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王海萍: 作品数：26 被引量：74H指数：5; 供职机构：安徽医科大学基础医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”教育部科学技术研究重点项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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MANF减轻帕金森病大鼠模型的神经损伤被引量：1: 2012年; 目的观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)对6-OHDA引起的多巴胺能神经元损伤的影响。方法表达纯化人重组MANF蛋白;将6-OHDA立体定位注射至大鼠纹状体区,制备大鼠帕金森模型;将3个剂量(5、10、20μg)纯化的MANF注射至模型大鼠纹状体区,腹腔注射司来吉兰作为阳性对照,纹状体直接注射PBS作为阴性对照;计数大鼠给药前后由阿扑吗啡诱导的由损伤侧向健侧不对称的旋转次数;免疫组化方法检测各大鼠黑质、纹状体部位酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元和神经纤维。结果 10μg MANF组大鼠的旋转行为较PBS组明显减少,效果与司来吉兰组相近。MANF注射后对黑质部位TH阳性神经元数量和纹状体部位TH阳性神经纤维数量均有不同程度的明显恢复。结论 MANF能减轻6-OHDA引起的帕金森模型大鼠的神经损伤。; 汪运红沈玉君冯利杰王海萍方圣云沈玉先; 关键词：帕金森病动物模型 6-OHDA

医学神经生物学教学素材收集体会被引量：2: 2010年; 神经科学自20世纪以来受到各国科学界的普遍重视,医学神经生物学是随着神经科学的发展而兴起的新兴学科,是一门高度综合的医学基础科学。国内很多医学高校为了顺应这一发展,也相继开始了医学神经生物学课程。本文根据笔者近几年的教学经验,介绍医学神经生物学教学素材的收集体会。; 王海萍徐金勇任振华李光武; 关键词：神经生物学素材

小鼠CD4、CD8膜外区编码cDNA的克隆与表达: 2005年; 　目的　克隆并表达小鼠CD4和CD8基因,以期制备其抗体为疫苗研究服务。方法　从小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT PCR技术克隆CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,利用谷光苷肽硫基转移酶 (GST)融合表达载体pGEX CS对其进行表达,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot对重组蛋白进行鉴定。结果　以小鼠脾细胞总RNA为模板,分别扩增出小鼠CD4、CD8α和CD8β膜外区片段的编码cDNA,将其插入表达载体pGEX CS,得到重组质粒pGEX CSCD4、pGEX CSCD8α和pGEX CSCD8β。将所获表达载体转化E.coliBL21,用IPTG诱导表达,SDS PAGE检测表明小鼠CD4、CD8α、CD8β片段均得到成功表达,其表达量可占菌体蛋白总量的 30%左右,且均可与抗GST抗体反应。结论　成功克隆、表达了小鼠CD4、CD8α和CD8β,为进一步制备抗体从而用于免疫学研究打下了基础。; 王海萍赵丽王健伟贾友苏韩金祥洪涛; 关键词：逆转录聚合酶链反应

GFP-ATZ在HEK 293T中的表达及其细胞毒作用被引量：1: 2010年; 目的构建具有绿色荧光蛋白(GFP)标签的α1抗胰蛋白酶Z突变型(ATZ)的真核表达载体,在人胚胎肾细胞(HEK293T)中验证表达情况及检测其对细胞的影响。方法以pcDNA3.1-zeo+-ATZ质粒为模版,设计引物,PCR扩增出ATZ的cDNA序列,插入真核表达载体pEGFP-C1中,构建带有GFP标签的ATZ真核表达载体pEGFP-C1-ATZ,脂质体转染体外培养的HEK293T细胞,Western blot、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测GFP-ATZ在细胞中的表达、分布情况及其对细胞形态和分裂的影响。结果 ATZ片段成功插入pEGFP-C1表达质粒,在表达GFP的HEK293T细胞内,绿色荧光呈弥散的全细胞分布,而表达GFP-ATZ的细胞绿色荧光分布于细胞质内;Western blot结果显示特异性条带,分子量大小与GFP-ATZ预期相符;GFP-ATZ的过度表达引起细胞出现不同程度的形态改变、分裂障碍、聚集体出现甚至死亡。结论成功构建了具有绿色荧光标记的ATZ真核表达载体,GFP-ATZ的表达具有细胞毒性。; 王海萍王法财沈玉先; 关键词：转染

泛素连接酶Hrd1促进a1-抗胰蛋白酶Z型突变体降解及细胞存活: 目的:a1-抗胰蛋白酶(AAT)缺乏症是一种常染色体隐性遗传病,其特征是错误折叠的AAT突变体在肝细胞内质网内聚集及血清AAT水平降低,并由此引发肝脏及肺部疾病。AAT的Z型突变(ATZ)是造成AAT缺乏的最常见突变类型...; 王海萍李琪孙爱民沈玉君王法财方圣云沈玉先; 文献传递

