陈秀春
- 作品数：6 被引量：36H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅医学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划湖南省重点学科建设项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 日本血吸虫核糖体蛋白S4基因的克隆、表达、纯化及免疫诊断价值的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的 体外重组日本血吸虫核糖体蛋白S4（SjRPS4）,并评价其在日本血吸虫病免疫诊断中的应用价值.方法 从日本血吸虫尾蚴cDNA文库获得了SjRPS4蛋白相关基因,将该段基因克隆入pQE30表达载体并转化到大肠杆菌M15中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白表达.融合蛋白经Ni2＋-NTA树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定蛋白反应,通过Western blot和ELISA对其免疫原性进行鉴定.结果 成功构建了pQE30/SjRPS4重组菌.重组菌诱导培养后,SDS-PAGE电泳分析可见在相对分子质量约30×103处有SjRPS4融合蛋白的表达,经纯化获得纯度达90%以上的表达蛋白.Western blot检测结果表明该重组蛋白能被日本血吸虫病患者血清识别.用ELISA法检测疑似血吸虫病患者血清,敏感性为90.91%（70/77）,特异性为92.59%（25/27）,SjRPS4重组表达蛋白阳性率为67.30%（70/104）,与肺吸虫病患者血清无交叉反应.结论 成功克隆表达了SjRPS4蛋白,初步证实了SjRPS4在诊断血吸虫病中具有良好的应用价值.
- 高冬梅汪世平余路新何卓陈秀春
- 关键词：血吸虫重组蛋白质类免疫学试验
- 湖北钉螺人工感染、室内传代与模拟野外饲养的研究(英文)被引量：2
- 2011年
- 目的:通过人工方法将湖北钉螺制备成血吸虫感染性钉螺,确定钉螺感染的最佳条件,建立钉螺人工感染传代的室内株,为研究其感染活性、遗传变异和疫苗等提供实验室依据。方法:用尼龙绢筛集卵法收集日本血吸虫成熟虫卵,常规法孵化毛蚴。将钉螺与毛蚴按不同比例进行感染,感染方式分为个体感染和集体感染。个体感染随机分6组(Ⅰ～Ⅵ组),每组200只钉螺,每只钉螺置单孔内分别感染,钉螺感染毛蚴比例分别为1:0,1:5,1:10,1:15,1:20,1:25;集体感染随机分6组(Ⅶ～Ⅻ组),每组200只钉螺,按组别集中感染,Ⅶ～Ⅻ组钉螺感染毛蚴比例分别同Ⅰ～Ⅵ组。然后对每组钉螺的感染数、死亡数及尾蚴逸出量进行比较,确定最佳感染方法和比例。以第1代人工感染性钉螺逸出的尾蚴感染实验动物,获取成熟虫卵并孵化毛蚴,然后采用个体感染方式,以1:15的比例继续感染钉螺,获得第2代人工感染性钉螺。比较第1代与第2代人工感染性钉螺的感染数、死亡数及尾蚴逸出数。通过动物感染实验,比较人工第1代、第2代感染性钉螺与自然感染性钉螺日本血吸虫成虫发育率、每克粪卵数(fecaleggspergram,FEPG)及每克肝卵数(livereggspergram,LEPG)。结果:个体感染Ⅰ～Ⅵ组的钉螺感染数分别为0±0,22.7±4.2,31.7±4.5,53.0±5.3,39.3±5.9,32.7±4.7;钉螺死亡数分别为21.7±3.1,25.0±3.6,31.3±4.9,44.7±6.5,78.3±9.5,89.7±13.6;钉螺平均逸蚴量为0±0,308.0±96.6,428.1±146.2,527.0±171.1,571.4±148.9,602.9±356.3。集体感染Ⅶ～Ⅻ组,钉螺感染数分别为0±0,12.3±2.5,18.7±4.7,28.3±4.2,33.3±4.7,29.3±5.5;钉螺死亡数分别为22.7±3.8,23.7±4.5,28.3±5.5,47.0±9.5,75.7±8.5,86.3±12.2;钉螺平均逸蚴量为0±0,244.5±57.3,292.3±74.8,347.1±100.8,477.2±142.1,447.3±161.4。用人工制备的第1代感染性钉螺对血吸虫进行人工传代研究,成功获得了人工第2代感染性钉螺,感染率为24.65%,钉螺死亡�
- 夏英定汪世平刘雪琴高冬梅李庆华吴平陈秀春冯其梅周云飞张树菊
- 关键词：日本血吸虫湖北钉螺毛蚴传代
- 检测日本血吸虫病胶体碳试纸条的研制与初步应用(英文)被引量：3
- 2009年
- 目的:开发一种快速检测血清中日本血吸虫抗体的免疫诊断方法。方法:用胶体碳标记日本血吸虫成熟虫卵可溶性抗原(SEA),与待测血清中日本血吸虫抗体结合,再用SEA包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上以捕捉碳标SEA-血吸虫抗体复合物,达到检测血吸虫抗体的目的。结果:检测137份血清,与间接血凝法(indirect haemagglutination assay,IHA)检测结果一致性为98.54%,如经IHA试剂盒检测呈阳性者即视为阳性血清,则该方法的检测敏感性为98.99%,特异性为97.37%;且检测条带的灰度与血清效价具有曲线关系,因而可以对待测血清作半定量分析。结论:胶体碳试条层析法操作简便,快速,具有较高的敏感性和特异性,适合作血吸虫现场检测。
