杨巍
- 作品数：16 被引量：88H指数：5
- 供职机构：东北农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 骨桥蛋白与骨质疏松症研究进展被引量：1
- 2011年
- 骨桥蛋白作为一种新的细胞因子和趋化因子,在人体中发挥着重要作用,特别在骨代谢中作用尤为明显。骨桥蛋白可能刺激成骨细胞增殖、钙化,促进破骨细胞与骨基质的黏附并提高破骨细胞的溶骨活性,刺激骨吸收及骨重建,增加骨吸收陷窝的数量和面积,并抑制骨组织的矿化过程。
- 马雪莹杨巍刘宁
- 关键词：骨桥蛋白骨质疏松症
- 一种大田土壤多点温度远程监测系统
- 一种大田土壤多点温度远程监测系统属于远程数据采集监测系统；所述系统由前端数据采集系统和数据存储分析处理服务器组成，所述前端数据采集系统包括北斗/GPS授时定位模块、供电模块、中央处理控制模块、R485数据总线、GPRS通...
- 谷思玉张会慧毕武杨巍李鑫李悦郭兴军蔡越桐
- 文献传递
- 影响大肠杆菌不耐热肠毒素2型毒性的氨基酸初步筛选
- 2022年
- 为探究影响产肠毒素大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素2型(LT2)毒性的关键氨基酸及其突变重组蛋白的免疫原性,本研究扩增了LT2编码基因elt2,并采用重叠延伸PCR(SOE PCR)方法分别对其A亚基进行R5K、H42A、S59K、V95K、Y102K和E110K的单突变,将elt2及其6个突变基因分别双酶切后克隆于pET-30a中构建重组大肠杆菌pET-30a-elt2/BL21、pET-30a-R5K/BL21、pET-30a-H42A/BL21、pET-30a-S59K/BL21、pET-30a-V95K/BL21、pET-30a-Y102K/BL21、pET-30a-E110K/BL21,经IPTG诱导表达了重组LT2(rLT2)及其突变重组蛋白mrLT2-R5K、mrLT2-H42A、mrLT2-S59K、mrLT2-V95K、mrLT2-Y102K、mrLT2-E110K;利用细胞毒性试验和小鼠致病性试验比较了rLT2和突变重组蛋白对小鼠肾上腺皮质瘤(Y1)细胞的毒性作用及对小鼠的致病性,并将rLT2和mrLT2-V95K作为免疫原接种小鼠检测其对小鼠的免疫原性。结果显示,突变重组蛋白对Y1细胞的毒性作用均弱于rLT2,其中mrLT2-V95K对Y1细胞的毒性作用最弱为1.145×10^(1)TCID_(50)/0.1 mL;rLT2及该突变重组蛋白对小鼠均无致病性,表明小鼠也不适合用于LT2的致病性检测。mrLT2-V95K免疫BALB/c小鼠的血清特异性IgG抗体效价和对rLT2的中和抗体效价分别为1:102 400和1:32,与rLT2的免疫原性无显著差异。本研究首次证实LT2 A亚基的aa95对LT2细胞毒性作用的影响较明显,其突变重组蛋白具有良好的免疫原性,为大肠杆菌减毒疫苗研究提供了重要科学信息。
- 石博侯美佳孙思萌刘嘉利董秀梅杨巍杨巍师东方
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌定点突变重组蛋白免疫原性
- 猪流行性腹泻病毒S1蛋白亲和肽的筛选与鉴定
- 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种猪的急性、高度接触性肠道传染病。自1978年报道以来在欧洲以及亚洲许多国家相继爆发,给养猪业带来巨大损失,因此对于PED的诊断以及疫苗的研究就显得尤为重要。...
