侯明旭
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- CTFβ表达纯化及生物学性质鉴定
- 2014年
- 目的 表达和纯化淀粉样前体蛋白（APP）的羧基末端水解片段CTFβ,并鉴定其生物学性质,为在阿尔茨海默病（AD）抗体筛选中的应用奠定基础.方法 以APP基因为模板,克隆CTFβ的基因并测序鉴定;将CTFβ基因克隆到表达载体pET-30a（＋）上,构建重组表达质粒pET30a-CTFβ;转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析对重组蛋白进行纯化,并用Western Blot和ELISA检测其免疫反应性,并初步探索其作为检测抗原的实验条件.结果 重组蛋白在大肠埃希菌中可溶性表达,Western Blot结果,用抗组氨酸标签抗体做为一抗,（10～25） ×103处显示与预计相对分子质量大小一致的条带;此外,在80×103以上的位置尚有较粗的蛋白条带.用抗Aβ的单抗进一步分析发现,（10～25） ×103及80×103以上的条带可以被抗Aβ（17-24）单抗4G8识别,而80×103以上的条带还可以被Aβ寡聚体单抗识别,说明表达产物还形成了高相对分子质量的聚集体,位于80×103以上.间接ELISA结果表明CTFβ用于AD抗体检测的最佳包被剂量是1 nv孔.结论 本研究成功表达和纯化了CTFβ,并鉴定了其单体和聚集体的免疫反应性,为其在AD检测中的应用提供实验依据.
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- 关键词：阿尔茨海默病原核表达
