廖瑛
- 作品数：52 被引量：71H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- IBV通过p38和DUSP6调节IL6、8的表达
- 引言鸡传染性支气管炎病毒(IBV)是冠状病毒的代表毒株。它是具有27.6 kb长的正链单链RNA基因组的囊膜病毒。IBV感染鸡群,往往引起高传染性的急性呼吸道疾病。它能够感染鸡的上呼吸道的纤毛细胞和粘液分泌细胞。在被感染...
- 廖瑛丁铲王晓星刘定祥
- 新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定被引量：1
- 2019年
- 副黏病毒磷蛋白,即P蛋白(phosphoprotein),富含丝氨酸和苏氨酸,在自然条件下磷酸化水平较高。副黏病毒P蛋白的磷酸化对病毒的转录和复制具有重要的作用,但新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P蛋白磷酸化位点及其功能依然尚不明确。本研究通过LC-MS/MS质谱对NDV La Sota病毒P蛋白的磷酸化位点进行了检测,鉴定了Ser56、Ser77、Thr78、Thr82、Ser164和Ser141六个磷酸化位点。通过在线分析,预测这些磷酸化位点的磷酸化激酶分别是PKC、CKII和GSK3。为了鉴定6个磷酸化位点的生物学功能,在已建立的表达GFP基因的NDV微型基因组质粒pTVT-LGT基础上,用荧光素酶报告基因(luciferase)替换GFP报告基因,建立了表达荧光素酶的NDV微型基因组系统。利用“丙氨酸扫描”对6个磷酸化位点进行突变后,在NDV微型基因组平台中进行功能鉴定。结果显示,T78、T82和S164位磷酸化位点的缺失显著影响了病毒RNA依赖性RNA聚合酶复合体(RNA dependent RNA polymerase,RdRp)的复制,其生物学意义有待进一步的研究。
- 李继红徐腾飞张耀丹汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲
- 关键词：新城疫病毒质谱磷酸化位点
- 鸡G3BP1在新城疫病毒感染诱导应激颗粒形成过程中的作用
- 2017年
- 为掌握鸡细胞中应激颗粒(stress granules,SGs)形成机制,以及鸡GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)在新城疫病毒(NDV)感染诱导SG形成过程中的作用,用NDV感染HeLa细胞,免疫荧光试验检测内源性G3BP1的定位,外源转染鸡G3BP1和各分段结构域,以不同应激处理之后观察与内源性SG标志物共定位现象,最后转染G3BP1之后感染NDV,以Western blot和TCID50检测病毒复制情况。结果显示:NDV感染能够诱导内源性G3BP1聚集形成SG,将鸡G3BP1分别转染至HeLa、DF-1和CEF后,以不同应激处理之后均能在细胞中观察到SG。将鸡G3BP1不同结构域分别转染HeLa细胞,以氧化应激和NDV分别处理,结果显示G3BP1的RNA结合结构域对聚集至关重要,而NTF2样结构域不能被招募到SGs中,并且抑制原有SGs的形成。最后证实G3BP1过表达能够增强病毒复制,说明SG在NDV复制过程中发挥促进作用。综合以上结果表明:鸡G3BP1在鸡SG形成过程中至关重要,鸡SG能够促进NDV复制,这为进一步研究NDV和禽源细胞互作奠定了基础。
- 张频孙英杰郑航毛旭明仇旭升谭磊孟春春宋翠萍廖瑛丁铲马卫明
- 关键词：新城疫病毒
- 应用G3BP1稳转细胞系监测应激状态下的应激颗粒形成被引量：2
- 2020年