- 杨巍
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S1蛋白
- 猪流行性腹泻病毒N基因的克隆及原核表达被引量：16
- 2011年
- 从患猪流行性腹泻的病猪粪便中分离了猪流行性腹泻病毒(PEDV)命名为HLJBY,将病毒在Vero细胞上传代,使之适应生长。将扩增的猪流行性腹泻病毒的N基因克隆到原核表达载体PET30a上,构建了重组表达质粒PET-30a-PEDV-N,并在37℃的条件下诱导表达,通过不同时间取样,经SDS-PAGE分析结果表明,该蛋白获得了高效的表达。将PEDV在Vero细胞上大量繁殖后经超离纯化,作为免疫原制备兔抗PEDV的多克隆抗体血清。Western-blot结果表明蛋白与多抗血清具有良好的免疫反应性。
- 杨巍李广兴孟凡丹王鑫任晓峰
- 关键词：PEDVN基因原核表达N蛋白
- 鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究
- 2015年
- 试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。
- 李广兴李兰兰潘龙洪琴张恒杨巍黄小丹马德星张瑞莉杨贵君
- 关键词：多克隆抗体间接免疫荧光
- A型塞内卡病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
- 2024年
- 为建立一种快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,本研究利用氯化铯密度梯度离心法纯化的SVA粒子免疫BALB/c小鼠3次,采用杂交瘤技术制备SVA单克隆抗体(MAb)。结果显示,共获得7株能够稳定分泌SVA MAb的杂交瘤细胞株。采用过碘酸钠法将其中5株MAb标记HRP(MAb-HRP),并采用ELISA法检测标记效果。将7株MAb与5株MAb-HRP两两组合进行抗体配对试验。结果显示,5株MAb均标记上HRP,且其中各稀释度标记的MAb 2C8-HRP的反应性均最强;当MAb 2G7作为捕获抗体,MAb 2C8-HRP作为检测抗体时,P/N值最大,表明这两种MAb的配对效果最好。在此基础上,通过优化各反应条件初步建立检测SVA的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)方法。利用建立的DAS-ELISA方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、O型和A型口蹄疫病毒和SVA,结果显示,该方法仅能检测SVA,其他常见的猪源病毒均为阴性结果,表明该方法特异性强。利用本研究建立的DAS-ELISA方法分别检测系列稀释的SVA上清液(1~1:80000,对应的病毒滴度分别为107.5TCID50/mL~1.25×10^(2.5)TCID_(50)/mL)和2倍倍比稀释的SVA猪阳性猪血清(1:2~1:256),同时采用猪塞内卡病毒抗原(SVA-Ag)ELISA试剂盒分别检测上述SVA上清液和SVA猪阳性血清,评估本研究建立DAS-ELISA方法的敏感性。结果显示SVA稀释40000倍后,其OD450nm值仍大于临界值0.115,即该方法对SVA上清液的检测限为2.5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且1:64倍稀释的SVA猪阳性血清样品仍为阳性;(SVA-Ag)ELISA结果显示,该方法检测的SVA最大稀释度为1:20000,即对SVA上清液的检测限为5×10^(2.5)TCID_(50)/mL,且仅能检测到稀释至32倍的SVA猪阳性血清,均低于本实验建立的DAS-ELISA方法,表明该方法敏感性高。对4份SVA猪阳性血清和1份SVA猪阴性血清采用DAS-ELISA方法进行批内和批间
- 周函蓉苏世博孙明霞蒙靓杨巍史鑫琪李鑫安同庆蔡雪辉王海伟孟凡丹
- 关键词：单克隆抗体
- 牛乳骨桥蛋白诱导破骨细胞γ-H2AX焦点的形成
- 2012年
- 文章探讨了牛乳骨桥蛋白(bovine Osteopontin,bOPN)是否可引起大鼠破骨细胞(Osteoclasts,OC)γ-H2AX焦点的形成的可能性。采用全骨髓培养法培养破骨细胞,用bOPN处理破骨细胞,MTT比色法测定bOPN对破骨细胞的增殖影响,应用免疫荧光试验检测细胞核内DNA双链断裂(γ-H2AX焦点)的形成。在细胞增殖实验中,bOPN 100μg.mL-1浓度组在24 h较对照组差异显著(P<0.05);100μg.mL-1浓度组在72 h较对照组差异极显著(P<0.01);在免疫荧光试验中,1、10、100和1 000μg.mL-1处理组都可以使OC形成焦点,尤其1 000μg.mL-1处理组时数量虽不多,强度却明显增加。总之bOPN可使H2AX磷酸化,进而诱导γ-H2AX焦点的形成。
- 马雪莹杨巍刘宁
- 关键词：破骨细胞荧光检测
- 一株c基因型牛副流感病毒3型病毒的分离鉴定
- 2023年
- 从黑龙江省某牛场当中患有呼吸系统疾病的病牛鼻拭子中分离到一株病毒,该病毒在MDBK细胞上能够产生典型的病变。经免疫荧光鉴定表明成功分离到一株牛副流感病毒3型,命名为HLJ1。将病毒的M基因与GenBank中已发表BPIV3毒株的M基因进行同源性比较及系统进化分析,结果表明HLJ1与BPIV3c型参考毒株NX49的同源性最高为99.7%,因此HLJ1分离株属于c基因型BPIV3。我们的结果将为牛副流感病毒3型检测试剂盒及疫苗的研发工作奠定基础。
- 杨巍蒋磊董秀梅
- 关键词：系统进化分析C基因型
- 乳铁蛋白的生物学活性被引量：6
- 2011年
- 乳铁蛋白是一种黏膜分泌物铁结合糖蛋白。几十年来大量研究表明乳铁蛋白是种具有多功能的蛋白,有着多种的生物活性。分析了乳铁蛋白的氨基酸组成、多肽链折叠、铁结合结构、分子表面特性等与抗菌有关的分子结构。报道了乳铁蛋白具有抗病毒、抗真菌和抗寄生虫活性等方面的广泛应用。
- 杨巍马雪莹王晓宇
- 关键词：乳铁蛋白分子结构生理功能
