王莹
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
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- PYK-2在PGE_2诱导大肠癌细胞侵袭转移中的作用被引量：1
- 2008年
- 目的研究富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase2,PYK-2)在前列腺素E2(PGE2)诱导大肠癌SW480细胞侵袭转移中的作用。方法实验分为A、B、C、D四组,分别为未处理组,PGE2组,PGE2+SC19220(EP1抑制剂)组,PGE2+BAPTA-AM(胞内Ca2+螯合剂)组。通过RT-PCR检测SW480中PGE2四种EP(EP1,EP2,EP3,EP4)受体的表达,应用Western blotting检测SW480细胞中PYK-2蛋白的表达,应用Transwell实验观察各组SW480细胞侵袭转移能力的改变。结果SW480表达PGE2的三种EP受体,EP1,EP2和EP4,PGE2可促进EP1的表达;经PGE2作用后,10分钟内PYK-2磷酸化水平逐渐增加,0分钟、5分钟、10分钟检测结果相比差异均有统计学意义(P<0.05),30分钟与0分钟检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05);C组、D组与B组相比PYK-2磷酸化水平明显下降(P<0.05),大肠癌细胞侵袭转移能力显著降低(P<0.05)。结论PGE2可能通过Ca2+,EP1促进PYK-2的磷酸化,从而进一步诱导大肠癌细胞的侵袭转移过程。
- 兰小琴王莹李美宁张悦红解军程牛亮
- 关键词：大肠癌PGE2
- 转录因子AP-2α对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及其机制被引量：3
- 2008年
- 目的:研究转录因子活化蛋白-2α(transcription factor activator protein-2α,AP-2α)对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用及其相关机制。方法:构建pcDNA3.1(+)-AP-2α重组质粒,利用脂质体分别介导重组质粒pcDNA3.1(+)-AP-2α和空质粒pcDNA3.1(+)转染SW480细胞,以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR和Western印迹法检测转染48h后各组细胞中AP-2α的表达水平;采用电泳迁移率分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测转染重组质粒后SW480细胞表达的AP-2α是否具有DNA结合活性;用MTT法研究AP-2α基因转染24、48、72h后SW480细胞的增殖情况;采用流式细胞术分析各组的细胞周期变化,Western印迹法检测细胞内p21/WAF1的表达水平。结果:转染pcDNA3.1(+)-AP-2α重组质粒48h后,SW480细胞内AP-2αmRNA含量以及蛋白水平均显著升高,并且具有较强的DNA结合活性;MTT结果提示,转染AP-2α基因后SW480细胞增殖趋缓;细胞周期分析结果提示,转染AP-2α基因48h后G0/G1期细胞比例较正常细胞增加(P<0.05);转染AP-2α基因48h后,SW480细胞内p21/WAF1表达增加。结论:AP-2α可抑制SW480细胞的增殖,其抑制作用很可能与激活p21/WAF1表达有关。
- 王莹兰小琴李美宁解军张悦红程牛亮
- 关键词：结肠肿瘤细胞增殖基因表达
- 前列腺素E2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响被引量：3
- 2008年
- 目的 研究前列腺素E2(PGE2)对结肠癌SW480细胞黏附、迁移、侵袭能力的影响及其可能的分子机制.方法 分别使用外源性PGE2及其受体EP1的拮抗剂SC19220作用于SW480细胞后,MTr法测定肿瘤细胞黏附能力,transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力,RT-PCR及Western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白水平的改变.结果 外源性PGE2可以显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,PGE2作用于细胞后,黏附细胞A值由0.207±0.009增加至0.417±0.088,迁移细胞由6.33±0.33增加至43.33±0.88,侵袭细胞由3.67±0.34增加至26.33±0.89,差异均有统计学意义(P＜0.05).SC19220可抑制PGE2所诱导的SW480细胞黏附、迁移及侵袭,PGE2+SC19220组与PGE2组相比,黏附细胞A值由0.417±0.088下降至0.140±0.006,迁移细胞由43.33±0.88下降至28.00±0.58,侵袭细胞由26.33±0.89下降至5.67±0.33,差异均有统计学差异(P＜0.05).RT-PCR及Western blotting检测结果显示,PGE2作用后SW480细胞VEGFmRNA及蛋白水平表达增强,且表达量与PGE2浓度呈正相关.结论 PGE2可显著增加SW480细胞黏附、迁移及侵袭能力,其作用过程可能与VEGF表达上调相关.
- 兰小琴王莹李美宁张悦红梁小波程牛亮
- 关键词：地诺前列酮结肠肿瘤SW480细胞
- 5-Aza-CdR对结肠癌细胞增殖及抑癌基因PGDH表达的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对SW480细胞生物学行为及15-羟基前列腺素脱氢酶(15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase,PGDH)蛋白表达的影响。方法:5-Aza-CdR处理SW480细胞,通过MTT法、平板克隆实验观察细胞生长活性的变化,甲基化特异性PCR检测PGDH启动子区的甲基化状态,Western印迹法检测PGDH蛋白表达改变,并进行细胞周期分析。结果:SW480细胞经5-Aza-CdR处理后,与未处理对照组相比,生长速度出现不同程度减慢;实验组细胞(不同浓度5和10μmol/L)较对照组细胞的克隆形成率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);PGDH启动子区甲基化程度降低,无PGDH蛋白表达的SW480细胞检测到蛋白重新表达。5-Aza-CdR处理SW480细胞后,能够延缓细胞周期G1/S期进程,阻滞细胞于G1期。结论:在结肠癌细胞系中,PGDH基因启动子CpG岛的异常甲基化修饰可能导致其表达缺失,5-Aza-CdR能够恢复PGDH基因的表达,为结肠癌的去甲基化治疗提供理论依据。
- 李美宁解军常冰梅王莹兰晓琴张悦红程牛亮
- 关键词：结肠肿瘤DNA甲基化
- AP-2α基因转染对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响被引量：1
- 2008年
- 目的 探讨AP-2α基因对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响.方法 构建PODNA3.1(+)-AP-2α真核表达载体,利用脂质体介导pcDNA3.1(+)-AP-2α和pcDNA3.1(+)转染5W480细胞,并以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR与Western blotting分别检测转染48 h后各组细胞中AP-2αmRNA与蛋白的表达情况;采用平板克隆、软琼脂克隆形成试验以及Transweil侵袭试验,分别检测各组细胞体外增生及侵袭能力.结果 SW480细胞内源性AP-2α蛋白表达缺失;转染AP-2α基因后,在SW480细胞中可检测到高水平的AP-2αmRNA及蛋白,细胞克隆形成率降低(P<0.05),软琼脂克隆体积小且数量少,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 转染AP-2α基因可以抑制人类结肠癌SW480细胞的体外恶性增生以及侵袭能力.
- 王莹兰小琴李美宁张悦红梁小波程牛亮
- 关键词：结肠肿瘤基因转移SW480细胞
