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头状轮生链霉菌中丝裂霉素C抗性基因的克隆及功能研究被引量：7: 1999年; 头状轮生链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｓ）ＡＴＣＣ２７４２２是抗肿瘤药物丝裂霉素的主要产生菌，实验通过诱变筛选获得不产生丝裂霉素同时对丝裂霉素Ｃ敏感的阻断变种Ｓ６，并以它为受体宿主，以质粒ｐＩＪ６９９为载体，建立野生型头状轮生链霉菌菌株ＡＴＣＣ２７４２２的基因库。采用鸟枪法克隆技术，从库中筛选获得含有丝裂霉素Ｃ抗性基因的６２ｋｂ外源片段的克隆子。将含此外源片段的质粒ｐＬＸ５导入变铅青链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｖｉｄａｎｓ）获得表达。并且首次成功地运用电穿孔法将ｐＬＸ５导入野生型菌株中，使其对丝裂霉素Ｃ的抗性大幅度提高：最低抑制浓度（ＭＩＣ）由原来的２００μｇ／ｍＬ上升至１０００μｇ／ｍＬ以上。摇瓶发酵实验表明：单位菌量的ＡＴＣＣ２７４２２（ｐＬＸ５）的丝裂霉素产量高于野生菌株ＡＴＣＣ２７４２２，因此丝裂霉素Ｃ; 黄健强陆小燕毛应清杨蕴刘焦瑞身; 关键词：丝裂霉素C 抗性基因电穿孔

地中海拟无枝菌酸菌U-32的3-氨基5-羟基苯甲酸合成酶(AHBAS)基因的克隆与序列分析被引量：2: 1999年; 地中海拟无枝菌酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）Ｕ３２是一种临床上重要的抗生素———力复霉素ＳＶ的产生菌。研究表明，在地中海拟无枝菌酸菌的力复霉素生物合成过程中，３氨基５羟基苯甲酸合成酶（ＡＨＢＡＳ）是合成中间体Ｃ７Ｎ母核（又称ＡＨＢＡ）的关键酶。通过筛选以广宿主粘粒（Ｃｏｓｍｉｄ）ｐＬＡＦＲ３为载体构建的地中海拟无枝菌酸菌Ｕ３２的基因文库，获得６个阳性克隆子。将含有ＡＨＢＡＳ基因的约２５ｋｂ的片段克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ和ＫＳ上，进行酶谱分析得到其在染色体上的初步定位。序列测定表明地中海拟无枝菌酸菌Ｕ３２中的ＡＨＢＡ合成酶基因，由１１６７ｂｐ组成，起始密码子为ＡＴＧ，终止密码子为ＴＧＡ，共编码３８８个氨基酸，所克隆到的ＡＨＢＡ合成酶基因在大肠杆菌的启动子控制下获得诱导表达，蛋白分子量约为４３ｋＤ。; 黄健强姜卫红赵国屏杨蕴刘焦瑞身; 关键词：羟基苯甲酸合成酶基因克隆

丝裂霉素的研究与展望被引量：9: 1999年; 丝裂霉素是临床上一种重要的抗肿瘤抗生素,本文通过描述丝裂霉素的作用机制、生物合成及其在医学上的广泛应用,对丝裂霉素的研究现状及应用前景作一综合概述.; 黄健强毛应清杨蕴刘; 关键词：丝裂霉素抗肿瘤抗生素

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黄健强