黄建芳
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目广西科技基础条件平台建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生电子电信更多>>
- 广西巴马小型猪miR-181b慢病毒表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2016年
- 本试验旨在构建广西巴马小型猪miR-181b慢病毒表达载体,以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,利用PCR扩增miR-181b前体序列,构建重组质粒p LV-miR-181b,经PCR和测序鉴定,阳性重组质粒转染C2C12细胞,荧光倒置显微镜下检测转染效率。结果显示,miR-181b前体序列长度为377 bp,与预期片段序列长度一致。将鉴定为阳性的miR-181b重组质粒转染C2C12细胞48 h后,在荧光显微镜下检测到较强的绿色荧光蛋白的表达,说明重组miR-181b质粒在C2C12细胞中具有较高的表达活性。本研究成功构建了具有高表达活性的miR-181b重组慢病毒表达载体,为研究miRNA-181b调控骨骼肌生长发育的功能机制提供实验基础。
- 吴敏黄建芳徐文文程晓芳郭晓萍杨秀荣郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪慢病毒载体骨骼肌
- 广西巴马小型猪GK基因真核表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2015年
- GK基因在糖尿病的发生中具有重要功能,本研究旨在构建广西巴马小型猪GK基因真核表达载体,为生产转GK基因的广西巴马小型猪奠定一定基础。以广西巴马小型猪肝脏组织为材料,通过RT-PCR的方法扩增并克隆猪GK基因的编码序列,并进行生物信息学分析,并将GK基因亚克隆至p EGFP-N1载体上,构建含有GK基因的真核表达载体p EGFP-N1-GK,经过PCR和双酶切的验证,通过脂质体转染,将重组质粒p EGFP-N1-GK转染猪的PK15细胞,48 h之后通过荧光显微镜观察细胞荧光蛋白的表达。研究结果表明广西巴马小型猪GK基因编码区序列长1 575 bp长的片段,共编码524个氨基酸,与Pubmed中查询到的猪(FJ436399.1)的GK基因同源最高,序列比对发现,在461 bp和534 bp处都发生了C-T的碱基突变,只有461 bp位点的突变引起相应编码氨基酸的变化,成功构建p EGFP-N1-GK真核表达载体,并在PK15细胞中成功转录表达。为进一步研究葡萄糖激酶基因(GK)与糖尿病之间的关系,以及生产转GK基因的广西巴马小型猪奠定基础。
- 鄢胜飞黄建芳郭晓萍蒋钦杨郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪糖尿病真核表达载体
- 广西巴马小型猪近交群体的遗传结构分析被引量：3
- 2015年
- 本研究以33头广西巴马小型猪为研究对象，利用19个微卫星标记，通过估算其等位基因数（N）、多态信息含量（PIC）和近交系数（F）等参数，对广西巴马小型猪近交群F10～F15世代进行了遗传学检测。试验结果显示，19个微卫星座位上共检测到31个等位基因，其中F10F15分别具有27、29、28、27、26和25个等位基因，平均每个位点分别仅有1．42、1．53、1．47、1．42、1．37和1．32个等位基因；6个世代群体平均多态信息含量为0．1044。广西巴马小型猪F10～F15世代的平均近交系数分别为0．8070、0．8263、0．8491、0．8710、0．8904、0．9118。结果表明，广西巴马小型猪近交群体的基因多态性低、近交程度高，是一个遗传性稳定的群体。
- 黄建芳李小楷蒋钦杨郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪微卫星近交系
- 广西巴马小型猪miR-423-5p基因慢病毒载体构建和鉴定及其在骨骼肌中的表达被引量：1
- 2015年
- 本试验的目的在于检测广西巴马小型猪骨骼肌中mi R-423-5p基因的表达情况及构建p LV-mi R-423-5p慢病毒载体并在C2C12细胞中进行验证。通过q RT-PCR方法检测背最长肌中mi R-423-5p的表达,设计特异性引物对mi R-423-5p基因的前体序列进行扩增并定向克隆到慢病毒载体p LV-CMV-mcs-3xflag-EF1-GFP(p LV)上,鉴定正确的重组质粒用脂质体转染法转染进C2C12细胞,q RT-PCR检测mi R-423-5p的表达情况。结果表明广西巴马小型猪背最长肌中mi R-423-5p的表达水平随着月龄的增长而不断上升,同时成功构建了p LV-mi R-423-5p慢病毒载体。该项研究为进一步寻找mi R-423-5p基因调控骨骼肌生长发育的机制提供理论基础,对肉质性状分子改良提供有益的线索。
- 黄建芳吴敏程晓芳徐文文吴延军蒋钦杨杨秀荣郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪骨骼肌MI慢病毒载体
- 陆川猪热休克蛋白90基因的克隆与序列分析被引量：5
