王汉森
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
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- 大鼠MeCP2基因HSV-1型反义表达载体的构建与鉴定(英文)被引量：2
- 2004年
- 目的以真核表达载体单纯疱疹病毒I型(Herpes simplex virus type 1, HSV-1)质粒型载体(pHSV)作为表达载体,构建大鼠MeCP2基因反义表达载体。方法用PCR方法扩增出大鼠MeCP2 cDNA部分片段,将其反向插入表达载体pHSV,并以PCR、酶切电泳以及DNA测序等方法对重组质粒进行鉴定。结果经过PCR、酶切电泳以及DNA测序,鉴定出连接方向和插入序列正确的反义表达载体。结论成功构建了大鼠MeCP2基因HSV-1型反义表达载体,为进一步研究该基因的功能打下了基础。
- 王汉森潘虹张玉稚包新华张国荣吴希如
- 关键词：RETT综合征反义RNA
- RNA干扰技术及其在神经科学研究中的应用被引量：1
- 2003年
- RNA干扰 (RNAi)是指生物体内由双链RNA介导同源序列mRNA的特异性降解 ,从而导致基因沉默的现象。近年来 ,随着对RNAi研究的不断深入 ,其作用机制正在逐步被阐明 ;同时作为阻断基因表达的新手段 ,RNAi技术也日趋完善和成熟。以其高效性和特异性 ,RNAi为反向遗传学在神经科学研究中的应用提供了有力的工具。本文仅就RNAi技术的有关研究进展及其在神经科学研究中的应用作一概述。
- 王汉森张玉稚潘虹吴希如
- 关键词：RNA干扰技术神经元神经科学反向遗传学
- 大鼠Mecp_2基因的RNA干扰有效序列筛选
- 2006年
- 目的：以RNAi技术寻找抑制大鼠Mecp2基因表达的有效序列。方法：首先构建大鼠Mecp2基因与红色荧光蛋白（RFP）的融合基因表达质粒，然后分别与针对大鼠Mecp2基因的4个备选小干扰RNA（siRNA，small interference RNA）共转染HEK293T细胞，构成外源基因系统，以此对于4个备选的siRNA对大鼠Mecp2基因的抑制有效性进行筛选。然后将筛选到的有效序列siRNA转染自身表达大鼠Mecp2基因的PC12细胞，以免疫荧光染色显示大鼠Mecp2蛋白的表达情况，通过内源大鼠Mecp2基因表达被抑制的情况验证所筛选序列的RNA干扰有效性。结果：针对大鼠Mecp2基因mRNA918—936位核苷酸的siRNA（序列：5＇-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3’）是对大鼠Mecp2基因进行RNA干扰的有效序列。此有效siRNA序列所在的位置相当于大鼠Mecp2基因第4外显子，推测可同时抑制大鼠Mecp2α和大鼠Mecp2β的表达。且此靶序列位于大鼠Mecp2基因编码区，推测可同时抑制1．9kb和10kh的大鼠Mecp2基因mRNA的表达。结论：本研究为建立稳定的大鼠神经元Mecp2基因表达敲低的神经细胞模型和研究脑发育过程中Mecp2基因的功能打下了基础。
- 张玉稚王汉森潘虹李美蓉包新华金靖吴希如
- 关键词：DNA结合蛋白质类DNA甲基化RNA小分子干扰
- 以病毒载体构建大鼠甲基化CpG结合蛋白2基因反义表达载体和与其应用相关的实验研究
- 目的:应用真核表达载体HSV-1载体和能够表达小干扰(siRNA)的慢病毒载体作为表达载体,构建了大鼠MeCP2基因反义表达载体,并对相应载体系统包装及其介导外源基因在体外培养细胞中的表达作用进行探讨.结论:本实验成功构...
