小泽敬也
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 帕金森病大鼠TH和AADC基因的共转导研究被引量：2
- 1998年
- 目的：探讨在多巴胺水平对帕金森病进行直接转基因调控。方法应用腺伴随病毒（ＡＡＶ）载体共转导酪氨酸羟化酶（ＴＨ）和芳香族氨基酸脱羧酶（ＡＡＤＣ）基因于模型大鼠纹状体，以复合感染方式将ＡＡＶＴＨ和ＡＡＶＡＡＤＣ通过立体定向法注射入帕金森病大鼠病损侧纹状体，连续观测转导后大鼠行为改善情况，并以免疫组化方法测定ＴＨ和ＡＡＤＣ表达。结果ＴＨ和ＡＡＤＣ基因共转导较单纯ＴＨ基因转导更明显改善大鼠行为（Ｐ＜００１），组织学证据表明两基因在纹状体内获有效而稳定的共表达。结论ＴＨ和ＡＡＤＣ基因的共转导策略，对提高帕金森病基因治疗疗效有重要意义。
- 樊东升小川松夫中野今治永津俊治小泽敬也
- 关键词：帕金森病基因转移THAAV
- 新型Tet-On反式激活因子对GDNF基因腺相关病毒载体表达调控的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 通过在胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因腺相关病毒(AAV)表达载体中插入改良的Tet On调控因子,达到有目的调节GDNF的表达,避免基因过度表达或重组可能对宿主产生的危害。方法 首先在pAAV- GDNFflag前病毒质粒的hHG部分插入寡核苷酸序列,通过含相应酶切位点的引物,聚合酶链反应(PCR)扩增反式激活因子rtTA_2s S_2和四环素反应元件 (TRE),并插入寡核苷酸序列,构建pAAV- rtTA_2s -S_2- TRE -GDNFflag。与辅助质粒共转染HEK293细胞完成重组腺相关病毒(rAAV)载体的包装,氯化铯梯度超速离心分离病毒裂解液,半透膜提纯病毒载体,实时定量PCR(RQ- PCR)检测病毒效价。rAAV感染HEK293细胞,荧光显色和Western印迹法检测rtTA_2s S_2的体外调控;rAAV感染Wistar小鼠腓肠肌,酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测GDNF基因表达的体内调控。结果 体外实验强力霉素阳性组Western印迹可见明显GDNF条带,阴性组未见;体内实验强力霉素阳性组GDNF在 2周内表达 (32 .6pg/ml±2 .6pg/ml),高于强力霉素阴性组 ( 10 .1pg/ml±2 .4pg/ml),差异有统计学意义。结论 Tet -On反式激活因子rtTA_2s S_2、TRE和GDNF基因可构建在同一AAV载体,通过调节诱导剂强力霉素的浓度,rtTA2s -S2在体内和体外均能有效调控下游目的基因GDNF的表达。
- 陈腾李新钢吴承远冈田尚己小泽敬也
- 关键词：GDNF基因强力霉素酶切位点目的基因腺相关病毒载体
- 帕金森病大鼠多巴胺合成酶基因的三重共转导研究
- 2001年
- 目的 探讨多巴胺合成酶基因的三重共转导能否进一步提高帕金森病大鼠纹状体多巴胺的生成。方法 以复合感染的方式，将分别构建编码酪氨酸羟化酶（ＴＨ）、芳香族氨基酸脱羧酶（ＡＡＤＣ）和三磷酸鸟苷环水解酶Ｉ（ＧＣＨ）基因的腺伴随病毒（ＡＡＶ）载体，通过立体定向法注射入帕金森病大鼠损毁侧纹状体。用高效液相色谱法进行纹状体ＢＨ４和多巴胺含量的测定；采用免疫组化方法确定ＴＨ、ＡＡＤＣ和ＧＣＨ在纹状体内的表达。结果 三重目的基因共转导可使大鼠纹状体ＢＨ４和多巴胺合成量的增加较ＴＨ和 ＡＡＤＣ三重基因转导进一步提高（Ｐ＜０．０５），组织学依据证明三种目的基因可在同一纹状体神经细胞内共同进行表达。结论 ＴＨ、ＡＡＤＣ和 ＧＣＨ三重基因共表达这一方法对探寻更为有效的帕金森病基因治疗策略可能具有重要的意义。
- 沈扬樊东升王立军康德瑄中野今治小泽敬也永津俊治
- 关键词：帕金森病腺伴随病毒基因治疗
- 培养纹状体神经细胞TH和AADC基因的共转导研究
- 1998年
- 培养纹状体神经细胞ＴＨ和ＡＡＤＣ基因的共转导研究樊东康德中野今治永津俊治ＧａｒｙＪ．Ｋｕｒｔｚｍａｎ小泽敬也帕金森病不仅脑内多巴胺明显减少，其合成所需酪氨酸羟化酶（ＴＨ）和芳香族氨基酸脱羧酶（ＡＡＤＣ）活性也明显降低［治疗，１９９４，７６：１１２...