- 2015年
- 【目的】对陆川猪热休克蛋白90(HSP90)基因进行克隆与序列分析,为研究HSP90与陆川猪抗热应激的相关性及寻找猪耐热性分子标记奠定基础。【方法】根据Gen Bank已发表的猪HSP90基因序列(登录号NM_213973.1)设计引物,RT-PCR扩增HSP90基因编码区序列,并应用Laser Gene、Meg Align等生物软件进行序列分析及蛋白质结构预测。【结果】克隆获得陆川猪HSP90基因编码区序列长2202 bp,编码733个氨基酸,分子质量84774.8 U,理论等电点4.93;与野猪的亲缘关系最近,其氨基酸同源性为100.0%,与牛、绵羊、人类、大猩猩的氨基酸同源性也在96.2%以上。陆川猪HSP90蛋白N端有1个HATPase_c superfamily保守结构域,C端最末端有一个MEEVD保守序列,氨基酸序列中存在5个HSP90家族特有保守信号区,其成熟肽包含有α螺旋、β转角、延长线和无规卷曲4种二级结构元件。【结论】猪HSP90基因高度保守,可作为研究陆川猪抗热应激的候选基因之一。
- 黄建芳鄢胜飞吴敏陈秋明周亭亭蒋钦杨郭亚芬兰干球
- 关键词：陆川猪HSP90基因克隆
- 广西巴马小型猪近交群体的遗传结构分析
- 本研究以33头广西巴马小型猪为研究对象,利用19个微卫星标记,通过估算其等位基因数(N)、多态性信息含量(PIC)和近交系数(F)等参数,对广西巴马小型猪近交群F10～F15世代进行了遗传学检测.试验结果显示,19个微卫...
- 黄建芳蒋钦杨郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪微卫星近交系
- 陆川猪HSP27基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2015年
- 为了研究陆川猪HSP27基因的遗传变异情况,试验采用RT-PCR和克隆方法,扩增了HSP27基因的编码区序列,并进行了测序和序列分析及其蛋白质结构预测。结果表明:陆川猪HSP27基因编码区全长624 bp,编码207个氨基酸;与Gen Bank中已发表的猪HSP27基因序列相比,核苷酸有1个位点发生碱基突变,但并未引起相应氨基酸的改变;陆川猪HSP27成熟肽包含α螺旋、β转角、延长线和无规卷曲;陆川猪HSP27基因与野猪的亲缘关系最近。
- 黄建芳吴敏严雪瑜吴延军郭晓萍蒋钦杨郭亚芬兰干球
- 关键词：陆川猪克隆编码区蛋白质二级结构同源性
- 广西巴马小型猪presenilin-1基因克隆及多态性分析被引量：2
- 2016年
- 本研究的目的是寻找广西巴马小型猪presenilin-1基因SNP位点,并确定各基因型频率。利用RT-PCR的方法扩增并克隆presenilin-1基因,通过测序和对比确定SNP位点,RFLP方法分析100头近交系和封闭群的广西巴马小型猪的基因组DNA,确定该突变位点的分布情况。结果显示,成功克隆广西巴马小型猪presenilin-1基因CDS区全长并确定T188C错义突变位点,SNP检测确定,在33头近交系中TT型占93.9%,TC型占6.1%;在67头封闭群中TT型占64.2%,TC型占35.8%,在封闭群和近交系中均未发现CC基因型。本研究成功验证了presenilin-1基因的SNP位点,为下一步研究presenilin-1基因T188C突变位点的功能奠定基础。
- 吴延军周亭亭黄建芳鄢胜飞廖必全韦春鲜杨小玲蒋钦杨兰干球郭亚芬
- 关键词：广西巴马小型猪SNP阿尔茨海默病
- 不同种属H1启动子驱动miR-1在PK15细胞中的表达情况
- 2015年
- 【目的】筛选出能高效表达外源性成熟miR-1的真核表达载体,为揭示miR-1参与猪肌肉发育及肉质性状形成的分子机制奠定基础。【方法】分别克隆巴马小型猪miR-1前体序列、H1启动子序列及人类H1启动子序列,并构建不同种属H1启动子驱动其表达的真核表达载体,利用脂质体法转染PK15细胞后,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测不同种属H1启动子表达载体驱动miR-1表达效率。【结果】经酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了3个miR-1过表达载体(pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1),以其转染PK15细胞24和48 h后,荧光显微镜观察发现绝大部分细胞都发出绿色荧光,且含有H1启动子细胞的荧光强于无H1启动子细胞。转染pEGFP-pH1-miR-1细胞、转染pEGFP-hH1-miR-1细胞、转染pEGFP-miR-1细胞的miR-1相对表达量分别为105.02、99.00和79.65,其miR-1表达水平均极显著高于转染pEGFP-C 1细胞和空白对照组细胞(P<0.01)。【结论】重组质粒pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1均能在PK15细胞中高效表达miR-1,即猪源与人源的H1启动子均能提高外源性miR-1表达,可用于后续的miR-1功能研究。
- 郭晓萍陈时锦蒋钦杨杨秀荣郭亚芬黄建芳兰干球
- 关键词：巴马小型猪MIR-1PK15细胞
