吴敏
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目广西科技基础条件平台建设项目广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 陆川猪热休克蛋白90基因的克隆与序列分析被引量：5
- 2015年
- 【目的】对陆川猪热休克蛋白90(HSP90)基因进行克隆与序列分析,为研究HSP90与陆川猪抗热应激的相关性及寻找猪耐热性分子标记奠定基础。【方法】根据Gen Bank已发表的猪HSP90基因序列(登录号NM_213973.1)设计引物,RT-PCR扩增HSP90基因编码区序列,并应用Laser Gene、Meg Align等生物软件进行序列分析及蛋白质结构预测。【结果】克隆获得陆川猪HSP90基因编码区序列长2202 bp,编码733个氨基酸,分子质量84774.8 U,理论等电点4.93;与野猪的亲缘关系最近,其氨基酸同源性为100.0%,与牛、绵羊、人类、大猩猩的氨基酸同源性也在96.2%以上。陆川猪HSP90蛋白N端有1个HATPase_c superfamily保守结构域,C端最末端有一个MEEVD保守序列,氨基酸序列中存在5个HSP90家族特有保守信号区,其成熟肽包含有α螺旋、β转角、延长线和无规卷曲4种二级结构元件。【结论】猪HSP90基因高度保守,可作为研究陆川猪抗热应激的候选基因之一。
- 黄建芳鄢胜飞吴敏陈秋明周亭亭蒋钦杨郭亚芬兰干球
- 关键词：陆川猪HSP90基因克隆
- 利用微卫星标记分析楼来牛群体遗传多样性的分析
- 2017年
- 利用POPGENE软件分析48头楼来牛在16个微卫星座位上遗传信息。通过分析楼来牛群体遗传多样性信息,目的是了解楼来牛群体的现状和遗传多样性,为利用分子标记进行楼来牛的选育提供理论依据。结果显示:16个座位中,平均有效等位基因数、平均期望杂合度、平均多态信息含量分别为:2.503 7、0.555 9、0.517 25。其中,9个微卫星座位高度多态,7个微卫星座位中度多态,选取的微卫星位点适合用于遗传多样性评估。研究表明楼来牛群体遗传多样性较为丰富。
- 徐文文潘能庆李芳芳蒋世强吴敏王国利李铭杨祝良苏惠梅贾银海杨秀荣蒋和生
- 关键词：微卫星标记杂合度多态信息含量
- 广西巴马小型猪miR-423-5p基因慢病毒载体构建和鉴定及其在骨骼肌中的表达被引量：1
- 2015年
- 本试验的目的在于检测广西巴马小型猪骨骼肌中mi R-423-5p基因的表达情况及构建p LV-mi R-423-5p慢病毒载体并在C2C12细胞中进行验证。通过q RT-PCR方法检测背最长肌中mi R-423-5p的表达,设计特异性引物对mi R-423-5p基因的前体序列进行扩增并定向克隆到慢病毒载体p LV-CMV-mcs-3xflag-EF1-GFP(p LV)上,鉴定正确的重组质粒用脂质体转染法转染进C2C12细胞,q RT-PCR检测mi R-423-5p的表达情况。结果表明广西巴马小型猪背最长肌中mi R-423-5p的表达水平随着月龄的增长而不断上升,同时成功构建了p LV-mi R-423-5p慢病毒载体。该项研究为进一步寻找mi R-423-5p基因调控骨骼肌生长发育的机制提供理论基础,对肉质性状分子改良提供有益的线索。
- 黄建芳吴敏程晓芳徐文文吴延军蒋钦杨杨秀荣郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪骨骼肌MI慢病毒载体
- 广西巴马小型猪ANK1基因启动子克隆及其活性分析被引量：1
- 2017年
- 【目的】克隆广西巴马小型猪ANK1基因启动子,确定其活性核心区,为研究ANK1基因启动子与肉质性状的相关性及构建动物疾病模型打下基础。【方法】通过在线软件对ANK1基因启动子的转录因子结合位点进行预测,根据转录因子结合位点设计特异引物扩增不同长度的ANK1基因启动子片段,并利用双荧光素酶试剂盒检测其荧光值,以确定不同ANK1基因启动子片段的活性。【结果】发现ANK1基因启动子存在1个转录起始位点(TSS)、2个Cp G岛和多个转录因子结合位点,并以此作为ANK1基因启动子的分段依据,将其分割为P638、P791、P1113、P1163、P1648、P1694、P1796和P2074等8个不同长度的目的片段。成功克隆获得的8个ANK1基因启动子片段经KpnⅠ和HindⅢ双酶切、T4真核表达载体连接、细胞转染等方法构建8个双荧光素酶重组报告基因,双荧光素酶试剂盒检测结果显示,广西巴马小型猪ANK1基因启动子在P1796片段活性最强,与其他片段存在显著差异(P<0.05)。【结论】成功克隆获得广西巴马小型猪ANK1基因启动子的8个片段,且利用双荧光素酶试剂盒检测确定其核心启动子区域出现在P1796片段。
