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曹增国: 作品数：14 被引量：21H指数：3; 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家科技支撑计划吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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马抗中东呼吸综合征冠状病毒特异性F(ab’)_2的制备被引量：1: 2019年; 目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)_2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,原核表达的MERS-CoV刺突蛋白S受体结合域(S-receptor binding domain,S-RBD)为抗原蛋白制备免疫亲和柱,提取制备抗原特异性IgG或F(ab’)_2。间接ELISA法检测各样品的活性,MERS假病毒中和试验检测样品的中和活性,BCA法测定样品的浓度,并计算收率。结果所制备的特异性IgG与特异性F(ab’)2的纯度分别为90. 1%和92. 8%,收率分别为8. 7%和3. 07%;在相同的浓度下,所制备的特异性IgG或F(ab’)_2的活性和中和活性均高于对照组中的血清总Ig G或总F(ab’)_2。结论成功制备了马抗MERS-CoV特异性IgG或F(ab’)_2,为建立更加安全与高效的抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2制备工艺奠定了基础。; 邱泊宁胡星星闫飞虎王翀崔健男盖微微盖微微王化磊曹增国王化磊夏咸柱; 关键词：冠状病毒病毒样颗粒免疫球蛋白

马抗埃博拉病毒病免疫球蛋白F(ab’)<Sub>2</Sub>及其制备方法: 本发明提供一种马抗埃博拉病毒病免疫球蛋白F(ab’)<Sub>2</Sub>及其制备方法，其是将同时表达扎伊尔型埃博拉病毒的GP和VP40两个基因的病毒样颗粒经灭活、纯化与免疫佐剂混合作为免疫原，通过多次免疫健康马匹，获...; 夏咸柱杨松涛赵永坤郑学星王化磊高玉伟金宏丽王铁成范泉水郑颖王承宇黄耕陈维金冯娜曹增国盖薇薇毕钰海闫飞虎李月涛王翀迟航; 文献传递

马尔堡病毒糖蛋白RBD基因的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2017年; 原核表达并纯化马尔堡病毒(Marburg virus,MARV)糖蛋白(glycoprotein,GP)受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白,并以此为抗原免疫家兔制备抗MARV-GP-RBD多克隆抗体。参照GenBank提供的MARV GP全基因序列,找到主要抗原表位区域,设计特异性引物,采用PCR方法扩增RBD基因,扩增产物经双酶切(EcoRⅠ/XhoⅠ)后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒pET-30a(+)-GP-RBD,转化BL21(DE3)感受态表达宿主菌,在不同条件下(时间、IPTG浓度、温度)诱导表达目的蛋白,并用His-Band N+柱进行亲和层析纯化;以纯化的重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。通过SDS-PAGE、Western blot和IFA鉴定重组蛋白的反应原性及免疫原性。结果显示:PCR扩增到长度为453bp的RBD基因片段;构建的重组质粒pET-30a(+)-GP-RBD经双酶切后得到与目的片段长度相同的特异性条带,测序结果显示没有突变;转化产物在培养7h、终浓度为0.4mmol/L IPTG和37℃条件下能够充分诱导目的蛋白表达,得到相对分子质量为25 000的重组蛋白,主要以包涵体形式存在,BCA试剂盒产量测定,每升诱导的重组菌可纯化约20mg纯度较高的目的蛋白;Western blot检测证实重组pET-30a(+)-GP-RBD蛋白能同时被抗His标签的单抗和兔源多抗识别并发生特异性反应,证明重组蛋白有良好的反应原性;IFA鉴定证实所制备的兔源多抗能够特异性识别表达MARV GP蛋白的重组杆状病毒rBacmid-GP-VP40,证明重组蛋白具有良好的免疫原性。结果表明:成功表达、纯化了MARV GP RBD蛋白,并完成了兔源多抗的制备,为MARV亚单位疫苗的制备和抗原、抗体检测方法的建立奠定基础。; 王琪盖微微闫飞虎冯娜吴芳芳赵梓淇曹增国李岭迟航金宏丽邱泊宁崔健男赵永坤王铁成高玉伟王化磊杨松涛夏咸柱; 关键词：马尔堡病毒多克隆抗体

