邱建明
- 作品数：11 被引量：56H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 反转录-聚合酶链反应在呼吸道合胞病毒感染检测的应用被引量：3
- 1997年
- 为呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染的临床诊断寻求敏感、特异的检测方法。采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增病毒培养液和急性呼吸道感染患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因，并应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针对扩增产物进行鉴定。结果成功地提取了ＲＳＶｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，经扩增得到４７１ｂｐ左右ｃＤＮＡ区带。流感病毒Ｂ、副流感病毒２型、腺病毒７型对照无扩增带。ＲＳＶ培养液１０倍连续稀释至１∶１０００，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增仍可见４７１ｂｐｃＤＮＡ区带。１３例患者鼻咽分泌物中的ＲＳＶ基因得到扩增，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹与斑点杂交证实。建立了ＲＳＶＲＴ－ＰＣＲ的方法，特异性、敏感性均较好，在临床标本的检测中将会有重要应用。
- 陈杭薇邬光惠李继成李继成刘晓联尤兰华
- 关键词：呼吸道合胞病毒聚合酶链反应反转录
- 汉滩病毒 A9 株M基因片段在重组痘苗病毒中的表达及鉴定被引量：8
- 1998年
- 为发展国产化肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒基因工程疫苗，选择了汉滩病毒Ａ９株Ｍ基因片段为目的基因，构建转染质粒ｐＪＳＢＡ９Ｍ。以携带Ｌａｃ基因的重组病毒为亲本，使表达载体ｐＪＳＢ－Ａ９Ｍ上的Ｍ片段与痘苗病毒内的Ｌａｃ基因重组，将Ｌａｃ置换成Ａ９Ｍ片段。用蓝白斑法筛选重组痘苗病毒，经ＰＣＲ扩增证实Ａ９Ｍ片段重组入痘苗病毒基因组内。重组痘苗病毒感染的ＶｅｒｏＥ６细胞，用抗糖蛋白单克隆抗体（ＨＣＯ２、１１Ｅ１０、３Ｄ５、１６Ｄ２）间接免疫荧光法检测，呈阳性反应；放射免疫沉淀法（ＲＩＰ）证实，表达产物可与抗Ｇ２的糖蛋白单克隆抗体出现特异性沉淀带；间接免疫荧光染色法检测表明，重组病毒免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的血清与Ａ９株感染的ＶｅｒｏＥ６细胞有较好的特异性反应（１：３２０），说明Ａ９Ｍ片段在痘苗中表达成功。
- 马章亮杭长寿邱建明姚树元宋干
- 关键词：肾综合征出血热汉滩病毒基因表达疫苗
- 汉滩病毒糖蛋白G1 G2和核蛋白NP在痘苗病毒天坛株中的联合表达被引量：7
- 1998年
- 将汉滩病毒７６／１１８株Ｍ、Ｓ片段分别插入转染质粒ｐＪＳＢ１１７５的Ｐ１１和Ｐ７．５启动子下游，构建成重组质粒ｐＪＳＢ１１Ｍ７．５Ｓ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染技术将重组质粒分别与痘苗病毒天坛株ＴＫ＋ｖｖ和表达Ｓ片段的重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５Ｓ进行共转染，免疫酶斑和蓝白斑法筛选并纯化，得到了重组病毒ｖＪＳＢ１１Ｍ７５Ｓ。Ｂｕｄｒ的选择压力试验表明，外源基因确实插入在ＴＫ基因区；ＰＣＲ及打点杂交证实了两个片段的插入；重组痘苗病毒基因组的部分序列分析显示，两个片段与各自的启动子连接正确；间接免疫荧光及放免沉淀证明了糖蛋白Ｇ１、Ｇ２和核蛋白ＮＰ的表达。
- 姚树元杭长寿邱建明马章亮李德新薛颖李川宋干
- 关键词：汉坦病毒重组痘苗病毒糖蛋白核蛋白
- 汉坦病毒弱毒株的选育被引量：5
- 1996年
- 为了研制肾综合征出血热减毒活疫苗,研究病毒毒力,改进了汉坦病毒感染环磷酰胺处理地鼠动物模型,即检测地鼠感染病毒后出现的类似于人发病过程的四期经过。利用该动物模型从汉坦病毒(Ⅰ型)A9毒株中,采用空斑选育法筛选,获得1株对乳小鼠丧失脑内致死力及对环磷酰胺处理地鼠丧失致病力的弱毒株。弱毒株感染乳小鼠及环磷酰胺处理地鼠后,在肝、脾、肾、肺及脑中呈"一过性"繁殖,用免疫荧光法检测不到明显的病毒抗原,但采用逆转录-聚合酶链反应可检测到特异性病毒核酸。
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- 关键词：汉坦病毒弱毒株选育疾病模型聚合酶链反应
- 汉滩病毒毒力标志的建立被引量：3
- 1995年