ARMET的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：3: 2009年; 目的制备抗人ARMET(arginine-rich,mutated in early stage of tumors)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法将pET28a-ARMET转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,用预装好的Ni-beads柱进行纯化,通过SDS-PAGE电泳及考玛斯亮蓝染色方法判断融合蛋白的表达量及纯度。将纯化的ARMET免疫雌性BALB/c小鼠后采用淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌抗ARMET杂交瘤细胞株。体内诱生腹水法制备mAb,间接ELISA法测定其效价及抗体亚型,辛酸-硫酸铵沉淀法及亲和层析法纯化mAb。用免疫荧光双标及Western blot法对抗体的特异性进行了鉴定。结果获得了纯度较高、浓度较高的融合蛋白;建立了7株稳定分泌特异性抗ARMET mAb的杂交瘤细胞株,诱生腹水法获得的抗体效价在1×10-5～1×10-7之间,且均有较好的特异性。结论已成功制备出抗ARMET mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究奠定了基础。; 王法财王海萍李琪方圣云沈玉先

人tau融合蛋白的原核表达及纯化: 2007年; 目的构建人His-tau和GST-tau融合蛋白表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达及纯化。方法以质粒pEGFP-tau为模板通过PCR扩增出人tau全长cDNA,并构建到原核表达载体pET28a和pGEX-5X-1中,挑选阳性重组子,经限制性内切酶鉴定后转化到大肠杆菌BL21中,然后用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE染色及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。分别使用His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B与融合蛋白结合来纯化融合蛋白。结果成功构建原核表达质粒pET28a-tau和pGEX-5X-1-tau并在大肠杆菌BL21中诱导其大量表达。经His Bind Resin和Glutathione Sepharose 4B纯化后,可以得到较纯化的His-tau和GST-tau融合蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异性的抗tau单克隆抗体(tau-5)所识别的融合蛋白分子量与理论值相近。结论构建了人tau两种原核表达的融合蛋白质粒,并高效表达和纯化了该蛋白,为进一步的tau与其它功能性蛋白的相互作用研究奠定了基础。; 梁燕王海萍冯利杰李琪沈玉先; 关键词：质粒

tau蛋白的过度表达对非神经源细胞生长与分化的影响被引量：10: 2008年; 目的观察外源性tau蛋白的过度表达对非神经来源的293T细胞生长与分化的影响。方法构建带有GFP标签的表达人全长tau蛋白的质粒pEGFP-C1-tau,并转染293T细胞,通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察及免疫印迹等方法,观察tau的过度表达对293T细胞的生长与分化的影响。结果在瞬时转染的293T细胞中可以观察到,GFP全细胞分布,而GFP-tau主要定位于胞质。tau的过量表达可引起细胞形态改变,如突起减少或消失,细胞分裂受阻及多核巨细胞的形成等,最后导致细胞死亡。在稳定转染细胞中,tau蛋白的过度表达可诱导细胞出现凋亡的特征性改变。结论tau蛋白在非神经源性细胞中的过度表达可影响细胞的分裂、分化,并诱导细胞凋亡,提示tau蛋白有直接的细胞毒作用。; 李琪冯利杰王海萍梁燕沈玉先; 关键词：TAU蛋白转染细胞形态

线虫抗凝肽的研究进展: 线虫抗凝肽(NAP)是自犬钩口线虫成虫分离得到的一系列具有抗凝作用的小分子多肽类物质,含有约为75～85个氨基酸,拥有22﹪的共同序列.NAP抗凝作用强,药效持久,成本低,临床应用前景好,现已进入Ⅲ期临床试验评估阶段.本...; 姜月华王海萍王健伟韩金祥洪涛; 关键词：凝血因子X; 文献传递

氯化钆对大鼠腹腔巨噬细胞表达CD68的影响被引量：6: 2009年; 目的观察氯化钆(GdCl3)对大鼠腹腔巨噬细胞(PMΦ)表达CD68是否有抑制作用。方法取正常大鼠PMΦ体外培养,用不同浓度的GdCl3处理PMΦ;采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠佐剂性关节炎(AA)模型并尾静脉注射GdCl3。采用免疫荧光双标、Western blot法检测PMΦ活化标记物CD68的表达情况。结果在一定的浓度范围内,GdCl3可抑制体外培养的正常大鼠PMΦ中CD68的表达,以5×10-6mol/L浓度抑制效果最明显。大剂量的GdCl3对细胞有明显的毒性作用,表现为细胞的形态和核发生改变,并可诱导内质网(ER)应激相关蛋白ARMET的表达。对于AA大鼠活化的PMΦ,体内注射GdCl3(10mg/kg)可使部分CD68阳性的PMΦ转阴,同时促进这些阴性细胞的分化;GdCl3并可诱导部分活化的PMΦ凋亡。结论GdCl3可以抑制大鼠PMΦ中CD68的表达及诱导活化的PMΦ凋亡,这可能是GdCl3抑制PMΦ活化的机制之一。; 黄学桂王法财王海萍路锦涛沈玉君沈玉先

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