- 汪世平余路新车宏莉陈秀春秦永华高冬梅刘明社
- 关键词：日本血吸虫病抗体检测可溶性虫卵抗原
- 我国血吸虫疫苗研究进展及应用前景被引量：22
- 2009年
- 血吸虫病疫苗研究一直是WHO/TDR热带病防治和我国血防研究的热点内容,近年来我国有关血吸虫病疫苗的研究取得了重要进展。随着蛋白质组学和分子生物学技术的发展,我国血吸虫病疫苗研究已发展到基因工程疫苗研制阶段。其中DNA疫苗已成为当前我国血吸虫病疫苗研究的主流方向。同时,新的有效疫苗抗原分子的筛选鉴定及其配伍与优化,混合疫苗、多价疫苗的构建及其与佐剂的联用,为提高疫苗免疫保护效果提供了新的途径。
- 汪世平陈秀春高冬梅
- 关键词：日本血吸虫疫苗免疫
- 日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4、SjRPL7 DNA疫苗对小鼠免疫保护作用研究被引量：5
- 2010年
- 目的研究日本血吸虫核糖体蛋白SjRPS4、SjRPL7DNA疫苗对小鼠免疫保护作用。方法大量制备pcD-NA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7质粒DNA疫苗,昆明小鼠40只,随机均分为A、B、C和D组,A组为生理盐水(NS)组,每次肌肉注射100μL生理盐水;B组每只小鼠的股四头肌注射100μgpcDNA3.0裸质粒DNA;C组为pcDNA3.0/SjRPS4真核重组质粒组,每次肌肉注射质粒100μg/100μL;D组为pcDNA3.0/SjRPL7真核重组质粒组,每次肌肉注射质粒100μg/100μL。每隔2w同量加强免疫1次,共3次。末次免疫后第2w测定免疫各组血清特异性抗体效价后,经小鼠腹部皮肤人工感染20±1条日本血吸虫尾蚴。感染后第42d处死小鼠,计算减虫率和减卵率。结果与NS对照组比较,pcDNA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7免疫组小鼠均获得了较显著的减虫率、肝减卵率、肠减卵率、每雌子宫减卵率。统计学处理,均有显著性差异。结论pcDNA3.0/SjRPS4和pcDNA3.0/SjRPL7DNA疫苗对小鼠均有较强的免疫保护效果。
- 汪世平高冬梅何卓余路新陈秀春
- 关键词：日本血吸虫DNA疫苗免疫保护
- pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB双价疫苗的构建及其免疫效果观察被引量：6
- 2009年
- 目的构建日本血吸虫天然分子疫苗相关靶基因的双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB,并观察其免疫保护效果。方法分别以pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB为模板,设计引物扩增SjRPS4、SjCB,重叠PCR法将SjRPS4、SjCB拼接,扩增,经双酶切后与真核质粒载体pVAX1、pcDNA3.0连接,转化DH5α细胞,筛选阳性克隆;提取双价重组质粒、空质粒及pVAX1/SjRPS4,经左腿股四头肌注射昆明小鼠,14d后取肌肉组织切片进行间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色,证实双价重组质粒的表达;提取pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB及相应空载体,100μg/只或等量PBS经左腿股四头肌注射昆明小鼠,4周后以(20±1)条尾蚴贴腹感染,6周后检测减虫率、减卵率。结果PCR、EcoRI/XhoI双酶切及测序证实双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB构建成功;肌肉组织间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色证实重组质粒能够在小鼠肌肉细胞内成功表达;与PBS组相比,pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB免疫小鼠各组间差异均有统计学意义(P<0.05),各组与相应的空质粒组相比各指标差异亦具有统计学意义(P<0.05);两种不同载体构建的双价疫苗之间比较差异则无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建真核双价重组质粒pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB,二者免疫昆明小鼠均可以产生比单价疫苗更好的免疫保护效果。
- 罗四维秦永华汪希雅高冬梅何卓周帅锋陈秀春余路新汪世平
- 关键词：日本血吸虫病疫苗