- 比较了汉滩病毒Ａ９株强毒克隆病毒与弱毒克隆病毒在体外培养、诱导中和抗体能力，以及单克隆抗体（单抗）反应谱等方面的差异。发现最为明显的区别在于弱毒克隆病毒对小鼠腹腔巨噬细胞及人外周血单核细胞敏感性降低，在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞上繁殖缓慢，空斑形成需较长时间，且斑小。但强、弱毒克隆病毒的致细胞融合活性，刺激ＣＴＬｓ应答活性，以及时Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞的吸附速率与穿透力均无明显差别。经温度敏感（ｔｓ）试验及缺损干扰（ＤＩ）颗粒检测，表明弱毒克隆病毒为非ｔｓ株，不含ＤＩ颗粒。而弱毒克隆病毒免疫６～８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，同样能诱导较高滴度的中和抗体。强、弱毒克隆病毒的单抗反应谱表明，除了对４株抗糖蛋白单抗的反应性有显著差异外，两克隆病毒对１８株抗核蛋白单抗及１８株抗糖蛋白单抗的反应性无显著差异。
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- 关键词：汉滩病毒
- 汉坦病毒A9株M基因片段核苷酸序列的测定及分析被引量：1
- 1996年
- 采用反转录-ＰＣＲ方法，分节段扩增汉坦病毒Ａ９株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭＴ载体中，用双脱氧末端终止法直接测定序列。结果表明，Ａ９株Ｍ片段ｃＤＮＡ由３６１８个碱基组成，编码１１３５个氨基酸， 核苷酸序列及由其推导的氨基酸序列同７６／１１８株的同源性分别为９４．３３％和９７．８０％，说明汉坦病毒Ａ９株与７６／１１８株在糖蛋白的结构上高度保守。同７６／１１８株比较，在３'末端非编码区变异极大，变异率为２０％，且多了２个核苷酸。Ａ９株Ｍ基因片段核苷酸序列的获得，为利用该ｃＤＮＡ进行基因工程疫苗的研制创造了条件。
- 邱建明石晓宏杭长寿R.M.ELLIot宋干
- 关键词：汉坦病毒核苷酸
- 汉坦病毒A9株M基因片段全长cDNA克隆及其在痘苗病毒中的瞬时表达被引量：2
- 1995年
- 采取反转录一聚合酶链反应（ＰＣＲ），分３个片段扩增Ｉ型汉坦病毒（野鼠型）中国毒株Ａ９株Ｍ基因片段，分别克隆入ＰＧＥＭ－Ｔ载体中。选择３个正向插入的ＴＡ９ＩＢ、ＴＡｇＣＤ、ＴＡｇＥＡ克隆，选用ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＶ进行酶切、连接，获得了１个在ＰＧＥＭ－Ｔ载体中插入３．６ｋｂ的Ａｇ株Ｍ基因片段ｃＤＮＡ克隆，酶切图谱分析证实播入片段正确。将Ａ９Ｍ片段在痘苗病毒／Ｔ７噬菌体ＲＮＡ聚合酶瞬时（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）表达系统中进行表达，用抗汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体进行免疫荧光检测，观察到很强的特异性荧光，证明ＡｇＭ基因ｃＤＮＡ能进行表达。
- 邱建明石晓宏杭长寿宋干姚树元
- 关键词：汉坦病毒聚合酶链反应DNA痘苗病毒
- 汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列的分析比较被引量：2
- 1996年
- 采用逆转录－ＰＣＲ方法，用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３％）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ，并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列，发现二者均由１９７８个核苷酸组成，比７６／１１８株少６个核苷酸，并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同。进一步与７６／１１８、ＨＶ１１４的相关序列比较，发现Ｇ１编码区的第６０６、６１４位氨基酸的变异同Ａ３９ｓ病毒的减毒有一定相关。从Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ、７６／１１８及ＨＶ１１４４株病毒Ｇ１糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示，在位于Ｇ１糖蛋白Ｃ末端的最大亲水区域的６００～６２０位氨基酸区域，弱毒株Ａ３９ｓ同强毒株Ａ９ｖ、７６／１１８、ＨＶ１１４的亲水性有明显不同，而这一差异又主要由第６１４位氨基酸的变异所引起。因此推测，Ｇ１糖蛋白Ｃ端亲水区域同汉滩病毒毒力相关，而第６１４位的精氨酸被谷氨酰胺取代，同Ａ３９ｓ病毒毒力的减弱可能有关。
- 邱建明杭长寿宋干姚树元李盈盈鲁晓岚
- 关键词：汉坦病毒CDNA克隆
- 汉滩病毒PS-6株的分离及其生物学性状研究被引量：4
- 2000年
- 目的 从病人血清分离汉坦病毒Ⅰ型毒株 ,为双价疫苗的配伍提供更好的候选株。方法 从陕西HFRS患者血清 ,按常规法分离汉坦病毒。用系列单克隆抗体、空斑减少中和试验、RT PCR及部分核苷酸序列分析等检定 ,确证所分离毒株的血清 (或基因 )型别。结果 从 17份HFRS患者血清中成功地分离到 1株汉坦病毒 ,定名为PS 6株。经上述方法全面鉴定确定其为汉滩病毒 (即Ⅰ型病毒 )。该毒株有较强的繁殖力 (毒力 )及较好的抗原性 ,其免疫血清对来源于不同地区的Ⅰ型病毒有较好的中和活性。结论 PS 6毒株有可能成为Ⅰ型病毒疫苗候选株 ,为双价或多价疫苗配伍。
- 姚树元杭长寿邱建明霍子威石晓宏张全福李川宋干
- 关键词：汉滩病毒生物学性状RT-PCR
- 汉坦病毒毒力的研究
- 邱建明
