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徐逸飞: 作品数：12 被引量：31H指数：4; 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>; 发文基金：四川省科技支撑计划“十二五”国家科技计划农村领域国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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猪流行性腹泻病毒与圆环病毒2型复合PCR方法的建立被引量：2: 2017年; 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)在腹泻仔猪中的感染状况,建立一种能同时检测PEDV与PCV2混合感染的复合PCR方法。根据Gen Bank已发表的PEDV、PCV2的基因序列,选择保守区域分别设计、合成1对特异性引物,扩增目的片段分别为530和278 bp。经反应条件优化,建立了特异性检测PEDV、PCV2的复合PCR方法。应用本试验所建复合PCR方法,对2016年4—8月采自四川省乐山、宜宾、广元和遂宁等地区的67份腹泻仔猪样品(肠系膜淋巴结、肠道黏膜及其内容物混合)进行检测。结果显示:PEDV、PCV2单一感染阳性率分别为34.33%、73.13%;PEDV+PCV2复合感染率为16.42%。经与特异性检测PCV2的PCR法和PEDV的RT-PCR法检测结果进行比较分析,符合率均为100%。; 龚双燕李小璟陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞朱玲徐志文; 关键词：流行性腹泻病毒圆环病毒2型复合PCR

塞内加谷病毒3C蛋白生物信息学分析及真核质粒构建表达被引量：3: 2019年; 3C蛋白是塞内加谷病毒重要的非结构蛋白之一,在病毒入侵机制及影响宿主抗病毒天然免疫方面发挥重要作用。试验应用Oligo 7.0和Primer 6.0软件,用BLAST对比SVV世界参考株,设计一对特异性引物。以SVV-SN株病毒液抽提RNA为模板,将序列连接pMD19-T载体后测序,对正确片段作生物信息学分析可知SVV 3C可编码一个较稳定非分泌型蛋白,具有一个保守“催化三联体”。预测发现该蛋白具有16个磷酸化位点,证明其较高活性,预测其二级结构后得到再次证实。将pMD19-SVV-3C和真核表达载体pcDNA3.1(+)双酶切后连接,重组质粒经鉴定后命名为pcDNA3.1(+)-SVV-3C。将pcDNA3.1(+)-SVV-3C转染到BHK-21细胞24 h后制样作Western blotting,成功验证该重组质粒可在BHK-21中真核表达。相比其他同科病毒,当前SVV 3C蛋白研究存在空白。文章旨在为进一步研究SVV 3C蛋白结构提供理论依据,为后续探索SVV 3C蛋白对于宿主作用机制奠定基础。; 陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：生物信息学分析真核表达

浅谈猪链球菌病临床案例防控体会被引量：1: 2015年; 通过流行情况、临床特征、剖检变化初步诊断贵阳某猪场的发病猪为链球菌感染,根据病原检测、细菌分离结果确定本次疫情为蓝耳病病毒、圆环病毒及猪链球菌的混合感染,且猪链球菌为直接致病病原。本文根据药敏试验结果提出治疗意见,并作出防控方案,最后分析临床案例总结了自身的防控体会。; 徐逸飞; 关键词：猪链球菌剖检

猪圆环病毒病的危害及其防控被引量：6: 2015年; 猪圆环病毒病是猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪的一系列疾病的总称。猪圆环病毒2型(PCV2)主要通过感染猪的淋巴细胞导致严重的免疫抑制,从而易继发或并发其他传染病。PCV2是危害养猪业的重要病原,受到国内外学者的高度重视。通过对目前猪圆环病毒病对临床生产的危害进行综述,并提出一些防控措施。; 徐逸飞刘樱邱春霞覃娟娟张洋瑞付洪波吴成龙陈荣吴开波; 关键词：猪圆环病毒病

四川地区一株猪塞内加谷病毒的分离鉴定及VP1基因的序列分析: 2019年; 猪塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)是一种新出现的小RNA病毒科病毒,感染该病毒的猪群,尤其是仔猪可能出现严重的病理症状甚至死亡。2015年之前,该病毒主要流行于美国、加拿大及巴西等地区,并于2015年3月传入中国[1],给养猪业带来了严重的经济损失。2018年2月,本实验室检测并收集了阳性病料,采用PK-15细胞对病料进行病毒分离,并通过观察细胞CPE(细胞病变效应)、RT-PCR扩增和VP1基因序列测定进行鉴定。结果显示,成功分离到四川地区第一株SVV并将其命名为CH-MS-2018。对VP1基因的扩增测序及序列分析结果表明,本次分离得到的CH-MS-2018株VP1基因与GenBank上分别于2015年分离的2株和2016年分离的3株美国株的亲缘关系较近,同源性为98.6%。而与最早分离的SVV原始株关系较远,仅为88.0%~89.8%。本研究结果为进一步探索四川地区SVV的生物学性质奠定了基础。; 陈瑛琪蔡瑶龚双燕李小璟李雨濛李幽幽徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：VP1基因