- 王汉森
- 关键词：基因功能RETT综合征脑发育反义技术慢病毒载体
- 无辅助病毒HSV-1载体介导LacZ基因在培养皮层神经元中的表达被引量：3
- 2005年
- 目的:探讨无辅助单纯疱疹病毒(herpessimplexvirustype 1,HSV 1)载体的包装及其介导LacZ基因在体外培养神经元表达的作用, 解决该载体系统在包装及体外培养神经元应用中的有关问题。方法:将一组含HSV 1基因组的粘粒以限制性内切酶PacⅠ酶切、纯化后,与含LacZ和酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase,TH)及神经微丝(neurofilament,NF)嵌合启动子的HSV 1质粒DNA在脂质体作用下,共转染 2 2细胞;在 34℃条件下培养 72h,收获病毒颗粒。将含病毒颗粒的上清液,加入BHK细胞培养液中,继续培养 24h后,加X gal染液作用 4h,观察表达LacZ基因的蓝染细胞。取培养第 3天的胚胎大鼠大脑皮层神经元,加入含病毒颗粒的培养液,过夜后更换新鲜培养液,分组继续培养 1, 7和 14d,进行X gal染色,光镜下观察。结果:包装形成的病毒颗粒感染BHK细胞, 24h后可见表达LacZ基因的蓝染细胞;感染培养第 3天的皮层神经元,继续培养 1, 7和 14d后均可见蓝染神经元。结论:无辅助病毒包装系统能够使含TH NF嵌合启动子的HSV 1载体形成有效的病毒颗粒,并且在体外培养神经元中持续稳定地表达外源基因,为在神经系统进行基因转移和基因功能研究提供了有效的工具。
- 王汉森潘虹张玉稚包新华张国荣吴希如
- 关键词：LACZ基因HSV-1辅助病毒载体介导BHK细胞神经微丝
- 大鼠Mecp2基因的RNA干扰有效序列筛选
- 为建立稳定的大鼠神经元甲基化CpG结合蛋白2基因(Methyl-CpG-binding protein 2,MECP2)表达敲低的细胞模型,研究脑发育过程中MECP2基因功能,本研究旨在以RNA干扰(RNA interf...
- 张玉稚王汉森潘虹李美蓉包新华金靖吴希如
- 文献传递
- 第九届国际暨第七届亚洲大洋洲小儿神经大会在北京召开
- 2003年
- 包新华姜玉武薄涛王汉森王静敏潘虹李明张月华杨艳玲吴希如
- 关键词：癫痫人类基因新生儿脑损伤脑性瘫痪
- 发育中Wistar大鼠大脑皮层甲基化结合蛋白-2基因表达变化被引量：1
- 2004年
- 目的 :研究甲基化结合蛋白 2 (methyl CpG bindingprotein 2 ,mecp2 )基因在发育中正常Wistar大鼠大脑皮层表达水平的变化。方法 :应用实时定量PCR(real timePCR) ,Northern印迹杂交对mecp2基因在正常Wistar大鼠发育的不同阶段 :胚胎第 1 5天 (E1 5 )、第 1 7天 (E1 7)、第 1 9天 (E1 9)、出生当日 (P0 ) ,生后第 7天 (P7)、生后第 1 4天 (P1 4 )、生后第 2 8天 (P2 8) ,成年期大鼠mRNA的表达水平进行定性、定量分析 ;应用Western印迹杂交对MeCP2的表达水平进行半定量分析。结果 :mecp2基因是在正常Wistar大鼠大脑皮层中表达的mRNA ,约为 1 0kb。从胚胎至成年期的发育过程中 ,mecp2基因mRNA的表达虽有波动 ,但差异无显著性。mecp2基因在正常Wistar大鼠大脑皮层中仅表达一种MeCP2 ,相对分子质量为 75 0 0 0。在不同发育阶段其表达水平表现为 ,胚胎E1 5表达水平最低 ,自胚胎E1 9始至成年期MeCP2表达水平较E1 5明显增高。生后第 7日至成年期 ,各时间点间表达水平的变化差异没有显著性。结论 :随着正常Wistar大鼠大脑皮层神经元的发育成熟 ,MeCP2的表达水平逐渐增高 ,说明MeCP2对神经元的成熟有重要作用 。
- 张玉稚潘虹王汉森包新华吴希如
- 关键词：WISTAR大脑皮层基因表达胚胎
