李志杰
- 作品数：7 被引量：44H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学基础部全军休克微循环重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白被引量：13
- 2003年
- 目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。
- 李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇
- 关键词：P38结合蛋白靶蛋白
- 用T7噬菌体筛选系统筛选TLR4胞浆内段的结合蛋白
- 为了研究hTLR4的功能及筛选与其相互作用的蛋白,以hTLR4胞浆内段为靶蛋白,通过结合→洗脱→扩增3个步骤,用T7噬茵体展示筛选系统筛选了人肺cDNA文库,结果获得了9个与靶蛋白hTLR4C有结合关系的序列,其中6个克...
- 刘靖华赵克森姜勇李志杰刘亚伟赵善超黄浩龚小卫秦清和邓鹏孙学刚
- 关键词：TOLL样受体4蛋白质相互作用噬菌体结合蛋白
- 文献传递
- 人Toll样受体4胞浆内段融合蛋白表达载体的构建与表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。
- 刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇
- 关键词：TOLL样受体融合蛋白蛋白表达
- 人ARPC2基因的克隆与表达
- 2004年
- 目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中。对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白。结果所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36 000的融合蛋白。结论成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料。
- 龚小卫彭毅刘靖华李志杰邓鹏秦清和姜勇
- 关键词：基因表达蛋白纯化
- 人晚期糖基化终产物受体胞质内段融合蛋白表达载体的构建与表达被引量：7
- 2003年
- 目的构建人晚期糖基化终产物受体胞质内段(hRAGE-C)GST融合蛋白的重组原核基因表达载体并进行表达与纯化,研究其功能并鉴定与其相互作用的蛋白。方法采用PCR方法扩增hRAGE基因编码区的胞质内段,并将其重组于pGEX-KG载体中。重组质粒经PCR、酶切、序列鉴定分析后,转化大肠杆菌BL21,以异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导产生hRAGE胞质内段的GST融合蛋白。结果PCR、酶切和测序结果表明所克隆的GST/hRAGE-C原核表达载体完全正确,继而表达、纯化获得了相对分子质量约35 000的融合蛋白(符合预期大小)。结论将hRAGE胞质内段构建于含有GST标记的载体上并获得融合蛋白的高效表达。
- 赵善超刘靖华刘靖华李志杰秦清和邓鹏侯凡凡
- 关键词：融合蛋白基因表达
- 用T7噬菌体展示筛选系统筛选与靶蛋白相结合的蛋白被引量：1
- 2003年
- 刘靖华李志杰刘亚伟黄浩邓鹏秦清和赵善超赵克森姜勇
- 关键词：靶蛋白
- Toll样受体的发现及其研究进展被引量：22
- 2003年
- 李志杰刘靖华姜勇
- 关键词：TOLL样受体内毒素信号转导