- 李龙司景磊夏攀洁綦文晶龙开旭夏利何剑雄吴敏兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪启动子活性分析
- 广西巴马小型猪miR-181b慢病毒表达载体的构建和鉴定被引量：1
- 2016年
- 本试验旨在构建广西巴马小型猪miR-181b慢病毒表达载体,以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,利用PCR扩增miR-181b前体序列,构建重组质粒p LV-miR-181b,经PCR和测序鉴定,阳性重组质粒转染C2C12细胞,荧光倒置显微镜下检测转染效率。结果显示,miR-181b前体序列长度为377 bp,与预期片段序列长度一致。将鉴定为阳性的miR-181b重组质粒转染C2C12细胞48 h后,在荧光显微镜下检测到较强的绿色荧光蛋白的表达,说明重组miR-181b质粒在C2C12细胞中具有较高的表达活性。本研究成功构建了具有高表达活性的miR-181b重组慢病毒表达载体,为研究miRNA-181b调控骨骼肌生长发育的功能机制提供实验基础。
- 吴敏黄建芳徐文文程晓芳郭晓萍杨秀荣郭亚芬兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪慢病毒载体骨骼肌
- 不同浓度牛磺酸对高糖诱导的猪PK15细胞凋亡的影响及作用机制的研究
- 本研究的目的是探索牛磺酸(Tau)在细胞凋亡过程中的抗凋亡作用机制,筛选最佳保护浓度。通过在高糖诱导猪PK15 细胞凋亡的基础上,添加不同浓度的Tau,培养48h 后收集细胞。
- 李龙吴延军司景磊陈秋明吴敏兰干球郭亚芬
- 关键词：牛磺酸细胞凋亡荧光定量PCR糖尿病
- 陆川猪HSP27基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2015年
- 为了研究陆川猪HSP27基因的遗传变异情况,试验采用RT-PCR和克隆方法,扩增了HSP27基因的编码区序列,并进行了测序和序列分析及其蛋白质结构预测。结果表明:陆川猪HSP27基因编码区全长624 bp,编码207个氨基酸;与Gen Bank中已发表的猪HSP27基因序列相比,核苷酸有1个位点发生碱基突变,但并未引起相应氨基酸的改变;陆川猪HSP27成熟肽包含α螺旋、β转角、延长线和无规卷曲;陆川猪HSP27基因与野猪的亲缘关系最近。
- 黄建芳吴敏严雪瑜吴延军郭晓萍蒋钦杨郭亚芬兰干球
- 关键词：陆川猪克隆编码区蛋白质二级结构同源性
- 广西巴马小型猪Neuritin基因克隆与生物信息学分析及真核表达载体的构建被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在通过克隆广西巴马小型猪的Neuritin基因并进行生物信息学分析,为后续对Neuritin的研究奠定基础。实验成功获得Neuritin基因的编码区序列,并对Neuritin基因编码区序列和预测蛋白序列进行分析。结果表明,广西巴马小型猪的Neuritin基因编码142个氨基酸,其中含有2个磷酸化位点和2个跨膜信号结构以及1个结构保守域。通过双酶切技术成功获得重组质粒pEGFP-N1-Neuritin并转染到N2a细胞中,在24 h拍照发现N2a细胞发出荧光,证明Neuritin真核表达载体构建成功。
- 李龙司景磊夏攀洁何剑雄吴延军程晓芳吴敏徐文文兰干球
- 关键词：广西巴马小型猪
- 不同浓度牛磺酸对高糖诱导的猪PK15细胞凋亡的影响及其作用机制被引量：2
- 2015年
- 本研究的目的是探索牛磺酸(Tau)在细胞凋亡过程中的抗凋亡作用机制,筛选最佳保护浓度。在高糖诱导猪PK15细胞凋亡的基础上,添加不同浓度的Tau,培养48 h后收集细胞。提取细胞总RNA,实时荧光定量PCR,检测凋亡抑制基因Bcl-2,凋亡促进基因Bax以及Caspase-3的表达。结果显示:实验组细胞均发生不同程度的凋亡,但随着Tau浓度的增加凋亡程度逐渐减轻。荧光定量PCR显示Bax/Bcl-2比值随着Tau的增加逐渐降低,并且在牛磺酸浓度为20 mmol/L同时达到最低值,此时Caspase-3的表达也达到最低值。本研究成功验证了牛磺酸抗细胞凋亡的作用,并筛选出最佳保护浓度为20 mmol/L,为研究牛磺酸在糖尿病研究领域的应用提供依据。
- 吴延军李龙司景磊陈秋明吴敏兰干球郭亚芬
- 关键词：牛磺酸细胞凋亡荧光定量PCR糖尿病