扎伊尔型埃博拉病毒糖蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：3: 2018年; 针对扎伊尔型埃博拉病毒（Zaire Ebolavirus,ZEBOV）的糖蛋白（GP）基因（158-368aa）设计引物,将PCR扩增产物克隆至原核表达载体pET30a（＋）,在宿主菌BL21（DE3）中IPTG诱导表达。对诱导条件进行优化,纯化后的蛋白通过SDS-PAGE和Western blot鉴定正确后免疫BALB/c小鼠,二免后分离小鼠血清,制备多克隆抗体并进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,埃博拉病毒GP在大肠杆菌中以包涵体的形式成功表达,蛋白最佳诱导条件为37℃,0.4mmol/L IPTG诱导6h。经间接免疫荧光鉴定多克隆抗体可以识别重组杆状病毒rBacmid-GP。本研究成功表达并纯化埃博拉病毒GP,制备鼠多克隆抗体,为建立基于ZEBOV GP的检测方法和相关研究奠定了基础。; 吴芳芳曹增国王琪迟航金宏丽冯娜赵永坤高玉伟王化磊杨松涛夏咸柱; 关键词：埃博拉病毒原核表达多克隆抗体

西尼罗病毒糖蛋白第三结构域的原核表达及鉴定: 2016年; 根据西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)序列设计1对特异性引物,用PCR反应扩增糖蛋白第三结构域(WNVEDⅢ)基因,将PCR产物克隆至pGEX-4T-1原核表达载体上,获得重组表达质粒,将该质粒转化入E.coli DH5α,命名为pG-EDⅢ,鉴定正确后转入transetta表达菌中,经IPTG诱导后纯化重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blot方法证实WNV-EDⅢ基因可在大肠杆菌中高效表达,小鼠免疫试验证明该原核表达蛋白有良好的免疫原性。; 曹增国李岭王化磊金宏丽郑学星冯娜李倩赵国星闫飞虎赵永坤王铁成高玉伟杨松涛夏咸柱; 关键词：西尼罗病毒原核表达免疫原性

埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：3: 2016年; 为建立EBOV抗体间接ELISA检测方法,以纯化后的EBOV糖蛋白作为包被抗原,HRP标记山羊抗马IgG为二抗,EBOV阳性马血清和阴性马血清分别为阳、阴性对照,优化反应条件,以EBOV病毒样颗粒免疫获得的高免马血清评价其特异性和敏感性,并将检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相比较,进一步评价EBOV抗体ELISA检测方法在EBOV免疫血清抗体水平检测中的应用。优化后的间接ELISA方法可特异性检测EBOV抗体,与西尼罗病毒等的阳性血清均不发生反应,检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相平行。批内、批间试验变异系数均小于8%。本研究成功建立了EBOV抗体间接ELISA检测方法,为EBOV免疫血清抗体水平检测提供了一种简便、快速的检测方法。; 曹增国王化磊盖微微盖微微郑学星李岭金宏丽冯娜李岭王丽娜冯娜毕玉海赵永坤夏咸柱; 关键词：埃博拉病毒间接ELISA