- 哺乳动物细胞受到应激刺激后,会在细胞中形成致密的颗粒状结构,该结构被称为应激颗粒(stress granules,SG),其中G3BP1是应激颗粒重要的组成成分和标志蛋白。为了动态监测SG的形成情况,构建稳定表达GFP-G3BP1蛋白的HeLa细胞系。首先,扩增G3BP1基因,并将其克隆到慢病毒载体中,从而获得重组质粒Lenti-GFP-G3BP1,利用三质粒慢病毒包装系统包装为表达GFP-G3BP1蛋白的慢病毒颗粒,并感染HeLa细胞,通过嘌呤霉素初步筛选阳性细胞,随后,采用有限稀释法筛选出稳定表达GFP-G3BP1蛋白的HeLa单克隆细胞系,并采用Western blot和直接免疫荧光方法检测细胞系中GFP-G3BP1蛋白的表达及功能。结果发现,在荧光显微镜下可以观察到明显的G3BP1细胞质特异性荧光,Western blot结果显示GFP-G3BP1特异性条带,说明稳定表达GFP-G3BP1的HeLa细胞系构建成功。最后,作者利用亚砷酸钠/热休克/新城疫病毒处理细胞系后对GFP-G3BP1表达形态进行动态监测,证实了细胞受到刺激后,SG逐渐积累的过程。该细胞和相关动态监测方法为后续SG和新城疫病毒的相关研究奠定了基础。
- 邵琪屈阳朱子晨孟春春仇旭升廖瑛谭磊宋翠萍刘炜玮孙英杰丁铲
- 关键词：新城疫病毒病毒感染
- 鸡源锌指蛋白ZEB1基因解析及其在新城疫病毒感染中的作用研究
- 2017年
- 锌指蛋白ZEB1(zinc finger E-box binding homeobox 1)是一种在不同物种中相对保守的转录因子,尤其在发生肿瘤的组织中具有较高的表达水平。为了证实禽类锌指蛋白ZEB1在新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染中的作用,本研究扩增获得了鸡源ZEB1的基因序列,并通过生物信息学软件对不同物种的ZEB1基因进行了同源性比对。通过Real-time PCR技术测定NDV感染DF-1细胞、CEF细胞以及SPF鸡后ZEB1的表达量变化,证实NDV感染可使细胞中的ZEB1含量显著升高。但是在细胞中过表达ZEB1对NDV的增殖和蛋白表达没有明显的影响,其生物学意义有待进一步研究。
- 汪伟张耀丹任亭亭孟春春谭磊孙英杰宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲罗廷荣
- 关键词：新城疫病毒锌指蛋白病毒增殖
- 感染新城疫病毒时,中枢信号蛋白RIP1在TNF-α/TRAIL介导的细胞凋亡和坏死性凋亡过程中的调控
- 新城疫病毒（NDV）是一种溶瘤病毒,它有选择性地在肿瘤细胞中复制,并通过促进细胞死亡来产生抗肿瘤细胞毒性活动。在本次研究中,我们着重于描述HeLa细胞中NDV诱导细胞死亡的潜在机制。我们发现NDVHert/33菌株在晚期...
- 廖瑛王华夏茅翔丁铲
- 关键词：新城疫病毒细胞凋亡程序性坏死
- 文献传递
- 鸡CMPK2的原核表达及其抗H9N2禽流感病毒的初步研究
- 2022年
- 为研究鸡CMPK2基因的遗传进化特点和生物学功能,本研究以鸡成纤维细胞系(DF-1)为模板,通过RT-PCR扩增鸡CMPK2基因完整阅读框(ORF)(762 bp),利用MEGA7软件对CMPK2氨基酸序列进行同源性和遗传进化分析。并构建了重组质粒p3xFLAG-CMV-14-CMPK2和重组原核表达载体pET-28a-CMPK2,利用原核载体表达CMPK2目的蛋白后制备小鼠抗鸡CMPK2的多克隆抗体,并采用western blot检测其反应性。构建的CMPK2氨基酸序列进化树结果显示,鸡CMPK2与爬行类动物CMPK2遗传关系较近,而与哺乳动物CMPK2氨基酸序列的遗传距离相对较远。为研究鸡CMPK2是否具有抗病毒功能,利用H9N2禽流感病毒(AIV)感染DF-1细胞,感染后6 h、12 h时分别采用荧光定量PCR及western blot方法检测鸡CMPK2基因转录水平和蛋白表达情况,结果显示H9N2 AIV感染能够引起鸡CMPK2 mRNA转录水平和蛋白表达水平的明显上调。