蒋彦
- 作品数：33 被引量：224H指数：10
- 供职机构：四川大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 拟南芥中与ABA信号途径相关的两个同源未知基因的研究
- 2010年
- 本研究主要在实验室前期筛选出的两个编码同源未知基因AB(AB025622)和AC(AC023628)所构建的拟南芥过量表达和抑制表达转基因植株基础上对转AB基因拟南芥的生理性状进行初步分析以及在转录水平上分AB、AC和ABI1、ABI2在ABA影响下其表达情况。研究证明AB基因的过量表达导致植株对ABA不敏感,失水率增加,而AB的抑制表达导致植株对ABA敏感,降低了植株的失水率。初步证实AB参与ABA信号传导.此外,通过RNA的半定量分析可知在转录水平上AB、AC和ABI1、ABI2的表达量都受ABA诱导变化,证明ABA对野生型拟南芥植株生理性状的影响与控制AB、AC和ABI1、ABI2内源表达量有密切联系.
- 杨笑玚吴明杰王婷婷蒋彦李旭锋GRILL E杨毅
- 关键词：酵母双杂交半定量分析
- 一新中温碱性蛋白酶基因的克隆及原核表达（英文）被引量：5
- 2013年
- 【目的】从环境中分离筛选产蛋白酶、降解蛋白质的菌株,寻找使用价值较高的碱性蛋白酶。【方法】通过酪蛋白平板法分离筛选产蛋白酶菌株,经生理生化方法及16S rDNA基因序列鉴定菌株;利用简并引物及基因组步移克隆蛋白酶完整开放阅读框;蛋白酶前体蛋白及成熟肽序列在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行重组表达;纯化活性蛋白酶后,利用化学合成多肽底物(succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide)检测酶活性质及其催化活力。【结果】分离到的菌株L010被鉴定命名为芽胞杆菌(Bacillus sp.)L010;蛋白酶开放阅读框包含了1149个碱基,编码382个氨基酸,氨基酸序列按其功能分为N端的30个氨基酸残基组成的信号肽,77个氨基酸残基构成的前导肽,C端275个氨基酸残基组成的成熟肽;此蛋白属于丝氨酸蛋白酶家族中枯草杆菌蛋白酶类(Subtilisins)成员,并命名为SprD;SprD的前体蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中重组表达时,在前导肽辅助下自加工为活性蛋白酶;SprD呈现出较高的催化活力,其反应最适条件为温度70℃,pH 9-10。【结论】SprD在碱性(pH 7.0-10.0)、中高温(25℃-60℃)条件下的稳定性及较高的催化能力使其具有一定的研究和潜在利用价值。
- 李丹黄非夏梦芸蒋彦杨毅
- 盐藻DSG10表达载体构建及其根癌农杆菌的转化被引量：2
- 2002年
- 刘杨曹毅蒋彦乔代蓉杨滔
- 关键词：植物基因工程基因表达植物基因转化根癌农杆菌
- 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)cDNA文库构建及功能基因筛选(英文)被引量：10
- 2004年
- 采用Qiagen公司的植物总RNA提取技术、Clontech公司的CreatorTM技术平台以及SMARTTM技术进行cDNA文库构建。从杜氏藻中提取出了高质量的总RNA,通过PowerScript反转录酶反转录杜氏藻的总RNA,采用LD-PCR、酶处理等方法对cDNA进行等比例扩增、纯化,同时使用CHROMASPIN-400柱子将cDNA分段化,最后将长片段连入pDNR-LIB质粒,1.5kV,25μF电转化大肠杆菌JM109,得到含1.5×106个克隆子的原始文库,滴度为1.5×106cfuml-1。结合酶切和PCR,对该文库的质量进行了鉴定和统计,文库的平均片段插入长度为1.5kb。采用烯醇酶和UDP葡萄糖脱氢酶的EST作为同源探针,对文库中的功能基因进行筛选,并采用放射性原位杂交法,对扩增文库进行了初筛和复筛,得到了含这两条基因全编码序列的cDNA,烯醇酶为1.8kb,UDP葡萄糖脱氢酶为1.9kb,为今后对该种进行大规模功能基因组学研究奠定基础。
- 李钢刘敏蒋彦乔代蓉曹毅
- 关键词：盐生杜氏藻CDNA文库功能基因组学
- 利用RNAi技术大规模分析基因功能的研究被引量：16
- 2002年