双抗体夹心ELISA定量检测狂犬病病毒糖蛋白方法的建立及初步应用被引量：3: 2016年; 目的定量检测狂犬病病毒病毒样颗粒糖蛋白含量。方法以狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体作为捕获抗体,狂犬病病毒多克隆抗体作为检测抗体,标准品为以细胞半数感染量（TCID50）准确定量的狂犬病病毒SRV9毒株病毒液,建立检测狂犬病病毒糖蛋白（RABV-GP）含量的双抗体夹心ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、重复性和灵敏度。结果双抗体夹心ELISA定量检测方法最佳工作条件为：狂犬病病毒糖蛋白蛋白单克隆抗体包被浓度为2.5μg/ml,4℃包被过夜;1%BSA,37℃封闭2h;狂犬病病毒多克隆抗体1∶200稀释,37℃孵育1.5h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育1h;TMB室温避光显色30min。结论该方法可特异性定量检测狂犬病病毒,与犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬传染性肝炎病毒均不发生反应。该方法线性检测范围为1×10^4～1.0×10^7 TCID50/ml,平均批内变异系数小于6%,平均批间变异系数小于8%。; 孙宏宇王化磊金宏丽李岭闫飞虎曹增国冯娜王铁成徐盾黄耕赵永坤高玉伟杨松涛夏咸柱; 关键词：狂犬病病毒双抗体夹心ELISA 糖蛋白

委内瑞拉马脑炎疫苗研究进展: 2015年; 委内瑞拉马脑炎是一种由蚊虫传播的人兽共患病毒性传染病。我国虽然尚未发现委内瑞拉马脑炎病例,但随着国际交流的日益频繁,该病传入我国的风险大大增加。该病目前尚无特效药及疗法,预防接种安全高效的疫苗对减少疾病暴发起着非常关键的作用。本文对委内瑞拉马脑炎疫苗的最新研究进展进行综述,旨在为该病的新型疫苗研究及防控策略的制定提供参考。; 曹增国王化磊王丽娜杨松涛夏咸柱; 关键词：脑炎病毒疫苗流行病学

鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1: 2017年; 目的构建鼠源Bif-1(Bax-interacting factor-1)蛋白7种选择性剪接异构体(alternatively spliced isoforms)真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中表达。方法以提取的N2a细胞总RNA为模板,采用RT-PCR、重叠延伸PCR等方法扩增目的基因Bif-1(transcript variant 1、transcript variant 2、transcript variant 3、transcript variant x1、transcript variant x2、transcript variant x3、e),并将目的基因连入真核表达载体p IRES2-EGFP,构建重组质粒。重组质粒经鉴定正确后经脂质体介导转染BHK和N2a细胞,采用荧光显微镜观察及Western blot法检测转染细胞中Bif-1蛋白的表达。结果琼脂糖凝胶电泳可见与预期大小相符的核酸条带;重组质粒经PCR、双酶切、测序鉴定证明构建正确;重组质粒转染BHK或N2a细胞后荧光显微镜下可见绿色荧光;Westen blot可检出相应大小的目的条带。结论成功构建了鼠源Bif-1蛋白7种选择性剪接异构体真核表达质粒,并在BHK和N2a细胞中获得表达。为进一步探索Bif-1蛋白不同选择性剪接异构体的生物学功能,研究其在细胞自噬、细胞凋亡以及抗肿瘤等方面的作用奠定了基础。; 侯朋飞金宏丽金宏丽曹增国李岭曹增国吴芳芳闫飞虎李国华赵永坤高玉伟王化磊; 关键词：真核细胞基因表达

血凝-血凝抑制试验在快速诊断犬细小病毒性肠炎中的应用被引量：3: 2015年; 对38份疑似细小病毒性肠炎病犬粪便样品以HA-HI方法进行了检测,同时与免疫金标检测试纸和PCR检测方法进行比较。结果显示,HA-HI、免疫金标检测试纸和PCR 3种方法检测的阳性率分别为84.2%(32/38)、92.1%(35/38)和89.4%(34/38)。与PCR方法相比,HA-HI检测方法的敏感性和特异性分别为94.1%和100%,免疫金标检测试纸的敏感性和特异性分别为94.1%和25%。结果表明,HA-HI检测方法的特异性比免疫金标检测试纸好,敏感性略低于PCR,适用于基层单位对犬细小病毒性肠炎的快速诊断。; 马爱民李倩王超赵国星程楠金宏丽曹增国赵永坤郑学星高玉伟王化磊杨松涛; 关键词：犬细小病毒性肠炎

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