毛立
- 作品数：159 被引量：216H指数：9
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学建筑科学更多>>
- 山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的转录组分析被引量：1
- 2019年
- 本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组与对照组进行高通量测序,并用测序评估、基因注释等生物信息学方法进行分析。结果显示,差异表达基因共261个,其中表达上调140个,表达下调121个,经RT-qPCR方法验证8个差异表达的干扰素信号通路相关基因,结果与高通量测序一致。进一步GO分类结果显示,差异表达基因主要涉及细胞生物学进程、构成细胞的组分以及实现的分子功能三个方面,KEGG分析显示这些基因参与代谢、生物系统、细胞进程、基因信息进程和环境信息进程。本研究为深入探究CPIV3的致病机制奠定了基础。
- 钟纯燕李基棕毛立毛立李文良郝飞刘茂军刘茂军主性嵇辛勤杨蕾蕾杨蕾蕾
- 关键词：高通量测序转录组
- 山羊Viperin基因的克隆与真核表达载体的构建
- 2017年
- 本研究分离山羊外周血单核细胞,设计引物,采用RT-PCR方法扩增出Viperin基因完整阅读框。经BLAST分析,该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中已有序列的最高同源性均为99%。同时将不同物种(山羊、猪、人、小鼠)的氨基酸序列进行比对分析,发现N端结构域在不同物种间是高变区。然后,将目的基因酶切克隆入真核表达载体pc DNA3.1中构建重组表达质粒。经PCR、酶切和测序鉴定正确的阳性质粒分别被命名为pcDNA-g Vi HA和pcDNA-HAg Vi。使用脂质体Lipofectamine 2 000将重组质粒转染BHK21细胞,使用HA抗体进行间接免疫荧光检测,发现重组蛋白均得到表达,荧光分布于细胞质中;Western-blot结果表明,两个质粒转染后均可检测到分子量约为43 ku的条带。使用内质网标志物Calnexin抗体进行共聚焦检测,发现表达的Viperin蛋白与内质网存在共定位。上述研究结果为进一步研究山羊Viperin的抗病毒作用及其机制奠定了基础。
- 李照耀李照耀李文良李基棕李基棕郝飞毛立周斌
- 关键词：真核表达亚细胞定位山羊
- 一种抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列及其应用
- 本发明涉及一种抑制山羊副流感病毒3型（CPIV3）复制的靶标位点序列及其在制备抗山羊副流感病毒3型药物中的应用。所述抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列位于干扰素调节基因2（IRF2）的3’UTR中，其核苷酸序列如S...
- 李基棕钟纯燕毛立李文良郝飞孙敏刘茂军杨蕾蕾张纹纹
- 文献传递
- 山羊干扰素tau的原核表达及其抗病毒活性研究
- 引言/目的干扰素tau(interferon-tau,IFN-tau)属于I干扰素的一种,具有抗病毒、抗细胞增殖、免疫调节功能。不同物种来源的干扰素tau具有种属特异性。与其他I干扰素不同的是,IFN-tau的产生无需病...
- 郝飞李文良毛立李基棕孙敏杨蕾蕾张纹纹江杰元
- 边界病病毒RT-PCR检测方法的建立和应用
- 2022年
- 边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的RT-PCR方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3′-UTR基因为靶基因,设计了特异扩增BDV的引物。通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的RT-PCR检测方法。进一步优化该方法的反应条件,并进行特异性、敏感性及临床样品检测。结果显示,该方法在退火温度48~60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性,表明其特异性良好;同时,该方法具有良好的敏感性,最低检出限可达10~1拷贝/μL,敏感性极高。利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊,发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3~7 d的血液和淋巴结中检测到病毒RNA,其他器官中未检测到病毒。本研究建立了特异检测BDV的RT-PCR方法,并证明了BDV在持续感染羊和一过性感染羊中的病毒分布情况,为其可能的排毒途径提供了依据。
- 毛立张纹纹李文良杨蕾蕾孙敏程子龙李基棕郝飞刘茂军
- 关键词：RT-PCR检测方法
- 小反刍兽疫诊断技术和疫苗研究进展
- @@小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种急性、烈性、接触性传染病，主要感染山羊、绵羊及一些野生小反刍动物如小鹿瞪羚及长角羚等，其症状类似牛瘟，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。世界动物卫生组织(OIE)将其列...
