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几种PCR方法在狂犬病毒全基因测序中的应用: 本研究在狂犬病毒全基因测序中应用了RT-PCR法、递减PCR法、嵌套PCR方法及3’-Full RACE等方法,有效的解决了狂犬病毒在体外扩增时遇到的困难.成功地获得了狂犬病毒野毒株BRV的全基因的DNA,为实现基因测序...; 郭利赵云蛟钱爱东; 关键词：PCR方法狂犬病毒基因测序; 文献传递

狂犬病病毒Evelyn-Rokitnicki-Abelseth疫苗株反向遗传系统的建立被引量：4: 2009年; 【目的】建立狂犬病毒的反向遗传系统,为研制不含狂犬病病毒致病性的新型安全高效的狂犬疫苗提供技术依据。【方法】本研究采用反向遗传学方法和分子克隆技术,建立了狂犬病病毒Evelyn-Rokitnicki-Abelseth(ERA)疫苗株的CMV/T7、T7启动子病毒拯救系统,构建了表达N、P、L蛋白的辅助质粒。【结果】成功拯救出野生型病毒rERA-VC,在Vero细胞上的生长动力学特性与父母本ERA相同,第三代可在Vero细胞上可获得很高的生长滴度。【结论】建立了狂犬病病毒的反向遗传系统,拯救出的野生型病毒生物学特性与父母本相同。; 郭利冯娜杨松涛王喜军葛金英夏咸柱步志高; 关键词：狂犬病毒反向遗传系统

3′-RACE技术在狂犬病病毒基因末端体外扩增中的优化: 2008年; 钱爱东郭利赵云蛟; 关键词：病毒基因组狂犬病病毒体外扩增 RACE技术分子流行病学

几种PCR方法在狂犬病毒基因测序中的应用被引量：8: 2006年; 目的本研究在狂犬病毒全基因测序中应用了RT-PCR法、递减PCR法、嵌套PCR方法及3’-Full RACE等方法,有效的解决了狂犬病毒在体外扩增时遇到的困难。成功地获得了狂犬病毒野毒株BRV的全基因的cDNA,为实现基因测序及下一步研究工作奠定了理论技术基础。; 郭利赵云蛟李泽涛钱爱东; 关键词：狂犬病毒 PCR 基因测序

RV野毒株L基因C端3’-RACE扩增及序列分析: 狂犬病是人类最古老的疾病之一，也是当前世界上流行最广、危害最严重的人兽共患传染病。据WHO的最新统计，全球每年因狂犬病死亡的人数约为3.5～7万人，而造成家畜和其他动物死亡的损失更是无法估量。近年来随着分子生物学和免疫学...; 郭利; 关键词：RV; 文献传递

1株鼠源狂犬病毒野毒株全基因组序列测定与分析被引量：8: 2008年; 目的对1株分离自牛狂犬病疫区野鼠脑内的狂犬病毒野毒株(MRV)进行全基因组测序,并对其分子变异和进化特点进行分析。方法RT-PCR扩增克隆覆盖全基因组9个重叠基因片段,基因组3′末端和5′末端采取3′-RACE和5′-RACE方法。结果9个重叠基因片段序列拼接得到MRV全基因组序列,共11869个核苷酸。MRV毒株全基因组构成与其他狂犬病毒基因组构成相似,由5个编码区组成,基因起始位点和终止位点高度保守,在核蛋白和糖蛋白的重要抗原位点有个别氨基酸发生变异。选择有代表性的狂犬病毒株,构建了N基因分子系统进化树。结论MRV毒株属于狂犬病毒基因1型,与AV01和CVS同源性最高为99%,与分类位置未确定的北高加索毒株(WCBV)的同源性最低为72%。; 赵云蛟郭利黄莹张立世钱爱东; 关键词：狂犬病毒全基因组

1株梅花鹿源狂犬病街毒株全基因组测序与分析被引量：4: 2008年; 对1株梅花鹿源性狂犬病街毒株(DRV)进行全基因组克隆,对全长cDNA进行测序分析。RT-PCR扩增克隆覆盖全基因组9个重叠基因片段,基因组3′和5′末端采取3′-RACE和5′-RACE方法,9个重叠基因片段序列拼接得到DRV全基因组cDNA序列,共11863个核苷酸。DRV毒株全基因组构成与其他狂犬病毒基因组构成相似,由5个编码区组成,基因起始位点和终止位点高度保守,在核蛋白和糖蛋白的重要抗原位点有个别氨基酸发生变异,对已完成全基因组测序的几个基因1型毒株分别进行了N、P、M、G、L基因核苷酸及氨基酸的同源性比较。与其他具有代表性的毒株进行N基因序列比较建立的系统进化树表明,DRV毒株属于基因1型,与中国人用疫苗株3aG同源性最高为94%,与分类位置未确定的北高加索毒株(WCBV)的同源性最低为71%。本研究结果可为狂犬病毒各项分子生物学研究提供理论参考。; 赵云蛟郭利黄莹张立世钱爱东; 关键词：狂犬病毒全基因组

狂犬病病毒Vero ERA株G蛋白333位点精氨酸突变株的构建: 2009年; 狂犬病病毒糖蛋白(G)在病毒的致病性中起着主要作用,其第333位点精氨酸(Arg)是决定病毒神经细胞侵嗜性的重要分子基础之一。为研制更加安全有效的狂犬病减毒活疫苗,本试验采用负链RNA病毒反向遗传学方法,在体外将狂犬病病毒Vero细胞适应株ERA糖蛋白G333位点精氨酸突变为谷氨酸,构建减毒株ERAGΔ,减弱了其潜在的毒力返强的危险。救获的ERAGΔ突变株在Vero细胞上表现出与ERA株亲本病毒相似的生长动力学特性。本研究成功构建并拯救出了狂犬病病毒ERA减毒疫苗株,为研制开发狂犬病病毒无毒疫苗提供了候选株。; 郭利王喜军冯娜葛金英杨松涛夏咸柱步志高; 关键词：狂犬病病毒反向遗传操作

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郭利