曾应
- 作品数：6 被引量：41H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 相关领域：化学工程生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 一种利用基因重组技术制造丙酰螺旋霉素的方法
- 本发明涉及利用基因工程技术制造丙酰螺旋霉素的方法，首先建立麦迪霉素产生菌的基因文库，用碳霉素产生菌4″异戊酰基转移酶基因为探针，从麦迪霉素产生菌基因文库中获得麦迪霉素4″酰基转移酶基因的重组质粒，再转入螺旋霉素产生菌。获...
- 王以光金莲舫曾应余兰香
- 文献传递
- 产生变活霉素的变株的分离与初步鉴别被引量：2
- 1992年
- 对天然无抗菌活性的链霉菌1254菌株进行诱变,获得了二株有抗菌话性的变株。变株113产生的抗生素为一组新蒽环类化合物,有抗病毒活性,定名为变活霉素。变株2-6产生碱性水溶性物质。初步实验结果表明,原株1254及变株2-6均是胞壁类型Ⅰ,为链霉菌属。变株113为胞壁类型Ⅳ,不含有枝菌酸。原株1254与变株113的阻断变株共合成的产物与变活霉素相同,以放线紫红素聚酮合成酶基因 actI 为探针与原株1254的总 DNA 进行Southern 杂交为阳性。根据这二个实验的结果推断,在1254菌株中可能存在一条变活霉素的合成途径,但有的基因处于未表达状态,诱发突变使其被活化。
- 李焕娄吕婉瑜张月琴金文藻陶佩珍刘小普何依萍曾应
- 关键词：链霉菌
- 硫霉素生物合成酶基因克隆的研究被引量：7
- 1993年
- 利用NTG诱变从硫霉素产生菌中获得了生物合成阻断变株Y_3。通过对Y_3变株原生质体形成、再生条件及DNA转化的研究,初步建立了以变株为受体的克隆系统,以pIJ680为载体,从硫霉素产生菌S.cattleya中鸟枪克隆,获得了能使Y_3变株恢复产生硫霉素的酶基因。根据对Y_3积累的中间产物的分析,认为该酶基因可能与硫霉素生物合成过程中肽的环化作用有关。重组质粒分子大小为9.8kb左右,插入片段大小为4.5kb,分子杂交试验证明插入片段来源于硫霉素产生菌S.cattleya。
- 李戎锋王以光曾应
- 关键词：生物合成酶基因基因克隆
- 麦迪霉素4″酰化酶基因的克隆及在螺旋霉产生菌中的表达被引量：27
- 1992年
- 从含麦迪霉素生物合成基因的初级克隆pCN6C5中,发现并分离了麦迪霉素4″酰化酶基因,与质粒载体p1J680相连,获得重组质粒p66B,在螺旋霉素产生菌中得到表达,其主要产物为4″异戊酰螺旋霉素。以p66B DNA BamHI-BamHI 2.3kb插入片段为探针,从麦迪霉素产生菌基因文库中获得了另一阳性克隆pCN10F5,Southern分子杂交确定pCN10F5 BamHI-BamHI 8.0kb为同源片段。以pWHM3及pIJ680为载体,获得重组质粒pWF5及p6F5,分子大小分别为15.2kb及13.3kb。通过DNA转化,并经分子杂交实验证明,获得含重组质粒的螺旋霉素产生菌克隆菌株。其主要产物经分离、纯化后,分析其理化性质和光谱数据,鉴定为丙酰螺旋霉素Ⅲ和Ⅱ。研究还表明,麦迪霉素基因文库中只有pCN10F5 DNA与碳霉素产生菌的4″异戊酰化酶基因同源,提示pCN6C5克隆携带的麦迪霉素4″酰化酶基因与pCN10F5的4″丙酰化酶基因及碳霉素4″异戊酰化酶基因有一定的区别。
- 王以光金莲舫金文藻张秀华曾应徐小敏姚军
- 关键词：麦迪霉素酰化酶基因产生菌
- 全文增补中
- 一种利用基因重组技术制造丙酰,乙酰螺旋霉素的方法
- 本发明是利用基因重组技术，使麦迪霉素4″-酰基转移酶基因在螺旋霉素产生菌中得到表达。经过对表达产物理化性质的分析，证实该基因工程菌产生4″-丙酰螺旋霉素III，4″-丙酰螺旋霉素II，4″-乙酰螺旋霉素III的4″-乙酰...
- 王以光金莲舫曾应余兰香
- 文献传递
- 基因工程丙酰螺旋霉素被引量：9
- 1994年
- 以碳霉素４″异戊酰基转移酶基因（ｃａｒＥ）为探针，从麦迪霉素产生菌基因文库中，经菌落杂交获得阳性菌落ｐｃＮ１０Ｆ５。经分子杂交证明ｐｃＮ１０Ｆ５ＤＮＡ的ＢａｍＨ１－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ片段与ＣａｒＥ基因同源。将ｐＣＮ１０Ｆ５ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨ１８．０ｋｂ片段分别克隆到ｐＩＪ６８０、ｐＷＨＭ３、ｐＷＨＭ６０１质粒载体上，获得重组质粒ｐ６Ｆｓ、ｐｗＦ５和ＰＧＦ５。含上述重组质粒的螺旋霉素产生菌克隆菌株均产生与丙酰螺旋霉素相类似的产物，且以ｐＩＪ６８０为载体的克隆菌株产生丙酰螺旋霉素的比例最高，最稳定。含ｐ６Ｆ５克隆菌株的发酵产物经提取、纯化后，进行理化性质及各种光谱数据的分析，证明其主要产物为丙酰螺旋霉素Ⅲ及Ⅱ。分子杂交实验证明螺旋霉素产生菌克隆菌株中，确实含有ｐ６Ｆ５ＢａｍＨＩ－ＢａｍＨＩ８．０ｋｂ片段。经分子杂交、亚克隆及基因表达实验，将麦迪霉素４″羟基丙酰基转移酶基因，定位于ＥｃｏＲＩ－ＥｃｏＲＩ－ｐｓｔＩ的２．６ｓｋｂ片段上。核昔酸序列分析结果显示该基因由１１６４个核昔酸组成，Ｇ＋Ｃ％为７０．ｏ％，ＳＤ序列为ＧＡＧＧＴ，起始密码为ＡＴＧ，终止密码为ＴＧＡ，共编码３８８个氨基酸残基，蛋白的分子量为４２．?
- 王以光金莲舫徐小敏张叙伦曾应
- 关键词：基因工程抗生素