猪传染性胃肠炎病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用被引量：6: 2017年; 为了提高初乳中猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的检出率,避免初生仔猪受到带毒初乳的危害,建立了一种SYBR GreenⅡ荧光定量PCR(qPCR)检测方法。根据Gen Bank已发表的TGEV的N基因序列,选择保守区域设计、合成了1对特异性引物,扩增TGEV的N基因片段(174 bp),构建含有N基因片段的重组质粒,以重组质粒作为模板建立了特异性检测TGEV的qPCR检测方法。该方法的灵敏性比普通PCR方法高,应用建立的qPCR检测方法,对2016年10月-2017年4月采集自四川省部分地区腹泻猪场的母猪初乳130份进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较。结果显示:用qPCR方法检测,130份样本中有13份为TGEV阳性,而普通PCR方法只检测到5份TGEV阳性样本。说明qPCR检测方法的敏感性高于普通PCR方法,更适合用于猪初乳检测。; 龚双燕李小璟李幽幽陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒荧光定量PCR检测初乳

一例猪轮状病毒和圆环病毒2型混合感染的案例报道: 2017年; 2017年6月,四川省绵阳市某猪场仔猪出现渐进性消瘦、严重腹泻、呕吐、部分病猪死亡等临床症状,采集发病猪的肠道、淋巴结等样品,应用PCR、RT-PCR方法进行实验室检测。结果表明,该猪场为猪轮状病毒(Po RV)和猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染。通过采取综合防控措施,病情得到有效控制,减少了该猪场的经济损失。; 龚双燕李小璟李幽幽陈瑛琪蔡瑶李雨濛徐逸飞徐志文朱玲; 关键词：猪轮状病毒猪圆环病毒2型

伪狂犬病毒UL12基因的克隆、表达及其相关功能研究: 伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)作为猪的一种重要病原体,在全球广泛传播。长期以来,PRV受到兽医学家、病毒学家以及神经生物学家的广泛关注及研究,目前对PRV的研究已经为疱疹病毒发病机制提供了相当...; 徐逸飞; 关键词：伪狂犬病毒真核表达; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪流行性腹泻病毒双重RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：6: 2017年; 为快速简便地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV),根据GenBank中已发布的基因序列,选择PRRSV的ORF7基因和PEDV的S基因,分别设计1对特异性引物,通过对反应体系中各成分的优化,建立了可同时检测PRRSV和PEDV的双重RT-PCR方法。本方法能从PRRSV和PEDV的混合基因组中分别扩增出300 bp和578 bp的特异性片段,且对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、乙型脑炎病毒、轮状病毒、大肠杆菌的扩增结果均为阴性;应用该方法对采自成都周边的79份临床样品进行检测,结果与单一RT-PCR的检测结果一致,具有良好的重复性;本方法检出的最小拷贝数为1.49×10~5copies/μL,敏感性也较好。本研究建立的双重RT-PCR方法具有较好实用性,可用于临床样品的检测。; 李小璟龚双燕陈瑛琪李雨濛蔡瑶徐逸飞朱玲徐志文; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪流行性腹泻病毒 ORF7基因 S基因双重RT-PCR

猪细小病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：3: 2015年; 为研究miRNA在猪细小病毒（PPV）复制中的作用机制,针对PPV的NS1基因设计引物,建立了实时荧光定量PCR;用RegRNA软件和RNAhybrid软件预测能靶向PPV基因组的miRNA,将筛选出的miR-34a与miR-181a、miR-16、miR-499-5p、miR-10b、miR-18a、miR-145-5p分别转染到PK-15细胞,然后用PPV感染细胞,每隔12h取细胞上清,用实时荧光定量PCR检测PPV的DNA拷贝数。结果显示,实时荧光定量PCR的最适退火温度为59℃,熔解温度在85℃左右,质粒浓度在1.59×10^9~1.59×10^4 copies/μL时可得到较为理想的标准曲线,相关系数为0.997,扩增效率为97.2%。用该实时荧光定量PCR对日本脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型进行检测时均无荧光信号,表明具有良好的特异性。转染不同miRNA的细胞感染PPV后,用建立的实时荧光定量PCR检测发现miR-34a能抑制PPV的复制,其他miRNA对PPV增殖无明显影响。; 徐逸飞李萍李新琼郎巧利杨凡周桐枫周远成徐志文朱玲; 关键词：猪细小病毒 MIRNA NS1基因

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