进一步利用DF-1细胞过表达CMPK2及利用特异性siRNA干扰CMPK2的表达后,分别采用荧光定量PCR及western blot检测鸡CMPK2蛋白对H9N2 AIV复制的影响。荧光定量PCR以及western blot结果显示,过表达鸡CMPK2蛋白可以抑制H9N2 AIV的增殖。而下调鸡CMPK2蛋白的表达后H9N2 AIV增殖水平显著上升(P<0.01)。上述结果首次证实,鸡CMPK2是H9N2 AIV复制的负调控因子,能够抑制AIV的复制。本研究丰富了AIV与抗病毒宿主因子的研究内容,也可为抗禽类病毒感染药物靶点的研究提供重要参考。
- 李鑫刘炜玮谭磊谭磊孙英杰宋翠萍廖瑛丁铲仇旭升
- 关键词：遗传进化病毒复制
- 新城疫病毒调控宿主YB-1蛋白的初步研究
- 张世伟仇旭升丁铲周昌娈孙英杰谭磊宋翠萍孟春春廖瑛茅翔王桂军
- 鸡淋巴信号活化分子CD150基因的扩增、表达和氨基酸序列分析
- 2021年
- CD150蛋白是副黏病毒的重要受体,能够促进病毒与宿主细胞结合并感染。本研究旨在克隆鸡CD150基因后进行原核表达,并对获得的氨基酸序列进行详细分析,为后续基因功能研究奠定基础。从原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中扩增得到CD150 CDS序列,将其克隆入pMD19-T载体中进行测序鉴定,将其在pET-28b原核表达载体中表达,并制备多克隆抗体,最后,通过生物信息学软件对CD150进行氨基酸序列分析。结果显示:成功克隆大小为999 bp的鸡CD150基因;鸡CD150蛋白以包涵体形式表达;所制备的多克隆抗体能够特异性结合鸡淋巴细胞表面的CD150蛋白;二级结构中α-螺旋占25.83%,β-折叠占23.42%,无规则卷曲占50.75%;跨膜区分析可知,CD150蛋白包括胞外区、胞内区和跨膜区;三级结构以β-折叠为主,包括V和C2两个结构域,不同物种V结构域中存在7个完全保守的氨基酸位点。本研究成功克隆、表达了鸡CD150蛋白,并制备多克隆抗体,为鸡CD150蛋白生物学功能研究检测及其在鸡组织中的表达和分布提供数据支持。
- 方文秀谭磊孙英杰宋翠萍刘炜玮廖瑛丁铲仇旭升吴艳涛
- 关键词：基因克隆原核表达多克隆抗体氨基酸序列分析
- DUSP6通过负向调控ERK1/2通路抑制IBV的增值被引量：4
- 2019年
- 为了阐明ERK(extracellular signal-regulated protein kinases)1/2通路在传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)复制过程中的作用以及双特异性磷酸酶6(dual specificity phosphatase 6,DUSP6)对ERK的反馈性负向调控在IBV复制过程中的作用。本研究通过Western blot、Northern blot检测发现:IBV感染Vero和H1299细胞可导致ERK1/2的磷酸化水平和DUSP6表达均上调;利用MEK1/2特异性抑制剂U0126处理病毒感染的细胞后,可明显下调ERK1/2的磷酸化,同时抑制病毒的增殖;利用DUSP6的特异性抑制剂BCI抑制DUSP6的活性或者用siRNA阻断DUSP6的表达后,再感染IBV,发现ERK1/2的磷酸化水平增高,病毒蛋白的表达上调。综上,推测IBV感染细胞激活ERK1/2信号通路,有助于病毒的复制,同时,细胞通过诱导表达DUSP6,负向调控ERK1/2的磷酸化水平,抑制病毒增殖。
- 王欢丁铲刘定祥廖瑛
- 关键词：传染性支气管炎病毒ERK1/2通路病毒复制
