刘靖华
- 作品数:12 被引量:67H指数:5
- 供职机构:中国人民解放军第一军医大学基础部全军休克微循环重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- TLR与天然免疫反应被引量:11
- 2001年
- 天然免疫是机体抵御病原微生物感染的第一道防线。首先机体要识别病原体然后才能做出防御性反应。目前发现 :Toll样受体家族成员在识别病原体并介导天然免疫反应中具有重要作用。TLR结构及功能的研究 。
- 刘靖华赵克森
- 关键词:TLR天然免疫
- 用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白被引量:13
- 2003年
- 目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。
- 李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇
- 关键词:P38结合蛋白靶蛋白
- 带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究被引量:10
- 2003年
- 采用点突变技术构建了带 6×His、Tat和Flag多个标记的pET HTF的质粒载体 ,利用基因重组技术构建pET HTF EGFP融合蛋白载体 .酶切和DNA测序证明 ,所构建的pET HTF和pET HTF EGFP载体正确 .BL2 1(DE3)表达融合蛋白 ,用Ni2 + 分离柱纯化His Tat Flag EGFP蛋白 ,并加入培养的NIH3T3细胞 .荧光显微镜观察显示 ,His Tat Flag EGFP融合蛋白进入细胞 .带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET 14b HTF表达的融合蛋白能够进入细胞 。
- 孙学刚宋革刘靖华李红乐邢飞跃张丽华秦清和姜勇
- 关键词:质粒载体融合蛋白细胞增强型绿色荧光蛋白蛋白转导
- 用T7噬菌体筛选系统筛选TLR4胞浆内段的结合蛋白
- 为了研究hTLR4的功能及筛选与其相互作用的蛋白,以hTLR4胞浆内段为靶蛋白,通过结合→洗脱→扩增3个步骤,用T7噬茵体展示筛选系统筛选了人肺cDNA文库,结果获得了9个与靶蛋白hTLR4C有结合关系的序列,其中6个克...
- 刘靖华赵克森姜勇李志杰刘亚伟赵善超黄浩龚小卫秦清和邓鹏孙学刚
- 关键词:TOLL样受体4蛋白质相互作用噬菌体结合蛋白
- 文献传递
- 人Toll样受体4胞浆内段融合蛋白表达载体的构建与表达被引量:3
- 2003年
- 目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。
- 刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇
- 关键词:TOLL样受体融合蛋白蛋白表达
- 信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达被引量:1
- 2003年
- 目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达。结果DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确;酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确,TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上。结论所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的,pECFP-C1-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上,可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究。
- 孙学刚宋革刘靖华安海燕李红乐邢飞跃张丽华姜勇
- 关键词:荧光共振能量转移信号肽细胞膜
- TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定被引量:1
- 2004年
- 制备脂多糖 (LPS)Toll样受体 4 (TLR4 )全长及其胞内段缺失的TLR4截断体 (ΔTLR4 )的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能 .用PCR方法扩增TLR4及ΔTLR4基因片段 ,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack TLR4和pAdTrack ΔTLR4 .用BJ5 1 83细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体中 ;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后 ,用脂质体法转染HEK 2 93细胞进行腺病毒的包装扩增 .将重组腺病毒感染CHO K1细胞 ,采用荧光毒酶报告基因方法检测其对LPS诱导NF κB激活的影响 .酶切及测序表明 ,TLR4全长及其截断体ΔTLR4的重组腺病毒载体构建正确 .荧光素酶报告基因检测结果表明 ,TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染细胞对LPS诱导的反应具有不同的影响 ,Ad ΔTLR4明显抑制了LPS引起的NF κB激活 (P <0 0 5 ) ,Ad TLR4则使LPS引起的NF κB活性增强 (P <0 0 5 ) .
- 宋革孙学刚秦清和邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词:腺病毒报告基因NF-KB
- Toll样受体4与心血管疾病被引量:2
- 2003年
- Toll样受体是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体 ,在天然免疫反应中具有重要的作用。TLR4是介导LPS信号跨膜转导的主要受体 ,对于革兰氏阴性菌的感染性炎症至关重要。由于心血管疾病的发生和发展与感染密切相关 ,近来 ,有关TLR4及其介导的信号转导在心血管疾病发病中的作用受到人们的关注。深入研究TLR4在心血管疾病中作用 ,不仅能极大地扩展我们对病原体与宿主免疫反应之间相互作用复杂性的认识 ,更能为进一步揭示心血管疾病的发病机制 ,寻求有效的防治措施提供重要的理论基础。
- 黄浩刘靖华姜勇
- 关键词:动脉粥样硬化病毒性心肌炎心力衰竭
- 人ARPC2基因的克隆与表达
- 2004年
- 目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中。对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36 000的融合蛋白。结论成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。
- 龚小卫彭毅刘靖华李志杰邓鹏秦清和姜勇
- 关键词:基因表达蛋白纯化
- 用T7噬菌体展示筛选系统筛选与靶蛋白相结合的蛋白被引量:1
- 2003年
- 刘靖华李志杰刘亚伟黄浩邓鹏秦清和赵善超赵克森姜勇
- 关键词:靶蛋白