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丹参素抑制RANKL诱导的破骨细胞分化被引量：12: 2015年; 目的:研究丹参素对RANKL诱导的破骨细胞分化的影响。方法:运用冲洗法从股骨、胫骨中获得小鼠骨髓源性单核巨噬细胞用于体外RANKL诱导的破骨细胞分化,同时,施加不同剂量的丹参素干预,经TRAP染色法在形态学上观察观,蛋白印迹法检测蛋白水平的变化,实时定量PCR检测m RNA水平变化来研究丹参素对RANKL诱导的骨髓源单核巨噬细胞破骨分化的影响。结果:1不同剂量丹参素干预组与对照组相比,TRAP阳性破骨细胞数量得到了明显抑制(P<0.05)。2不同剂量丹参素干预组与对照组相比,磷酸化Akt的上调量被明显的降低。磷酸化p38 MAPK,JNK和ERK的变化则不明显。3不同剂量丹参素干预组与对照组相比,c-fos,TRAP,CTSK等参与破骨细胞分化的重要基因表达减少,NFATc1变化不明显。结论:丹参素通过下调磷酸化Akt水平的途径抑制了RANKL诱导的破骨细胞分化。; 沙鑫李锋吴太林马文瑞李寰陶惠人; 关键词：丹参素破骨细胞细胞培养

非天然氨基酸突变的小鼠RANKL蛋白原核表达及抗血清制备被引量：1: 2015年; 目的:研究非天然氨基酸突变的小鼠RANKL(m RANKL)蛋白的原核表达,并以表达的蛋白制备抗m RANKL蛋白的抗血清。方法:从小鼠的骨髓中提取总RNA,经PCR扩增m RANKL的胞外段,逆转录合成目的 DNA片段。将目的基因中编码第234位酪氨酸的密码子(TAT)突变成可编码非天然氨基酸p-硝基苯丙氨酸(p NO2Phe)的琥珀密码子(TAG),构建p ET28a-p NO2Phe234m RANKL重组表达载体,与p EVOL质粒共转化至表达菌E.coli BL-21(DE3),诱导表达并纯化。以纯化的蛋白免疫小鼠,制备小鼠抗m RANKL抗血清。采用ELISA测定抗血清效价,用Western Blot测定其特异性。结果:RT-PCR扩增出750bp的RANKL基因,并成功构建了p ET28a-p NO2Phe234m RANKL重组表达载体;p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL蛋白获得成功表达和纯化;以纯化的蛋白免疫小鼠,获得抗m RANKL抗血清,ELISA检测效价为1:6400,Western Blot结果显示该抗血清既可与p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL结合,也可与野生型m RANKL结合。结论:原核表达并纯化了p-硝基苯丙氨酸突变的m RANKL,制备了小鼠抗m RANKL的抗血清,为进一步研究阻断RANKL-RANK通路的新方法奠定了基础。; 李锋李寰沙鑫杨卫周马文瑞陶惠人; 关键词：非天然氨基酸 RANKL 原核表达抗血清

Cobb法测量先天性脊柱侧凸角度的可信度研究被引量：6: 2014年; 目的评价Cobb法测量先天性脊柱侧凸角度的可靠性和可重复性。方法选取第四军医大学西京医院脊柱外科2010年1月—2013年12月收治的78例先天性脊柱侧凸患者的标准前后位全脊柱X线片。由5名医生利用Digimizer软件对全脊柱X线片测量Cobb角度，每人测量2次，2次测量间隔3周。记录测量的Cobb角度以及两次测量的差值。应用组内相关系数（ICC）判定可靠性和可重复性。结果Cobb法测量先天性脊柱侧凸角度的可信度范围为0．84—0．98，5名测量者两次测量间最大差值的范围为20°-57°，其中差值〉10°的例数范围为13～46例，同一测量者两次测量间的误差约8．5°；测量者之间的可信度为0．947，5名测量者在81°～110°组和〉110°组之间的ICC为0．623和0．822。结论Cobb法测量先天性脊柱侧凸可以获得较好的可靠性和可重复性，但是测量者内部以及测量者之间仍然出现较多且较大的误差，尤其在侧凸角度较大时，Cobb法测量先天性脊柱侧凸的准确性缺乏稳定性。; 杨卫周陶惠人黄景辉李涛沈超陈博张涛刘明沙鑫罗卓荆; 关键词：脊柱侧凸 COBB角可靠性

抑制RANKL诱导破骨细胞分化的DNA适配子的筛选: 2017年; 目的:筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞诱导分化作用的DNA适配子。方法:首先,采用原核系统表达并纯化RANKL蛋白,通过SELEX(Systematic evolution of ligands by exponential)技术从人工合成的单链随机寡核苷酸文库中筛选能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的DNA适配子。然后,用RNAfolding sever software分析适配子空间结构,以ELISA检测DNA适配子和RANKL亲和力大小并筛选出亲和力最高的一组DNA适配子用以验证DNA适配子对RANKL诱导破骨细胞分化的抑制作用。结果:(1)成功在原核系统表达并纯化RANKL蛋白;(2)筛选出能高特异性、高亲和力结合RANKL蛋白的12个DNA适配子。(3)与对照组相比,不同浓度DNA适配子能明显抑制TRAP阳性破骨细胞数量(P<0.05),且浓度越高抑制效果越明显。结论:成功筛选出的DNA适配子能特异性结合RANKL蛋白并有效抑制RANKL对破骨细胞的诱导分化功能。; 吴太林沙鑫李锋张波波马文瑞陶惠人; 关键词：核因子ΚB受体活化因子配体适配子破骨细胞

二甲双胍对华法令诱导大鼠动脉钙化的影响及其机制初探被引量：1: 2016年; 目的:研究二甲双胍(metformin,MET)对华法令(Warfarin,WFN)诱导大鼠动脉钙化的影响及其机制。方法:将28只SD大鼠随机分为正常对照组、8周(W)钙化组、8W钙化+8W MET 100 mg/kg治疗组、8W钙化+8W MET 200 mg/kg治疗组。采用Von Kossa染色法检测胸主动脉组织中钙结节;邻甲酚肽络合酮比色法测定颈总动脉组织中钙沉积含量;免疫组化染色检测血管壁中成骨基因Runx2及血管平滑肌标志物α-SMA的表达;Western Blot检测血管壁中Runx2及自噬标志物LC3II的表达。结果:WFN干预8 W后,大鼠动脉中钙沉积含量显著增加(P<0.01),MET治疗组主动脉钙含量与钙化组相比均显著降低(P<0.01)。Von Kossa染色可见钙化组(WFN组)动脉壁中层黑色连续钙盐沉积条带,而进行MET治疗后,黑色条带明显减少,对照组未见黑色条带。免疫组化显示钙化组血管壁Runx2表达阳性,棕褐色染色较深,而α-SMA表达则显著下降,基本未见棕褐色染色沉积;MET治疗后能够逆转上述趋势。Western Blot显示钙化组血管壁Runx2表达明显上升,MET治疗后Runx2表达被抑制。此外,钙化过程中伴随着自噬标志物LC3II表达轻度上升;随着MET浓度升高,血管壁中自噬水平呈剂量依赖性显著升高。结论:二甲双胍能够有效抑制大鼠动脉钙化,减轻血管平滑肌细胞由收缩表型向成骨样表型转换,其机制可能与诱导自噬有关。; 马文瑞李寰陶惠人沙鑫沈鹏吴太林李锋罗卓荆; 关键词：二甲双胍华法令动脉钙化细胞自噬

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