- 才学鹏窦永喜郑海学朱学亮杨帆毛立
- 关键词：小反刍兽疫疫苗研究
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒基因组全长cDNA的构建及其序列的测定
- 2010年
- 根据小反刍兽疫Nigeria75/1株全基因组序列设计并合成PPRV特异引物,进而应用RT-PCR技术分5段扩增了PPRV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段JF1、JF2、JF3、JF4和JF5分别克隆到载体上,建立了PPRV的初级cDNA克隆。在扩增5′末端时,引入AscI酶切位点和T7启动子序列;在基因组3′末段引入PacI酶切位点,后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片段再依次连接,最后亚克隆到质粒pok12中,获得了PPRV全长基因组cDNA克隆pok12-PPRV。通过序列同源性和进化树分析,结果表明,Nigeria75/1与MV和RPV的遗传关系最近。Nigeria75/1株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救PPRV和在分子水平进一步深入研究PPRV打下坚实的基础。
- 翟军军窦永喜张海瑞毛立蒙学莲骆学农才学鹏
- 关键词：小反刍兽疫病毒RT-PCR全长CDNA克隆分子克隆
- 一种用于检测山羊副流感病毒3型和小反刍兽疫病毒的引物对
- 本发明涉及一种用于检测山羊副流感病毒3型和小反刍兽疫病毒的引物对，属于生物技术领域。本发明提供了检测病毒的专用引物，包括引物对A和引物对B，引物对A包括引物1和引物2，引物对B包括引物3和引物4；引物1、引物2引物3和引...
- 郝飞李文良毛立杨蕾蕾江杰元张纹纹王钟毓
- 文献传递
- 鉴别检测裂谷热病毒的双重荧光定量RT-PCR引物及探针
- 本发明提供一种鉴别检测裂谷热病毒的双重荧光定量RT‑PCR引物及探针，属于生物技术领域。本发明设计了一对针对裂谷热病毒L基因的特异性检测引物L‑F、L‑R及一条荧光探针L‑P，一对针对裂谷热病毒S片段的特异性检测引物S‑...
- 杨蕾蕾李文良毛立郝飞李基棕张纹纹江杰元孙敏刘茂军
- 文献传递
- Bta-miR-677靶向线粒体抗病毒信号蛋白影响Ⅰ型干扰素的生成
- 2020年
- 旨在探究bta-miR-677调控Ⅰ型干扰素(IFN)表达的分子机制。将bta-miR-677转染MDBK细胞,检测Ⅰ型IFN和干扰素刺激基因(ISGs)的转录水平;随后通过TargetScan预测bta-miR-677的靶基因,双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot验证bta-miR-677的靶基因;利用siRNA敲减验证靶基因对Ⅰ型IFN转录的影响。结果显示,过表达bta-miR-677组IFN-α/β的转录水平高于对照组2~4倍(P<0.001),随后检测到6种ISGs(IFI6、OAS1Y、OAS1Z、RSAD2、MX1和MX2)转录量上调2~16倍(P<0.01或P<0.001);反之,抑制表达bta-miR-677组IFN-α/β转录量下调(P<0.01或P<0.05),同时IFI6、OAS1Y、OAS1Z、RSAD2、MX1和MX2转录量下调(P<0.05或P<0.01)。经TargetScan预测和双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot检测显示,bta-miR-677可靶向结合线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)的3′-UTR,抑制MAVS蛋白的表达;MAVS基因敲减后发现,IFN-α、IFN-β和6种ISGs转录量上调。研究结果表明,bta-miR-677通过靶向MAVS上调IFN-α/β转录水平,进而提高ISGs的表达量,为基于bta-miR-677研制抗病毒药物提供了重要资料。
- 廖政嵇辛勤李基棕肖芳刘茂军毛立李文良孙敏