- 中野今治永津俊治GaryJ.Kurtzman小泽敬也
- 关键词：纹状体多巴胺能神经细胞培养神经细胞基因修饰高效液相
- 全文增补中
- 腺伴随病毒载体介导纹状体神经细胞基因转导的研究
- 1998年
- 目的探讨腺伴随病毒（ＡＡＶ）载体系统在纹状体有关结构中的转导特性。方法以ＡＡＶＬａｃＺ基因转导离体及在体纹状体神经细胞。用Ｘｇａｌ染色确定ＬａｃＺ基因的表达。结果ＡＡＶＬａｃＺ基因在离体纹状体神经细胞的转导具有剂量与时间依存性特点；在在体纹状体神经细胞内的表达则可稳定持续至少长达３个月以上。结论ＡＡＶ载体系统可在纹状体有效转导并稳定表达外来基因。
- 樊东升康德GaryJ.Kurtzman小泽敬也
- 关键词：纹状体基因转导腺伴随病毒神经系统疾病
- 帕金森病大鼠三重目的基因共表达的长期行为改善被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨多巴胺合成酶基因的三重共转导对帕金森病基因治疗的效果。方法 分别构建编码酪氨酸羟化酶 (TH)、芳香族氨基酸脱羧酶 (AADC)和三磷酸鸟苷环水解酶I(GCH)基因的腺伴随病毒 (AAV)载体 ,用复合感染的方式将AAV TH、AAV AADC及AAV GCH通过立体定向法注射入帕金森病大鼠损毁侧纹状体。采用免疫组化方法确定TH、AADC和GCH的表达 ;并连续观测基因转导后大鼠行为改善的情况长达 1年。结果 组织学依据显示TH、AADC和GCH基因均可在纹状体内长期有效而稳定的进行表达 ;三重基因转导可引起大鼠较TH和AADC共转导更为显著的行为改善(P <0 0 1)。结论 AAV载体介导的TH、AADC和GCH三重基因纹状体内共表达对于帕金森病大鼠的基因治疗更为有效。
- 沈扬樊东升王立军康德瑄中野今治小泽敬也永津俊治
- 关键词：依赖病毒帕金森病基因疗法
- 不同血清型的重组腺相关病毒载体对成熟肌纤维转导的研究被引量：3
- 2005年
- 目的探讨不同血清型对成熟肌纤维的转导效率。方法我们用不同的血清型AAV(rAAV-1,rAAV-2,rAAV-3和rAAV-5)表达LacZ和GDNF基因研究在小鼠骨骼肌转导效率,转基因表达用组化方法或ELISA来评定。结果在3周龄的小鼠中,LacZ组化染色显示rAAV5在慢和快的肌纤维中都有效的转导,而rAAV2和rAAV3优先在慢纤维中转导。在8周龄的小鼠(成年鼠)中,rAAV3和rAAV5在慢纤维和快纤维中都有效的转导。用rAAV3-LacZ或rAAV5-LacZ优先转导的慢纤维与rAAV2相比没有显著性差异。用8周龄的小鼠肌肉注射不同血清型的rAAV-GDNF后,结果显示rAAV1-GDNF表达最高;rAAV2、rAAV3和rAAV5在骨骼肌的表达也有效。结论在肌肉基因转导中,rAAV3和rAAV5介导的载体都是有效的,能克服rAAV2所受到的限制。
- 李小刚樊东升村松慎一小泽敬也中野今治
- 关键词：腺相关病毒血清型骨骼肌
- 帕金森病大鼠模型中转基因表达对多巴胺水平的调控研究
- 2007年
- 目的究设计一种病毒载体介导的体内调节系统,依据诱导性Cre重组酶来调控转基因治疗帕金森病大鼠的基因表达。方法将重组腺相关病毒(AAV)载体表达的Cre重组酶融合到雌激素受体的配体结合区,与AAV载体表达的多巴胺合成酶一起转导到帕金森病大鼠模型中。用合成的雌激素受体调节剂他莫昔芬处理。结果诱导位于LoxP侧面的酪氨酸羟化酶(TH)序列选择性的敲掉,导致多巴胺的合成减少,而芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)的表达不受影响,从而保持左旋多巴的疗效。结论病毒载体介导的诱导性的Cre重组酶在体内的应用可作为一种分子开关,对转基因表达进行时空调控,从而增加基因治疗的安全性。
- 李小刚樊东升肖卫忠沈扬村松慎一小泽敬也中野今治
- 关键词：帕金森病腺相关病毒基因调控CRE重组酶多巴胺
- 腺伴随病毒载体介导帕金森病基因治疗的实验研究被引量：1
- 2001年
- 沈扬樊东升王立军康德瑄中野今治小泽敬也永津俊治
- 关键词：帕金森病基因治疗
