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携带丙型肝炎病毒非结构蛋白3基因的重组腺病毒构建研究被引量：2: 2005年; 目的构建表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白3(NS3)的复制缺陷型重组腺病毒,为防治HCV感染的基因免疫和基因治疗提供实验基础。方法将HCV NS3基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后,转染293细胞进行包装,并反复感染293细胞进行扩增。结果通过PCR扩增、酶切、核酸测序及Western杂交法检测鉴定,均证实插入穿梭质粒中的片段为HCV NS3基因(基因型1b);所包装出的复制缺陷型重组腺病毒AdEasy-GFP-NS3具有良好的感染能力,并可在293细胞中表达HCV NS3蛋白。结论AdEasy-GFP-NS3携带有HCV NS3基因,能有效地感染293细胞并高效表达,从而为丙型肝炎基因疫苗的进一步研究奠定了基础。; 周陶友陈敏李卫华赵连三何芳刘丽唐红; 关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白3 重组腺病毒疫苗基因治疗

表达丙型肝炎病毒非结构蛋白3的重组腺病毒免疫小鼠的研究: 2007年; 目的构建表达HCV非结构蛋白3(NS3)的重组腺病毒RAd/NS3,探讨其免疫小鼠后诱导机体产生特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增编码NS3蛋白(329～935位氨基酸)的基冈片段,定向克隆至重组腺病毒AdEasy-1系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上,与腺病毒基因组质粒pAdEasy-1共转化BJ5183菌,利用细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒,转染293细胞,以包装、扩增重组腺病毒。将重组腺病毒以1×10~8 pfu剂量经皮下注射免疫BALB/c小鼠,并以100μg重组质粒pRC/ NS3经肌内注射途径免疫小鼠为对照。ELISA法检测免疫小鼠血清抗体水平,^(51)Cr释放法检测免疫小鼠细胞毒性T淋巴细胞体外杀伤功能。结果重组腺病毒经皮下免疫小鼠后可刺激机体产生较强的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,且免疫效果强于重组质粒pRC/NS3组,初次免疫后2周,前者20只小鼠抗-HCV全部阳转,而后者10只小鼠仅3只阳转.未观察到明显的不良反应。结论表达HCV NS3抗原的重组腺病毒载体疫苗能够诱导机体产生有效的体液和细胞免疫应答。; 李卫华赵连三周陶友何芳刘丽刘聪; 关键词：腺病毒科肝炎病毒

表达丙肝病毒NS3抗原的重组腺病毒构建及体外表达: 丙型肝炎严重危害人类健康,治疗困难,研制疫苗对预防HCV感染具有重要意义,但迄今进展不大。其主要原因是,能激发保护性免疫的HCV抗原表位未得到确定,以及HCV的高度变异性。因此, 要获得有效防治HCV感染的疫苗,必须能够...; 李卫华赵连三周陶友何芳刘丽刘聪; 文献传递

表达丙型肝炎病毒NS3抗原的重组腺病毒构建及体外表达被引量：4: 2005年; 为探索研制丙型肝炎疫苗的新途径,以期获得防治丙型肝炎的重组腺病毒减毒活疫苗,我们构建了表达丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus ,HCV)非结构蛋白3(non structural protein 3,NS3)抗原的重组腺病毒RAd NS3,并检测其在体外表达。应用PCR从真核表达质粒pRC/NS3 中扩增编码HCV NS3 蛋白(329-935aa)的基因片段,定向克隆到重组腺病毒AdEasy-1系统的穿梭质粒pAdTrack CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带HCV NS3基因的重组腺病毒基因组质粒pAd HCV NS3,转染293 细胞,成功包装出重组腺病毒RAd NS3,利用它有效地感染人肝癌细胞株HepG2,经RT PCR及免疫印迹等不同方法检测表明,被感染细胞能表达HCVNS3蛋白,为后续进行重组腺病毒在动物体内诱导抗HCV免疫应答能力的研究奠定了基础。; 李卫华赵连三周陶友何芳刘丽刘聪; 关键词：腺病毒丙型肝炎病毒 NS3 同源重组

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李卫华