- 将双链RNA导入细胞内会干扰与之同源的基因的表达 ,使生物体产生相应的功能缺陷表型 ,这种作用称为RNAi(RNAinterference)。针对人类、植物、微生物等大规模基因组测序后所面临的功能鉴定难题 ,着重探讨了RNAi的机制及其研究进展。复合物RISC和酶Dicer的发现揭示了RNAi导致同源基因沉默的作用机理。通过使用RNAi这种反向遗传学工具可使生物体产生相应的功能缺陷表型 ,从而确定未知基因的功能。因此RNAi对大规模分析动、植物基因功能的研究具有重要的作用。
- 刘敏曹毅蒋彦
- 关键词：RNAI技术基因功能
- 改进简并PCR法克隆盐生杜氏藻烯醇酶基因被引量：5
- 2004年
- 该文针对基因同源性克隆中存在的问题 ,采用改进简并PCR法对盐生杜氏藻具抗逆功能的烯醇酶基因 .改进后的同源引物简并度从 10 0 0倍以上降低至 10 0倍以下 ,利用RT PCR成功地扩增出一条 6 30bp的盐藻cDNA片段 ,该片段与其他物种的烯醇酶基因具有很高的相似性 .在此基础上进行 5’和 3’RACE获得了盐藻烯醇酶基因的全长cDNA ,其长度为 1734bp .序列分析表明 ,该基因与莱茵衣藻烯醇酶基因的相同性达 83% ,相似性达 89% ,且在进化上与莱茵衣藻的亲缘关系最近 .Southern杂交结果显示 。
- 白林含乔代蓉郑鸣徐辉李茜蒋彦杨志荣曹毅
- 关键词：盐藻烯醇酶简并PCRRACE
- 中国特有诸葛菜复合群的系统发育关系(英文)被引量：7
- 2009年
- 利用5.8S核糖体DNA全长间隔序列(ITS/5.8S)和叶绿体基因matK对中国原产诸葛菜复合群的系统发育关系进行了分析研究。ITS序列结果支持中国诸葛菜复合群分为两支:一支由湖北诸葛菜和太白诸葛菜组成;另一支由诸葛菜和铺散诸葛菜组成。matK的序列分析结果表明,在中国诸葛菜复合群的系统发育树中,铺散诸葛菜和诸葛菜处于基部位置。结合以前的核型分析和本文的研究结果,我们不支持将湖北诸葛菜和太白诸葛菜归隶于诸葛菜,而支持我们之前提出的两种可能的原始细胞型的进化假说。另外,根据生物地理学分析,推测从长江中下游到秦岭地区是中国原产诸葛菜的近代分化中心。
- 周丽蓉余研宋荣秀何兴金蒋彦李旭锋杨毅
- 关键词：ITSMARK诸葛菜生物地理学系统发育关系
- 纤维素内切酶Ⅲ再折叠过程中存在中间体(英文)
- 2012年
- 本文研究了尿素变性的纤维素内切酶Ⅲ的再折叠.通过更灵敏的方法—相图法,本研究发现在2 mol/L～4 mol/L尿素间,纤维素内切酶Ⅲ的再折叠过程中存在至少一个中间体,聚沉曲线也进一步验证了此中间体的存在.该中间体的存在个数可进一步通过蛋白动力学曲线得以确定.
- 李丹蒋彦
- 关键词：相图再折叠中间体
- 人碳酸酐酶单点突变Gln92Pro对酶活性、稳定性和折叠路径的影响(英文)
- 2012年
- 本文研究了单点突变Q92P对酶活性,稳定性以及折叠途径的影响.尽管该位点不直接参与底物催化,但92位氨基酸的突变对酶的活性,稳定性以及折叠过程产生了重大的影响.该突变的酶活性有较大程度的降低,通过模拟发现该位点的氢键网被破坏.而且光谱实验表明该突变导致更多被掩埋的色氨酸暴露于周边环境,但并没有较大的影响到二级结构和疏水面暴露程度.在对抗化学品诱导的去折叠程度上,相比于野生型蛋白,该突变蛋白稳定性较差.通过吉布斯自由能的计算发现该突变位点轻微的降低了中间体的稳定性,但相对更大的影响了天然态的稳定性,天然态至中间体的能量大约为野生型的20%左右.该结果有组于解释在折叠过程中倾向于聚沉的中间体的存在,该中间体的存在影响了正常的折叠路径.该实验表明92位氨基酸对人碳酸酐酶Ⅱ的活性和稳定性很重要.
- 刘畅蒋彦
- 关键词：基因突变稳定性
- 四川麦冬自然居群间RAPD分析被引量：33
- 2002年
- 目的 研究百合科植物麦冬 Ophiopogon japonicus及其同属植物沿阶草 O.bodinieri四川所产 10个居群间的遗传多样性。方法 以 4 0个 10碱基随机引物进行 RAPD分析。结果 11个有效引物扩增获得 5 15条 DNA带 ,通过聚类分析 ,构建 DNA分子系统树图 ,确定了麦冬及沿阶草的居群及种间亲缘关系。结论 (1)供试样品间遗传差异明显。具有丰富的遗传多样性 ,但是其遗传差异与地理分布联系并不紧密 ,而与形态差异联系较紧 ;(2 )麦冬与沿阶草之间存在着较大的遗传差异 。
- 徐柯郑鸣曹毅蒋彦乔代蓉
- 关键词：分子标记技术自然居群RAPD
