2%和30.8%.结论 上海华山医院VRE克隆分型以CC17为主,同时发现上海华山医院存在一种可能导致万古霉素耐药的新型基因介导的VRE,该新基因的功能和定位尚待进一步研究.
- 李茹徐晓刚李敏蒋晓飞魏取好吕元
- 关键词：肠球菌属序列同源性细菌分型技术脉冲场
