柳湘
- 作品数：8 被引量：53H指数：4
- 供职机构：上海市肿瘤研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 非病毒载体系统在基因治疗中的应用被引量：10
- 2001年
- 非病毒载体系统具有低毒、低免疫原性和相对靶向性等优点 ,是新兴发展起来的基因转移系统。本文综述了目前基因治疗中所用的几种非病毒载体系统及其研究进展。
- 柳湘田培坤顾健人
- 关键词：基因转移系统非病毒载体基因治疗肿瘤
- γ-干扰素原核高效表达体系的建立
- 1999年
- 用基因重组的方法，将γ－ＩＦＮｃＤＮＡ 片段用ＥｃｏＲＩ单酶插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０ 中，筛选得到带有正向串联了２个γＩＦＮｃＤＮＡ 片段的阳性重组质粒，转化大肠杆菌ＤＨ５α后，建立了γ－ ＩＦＮ 的原核表达体系。经温度诱导培养，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ ｂｌｏｔ、ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 光密度扫描检测证实：该体系可高效表达γ－ ＩＦＮ 蛋白，表达量占菌体可溶性蛋白的４０ ％以上。病变抑制法测活表明：表达产物具有γ－ ＩＦＮ 的抗病毒活性。这一体系的建立为大规模发酵生产γ－ ＩＦＮ 提供了可靠的工程菌株，为进一步研究其分离纯化工艺提供了重要的实验模型。
- 高艳青柳湘王惠珍康玉英程牛亮牛勃
- 关键词：大肠杆菌重组DNA
- 靶向性非病毒载体介导p21^(WAF-1)基因对肝癌细胞的抑制作用被引量：3
- 2000年
- 利用研制开发的靶向性非病毒载体GE7基因导入系统转导外源基因pCEP-p21WAF-1, 检验其介导p21WAF-1基因进入肝癌细胞后, 在体内外抑制肝癌细胞的生长的效率. 体外实验证明, 导入外源基因后, SMMC-7721和BEL-7402细胞的生长受到抑制, 第8天抑制率分别达到56%和66.7%. 而体内实验结果是, 荷SMMC-7721裸鼠皮下瘤周注射该基因导入系统, 转导pCEP-p21WAF-1 3周后, 实验组肿瘤的重量(平均为(0.083 ( 0.043)g)与对照组(平均为(0.281 ( 0.173) g)相比明显减小, 且在统计学上有显著差别(P < 0.05). 以上结果表明, GE7基因导入系统可以介导外源基因pCEP-p21WAF-1进入细胞内, 并在体内外抑制肝癌细胞的生长.
- 韩峻松田培坤柳湘姚明顾健人
- 关键词：基因治疗受体介导肝细胞肝癌
- 联合基因治疗肿瘤研究新进展被引量：23
- 2000年
- 肿瘤基因治疗研究发展迅速 ,现已出现多种治疗方案 ,有些已应用于临床。针对肿瘤发生的复杂性和多样性 ,将几种治疗方案进行有效联合以提高疗效是目前工作的新热点。本文对近年国内外联合基因治疗的几个方面作一简要综述。
- 柳湘田培坤顾健人
- 关键词：肿瘤基因治疗
- γ-干扰素在NRK细胞中的表达
- 2000年
- 以 pBS -KS为中间载体 ,通过一步亚克隆 ,获得了两端结构为HindⅢ /XbaⅠ的γ -IFNcDNA片段 ,将该片段与真核表达载体RC/CMV进行定向重组 ,制备出γ -IFN真核表达质粒RC/CMV -IFNγ。转染NRK细胞后 ,经标准ABC法检测表明 :γ -IFN在NRK细胞中获得稳定表达。这一体系的建立为γ -IFN真核基因工程提供了稳定表达的工程细胞株 ,并为利用γ
- 高艳青柳湘王惠珍康玉英程牛亮牛勃
- 关键词：干扰素Γ基因治疗
- 新型基因转移系统介导p21基因治疗人脑胶质瘤的体外研究被引量：9
- 2000年
- 目的：探索靶向性非病毒载体系统在人脑胶质瘤基因治疗中的应用。方法：组建了ＥＧＦ－Ｒ介导的ＧＥ７基因转移系统，分别与β－ｇａｌ报道基因和ｐ２１基因构成载体复合物，体外转染Ｕ２５１细胞，通过Ｘ－ｇａｌ染色、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析、原位末端标记、ＤＮＡ梯带检测等，观察了外源基因的导入及对肿瘤细胞的抑制作用。结果：Ｘ－ｇａｌ染色表明，外源基因的导人率可达８０％；转染ｐ２１基因后，细胞生长受到明显抑制，第７天生长抑制率约５８％。原位末端标记及 ＤＮＡ梯带检测发现，转染细胞有明显的凋亡发生。结论：ＧＥ７载体系统能高效靶向地将外源基因导入肿瘤细胞，外源基因的表达可明显抑制肿瘤细胞的生长，有效诱导其凋亡。
- 柳湘韩俊松田培坤顾健人
- 关键词：脑胶质瘤P21基因基因治疗基因转移系统
- 转甲状腺素蛋白基因在酵母中的表达被引量：8
- 1999年
- 用限制酶 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ 将含人 Ｔ Ｔ Ｒ 基因的 Ｄ Ｎ Ａ 片段（ 约４９３ｂｐ） 从质粒ｐ Ｓ Ｋ Ｔ Ｔ Ｒ 上切下后并插入到分泌型载体ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ Ｉ 的 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ 位点上，经酶切鉴定重组质粒ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ Ｉ Ｔ Ｔ Ｒ 上的 Ｔ Ｔ Ｒ 基因插入方向正确。将ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ Ｉ Ｔ Ｔ Ｒ Ｄ Ｎ Ａ 用 Ｂｇｌ Ｉ Ｉ 酶切后，转入真核表达系统———毕赤氏酵母。得到的转化子经摇瓶发酵，上清液用１５ ％ Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 检测，有 Ｔ Ｔ Ｒ Ｆ 的表达。经 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｓｅｐｈｅｒｏｓｅ Ｆ． Ｆ 离子交换柱和 Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ２００ 分子筛层析，得到纯化的 Ｔ Ｔ Ｒ Ｆ。体外实验表明 Ｔ Ｔ Ｒ Ｆ
- 程颖高卜渝宋大新袁汉英陈永青李育阳柳湘田培坤顾健人
- 关键词：转甲状腺素蛋白分泌型载体毕赤氏酵母肝癌细胞
- 人肝细胞生长因子在CHO细胞中的表达
- 1998年
- 以ｐＲＣ／ＣＭＶ作为真核细胞表达性载体，用限制性内切酶ＢａｍＨＩ／ＸｂａⅠ将ＨＧＦｃＤＮＡ全序列定向重组到ｐＲＣ／ＣＭＶ的多克隆位点上。筛选得到的重组质粒以磷酸钙ＤＮＡ共沉淀的方法转染ＣＨＯ细胞，经８００ｍｇ／Ｌ的Ｇ４１８筛选，获得阳性细胞克隆。用ＨＣＣ－７９０２细胞及原代培养的成年大鼠肝细胞对转染阳性细胞培养基收集上清进行活性测定。３Ｈ－ＴｄＲ掺入等分析证明，它能有效地抑制体外培养的人肝癌细胞的生长，并可明显刺激鼠肝细胞ＤＮＡ的合成。结果表明，重组人ＨＧＦ基因在ＣＨＯ细胞中成功地获得表达。
- 柳湘高艳青王惠珍程牛亮牛勃
- 关键词：肝细胞生长因子肝肿瘤肝癌细胞
